胶体金免疫层析法检测CrAg对非HIV感染肺隐球菌病患者疗效的评估价值*

李娜娜，施婷，蔡明豪，李艳娟，贺勇

（1.重庆医科大学附属永川医院 检验科，重庆 402160；2.郑州大学第一附属医院呼吸科，河南 郑州 450052）

肺隐球菌病是指隐球菌导致的急性肺部感染，目前感染该症的主要病原体为隐球菌[1]。隐球菌作为机会性病原体，主要成分为荚膜多糖，其不仅是主要毒性因子，同时也是特异性的抗原基础[2-3]。目前，人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）感染的诊疗水平不断发展，HIV 患者合并肺隐球菌病的情况有所控制，发病率上升放缓[4]；然而随着免疫抑制剂的高频率使用，非HIV感染患者肺隐球菌病的发病率逐渐上升[5-6]。目前对隐球菌荚膜多糖抗原（cryptococcal capsular polysaccharide antigen,CrAg）的检测大多集中在HIV患者，在非HIV 感染患者中应用较少[7-8]；并且临床呼吸道检出率不高，培养时间长，无法满足临床诊断的实际需要，因此当前的诊断还是依靠血清学检测[9]。胶体金免疫层析法（lateral flow assay,LFA）是近年来诊断隐球菌病的新方法[10]，敏感性高、操作便捷、经济实用，属于检测血清CrAg 的首选方式。因此，本研究就LFA 检测CrAg 对非HIV 感染肺隐球菌病患者的疗效评估价值进行分析。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2019年1月—2020年12月在重庆医科大学附属永川医院就诊的114 例非HIV 感染肺隐球菌病患者。患者年龄40～75 岁，平均（51.89±9.37）岁。为避免抗真菌治疗对结果造成影响，本研究剔除接受抗真菌治疗和失访的患者。纳入标准：临床诊断为肺隐球菌感染[11]；行组织病理检查和CrAg-LFA 检测；患者均知情同意。排除标准：HIV 患者；恶性肿瘤；肝肾功能不全；自身免疫性疾病；经皮肺活检禁忌证；糖尿病、肺结核或糖皮质激素使用史；临床资料不全。

1.2 资料收集

根据CrAg 抗原检测结果将患者分为阳性组和阴性组，利用医院信息系统查询患者年龄、性别、基础疾病等一般临床特征，记录患者临床症状（咳嗽、咯痰、发热及胸闷、气短）、实验室指标[C 反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、白细胞计数（white blood cell,WBC）]、影像学特征（胸部CT 表现、病灶部位、累及肺叶、病变范围）。

1.3 LFA检测CrAg

抽取患者静脉血4 mL于无菌采血管中，1 500 r/min离心10 min，取上层血清，将样本稀释液加入无菌试管，与40 μL 血清混合，再将隐球菌抗原检测试纸浸入混合液中，10 min 后读取结果，检测线和对照线均出现，表示检测结果为阳性；若仅对照线出现为阴性；对照线未出现则重新检测，检测试剂盒购自美国Immuno Mycologics 公司。

1.4 治疗及疗效评估

根据美国感染性疾病协会隐球菌治疗指南（2010）[12]对肺隐球菌病患者进行诊治，重症患者采用两性霉素注射液联合氟胞嘧啶片治疗，播散性患者予以氟康唑治疗。疗效标准[13]：①治愈，肺部病灶吸收面积＞75%，临床症状消失；②好转，肺部病灶吸收面积50%～75%，临床症状明显缓解；③进步，肺部病灶吸收面积＜50%，临床症状稍缓解；⑤无效，病灶无吸收，临床症状基本无变化。

1.5 统计学方法

数据分析采用SPSS 24.0 统计软件，非正态分布的计量资料以中位数和四分位数[M（P25，P75）]表示，比较用秩和检验；正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用独立t检验；计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验；等级资料以频数表示，比较用秩和检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同临床特征患者的CrAg阳性率比较

不同性别、年龄、CRP、WBC 非HIV 感染肺隐球菌病患者的CrAg 阳性率比较，经χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05）；不同临床症状非HIV 感染肺隐球菌病患者的CrAg 阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同临床特征非HIV感染肺隐球菌病患者CrAg阳性率比较 例（%）

2.2 不同影像学特征患者的CrAg阳性率比较

不同胸部CT 表现、病灶分布、累及肺叶、病变范围非HIV 感染肺隐球菌病患者的CrAg 阳性率比较，经χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 不同影像学特征非HIV感染肺隐球菌病患者的CrAg阳性率比较 例（%）

2.3 LFA与组织病理检查结果比较

以组织病理检查结果为金标准。114 例患者中，组织病理检查CrAg 抗原阳性40 例，其中CrAg-LFA 检测38 例阳性，2 例阴性；组织病理检查CrAg抗原阴性74 例，且CrAg-LFA 检测均为阴性。LFA的敏感性为95%（95% CI：0.818，0.991），特异性为100%（95% CI：0.939，1.000），阳性预测值为100%（95%CI：0.886，1.000），阴性预测值为97.37%（95%CI：0.900，0.995）。

2.4 CrAg 阳性患者不同时间点的CrAg 滴度和疗效比较

CrAg 阳性患者不同时间点的CrAg 滴度比较，经秩和检验，差异有统计学意义（H=11.684，P=0.009），随着治疗时间推移，CrAg 的滴度呈下降趋势。CrAg 阳性患者不同时间点的疗效比较，经秩和检验，差异有统计学意义（H=16.936，P=0.001），无效1 例，11 例患者治疗过程中CrAg 检测逐渐转阴，其余患者治愈或好转。见表3。

