磷酸酯酶与张力蛋白同源物、Ki-67 在脑胶质瘤中的表达及与患者预后的关系

张玉富，景芸芸，邬迎喜，张蕴泽，陈隆

空军军医大学第二附属医院神经外科，西安 710038

脑胶质瘤属于神经上皮性肿瘤，病死率较高，是中枢神经系统的原发肿瘤，源于神经外胚层，其特点为呈浸润性生长或膨胀性生长，与周围正常脑组织界限不清，手术难以完全切除，且术后复发率较高。据统计，脑胶质瘤的发病率呈逐年上升趋势[1]。Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤生长缓慢，病程长，但术后复发率高。Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤生长迅速，病程短，且瘤体占位性效应可引起呕吐、视神经萎缩和癫痫等。胶质瘤的起病机制较为复杂，常与多种因素密切相关。随着医疗技术的不断发展，临床对胶质瘤的检查、诊断更为快捷[2]。第10 号染色体缺失性磷酸酯酶与张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog，PTEN）是近年来发现的肿瘤抑制基因，与肿瘤的发生发展密切相关[3]。Ki-67 是一种抗增殖细胞核蛋白的单克隆抗体，可准确反映细胞增殖活性，用于评价肿瘤的生物学行为[4]。因此，有研究认为，PTEN、Ki-67 与脑胶质瘤的发生发展密切相关[5-6]。因此，本研究探讨PTEN、Ki-67 在脑胶质瘤中的表达及与患者预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015 年10 月至2018 年12 月空军军医大学第二附属医院收治的脑胶质瘤患者。纳入标准：①符合脑胶质瘤的诊断标准，经CT、MRI 检查及术后