表3 CrAg阳性患者不同时间的CrAg滴度和疗效比较 （n=114）

2.5 不同滴度CrAg阳性患者治疗1年后的疗效比较

取治疗前CrAg 滴度的中位数1∶140 为截断值，分为高滴度组（CrAg 滴度＞1∶140）和低滴度组（CrAg 滴度≤1∶140）。治疗1年后，高滴度组与低滴度组的疗效比较，经秩和检验，差异有统计学意义（H=9.024，P=0.003），低滴度组疗效较好。见表4。

表4 不同滴度CrAg阳性患者治疗1年后的疗效比较 例（%）

3 讨论

肺隐球菌病属于新生隐球菌及其变种引起的一种肺部真菌疾病，发病率位于肺部真菌疾病前列[14-15]，多表现为慢性疾病，发病较隐匿，增加了临床检测的难度。尽管检测手段不断改进，但由于肺隐球菌病的影像学、实验室检查及临床特征特异性不强，易导致误诊、漏诊，因此有延误患者治疗的风险[16]。肺穿刺病理活检为常用诊治肺隐球菌病的手段，成功率较高，但由于肺隐球菌病结节和肿块的影像学表现与肺结核、肺癌相似，难以区分[17]。LFA 检测CrAg 是近些年比较流行的诊断隐球菌病的首选方法，因其硬件要求不高、快速简单、经济实用，兼具不错的特异性和敏感性，在临床检测中广泛应用。

本研究结果显示，不同性别、年龄、CRP、WBC 患者的CrAg 阳性率无差异；而在临床症状方面有差异，且咳嗽咯痰、浸润实变的患者阳性率相对较高，影像学表现结节、肿块的患者阳性率偏低，这一结论在黄进宝等[3]、袁成等[18]的研究中亦得到验证。而不同影像学表现，如胸部CT 表现、病灶分布、累及肺叶、病变范围患者的CrAg 阳性率均无差异。一方面说明非HIV 感染肺隐球菌病患者影像学表征特异性不强；另一方面可能与本研究纳入患者免疫功能抑制有关，通常免疫功能明显缺陷患者的LFA 检测敏感性高于免疫功能正常人群，也与李晓平等[19]研究结果一致。

曾惠清等[20]对308 例患者进行研究，结果显示，LFA 检测CrAg 敏感性为75.0%、特异性为99.6%，阳性预测值为98.2%，阴性预测值为92.9%；而本研究结果显示，非HIV 感染患者的CrAg-LFA 检测敏感性和特异性分别为95%和100%，阳性预测值和阴性预测值分别为100%和97.37%，与上述研究大体上一致，可以看出LFA 检测非HIV 感染肺隐球菌病患者CrAg 敏感性较高。HUANG等[21]的研究发现HIV感染患者CrAg-LFA 检测敏感性可高达95%，推测非HIV 感染患者较HIV 感染患者的免疫状态和机体免疫受损情况好，导致肺隐球菌感染后，患者病情发展相对缓慢，抗原入血不如HIV 感染患者快，因此检测阳性率更高。

另一方面，本研究结果表明，随着治疗时间延长，CrAg 阳性患者的滴度水平与阳性结果呈持续下降趋势，治疗1 个月与治疗1年的滴度水平由1∶50下降至1∶5，同时阳性结果也有明显变化，部分患者治疗3 个月后逐渐转阴，阳性患者的滴度也处于较低值，提示CrAg-LFA 检测可以有效监测非HIV 感染肺隐球菌病患者的病情变化，并评估疗效，具有重要的临床价值。严群锋等[22]在LFA 监测肺隐球菌病患者CrAg 滴度的研究中发现，CrAg 滴度水平与肺部病灶的吸收、病情的良性发展呈正相关。林鹏程等[23]的报道表明，阳性隐球菌性脑膜炎患者治疗前后的CrAg 滴度水平存在明显差异。上述研究均证明LFA 检测CrAg 不但能有效评估肺隐球菌病患者的疗效，而且对其预后有预测价值。其原因可能为机体的隐球菌被抗真菌药物消灭，杀灭的真菌细胞壁碎片随代谢排出体外，入血的CrAg 减少，CrAg 滴度低，患者转阴增多，病情逐渐好转。

本研究结果表明，CrAg 低滴度患者治疗1年后疗效更好。DIZON 等[24]的研究指出，肺隐球菌病患者的疗效也受抗原滴度的影响，且CrAg滴度＞1∶1 280时患者致死率可达94%，＜1∶640 时致死率为38%，进一步证明CrAg 滴度在非HIV 感染肺隐球菌病患者预后评估中有较强的预测价值。方素芳等[25]认为，CrAg-LFA 检测能有效评估非HIV 感染肺隐球菌病患者病情发展，但无法指导临床停药。

综上所述，非HIV 感染肺隐球菌病患者的影像学特征缺乏特异性，CrAg-LFA 检测作为该类患者临床诊疗的一项有效检测手段，可较好地评估患者疗效和预后。本研究未对非HIV 感染与HIV 感染的差异、非HIV 感染与CrAg 抗原的相关研究进行深入分析，且研究的病例数有限，无较长时间的随访，这些都是本研究的局限性。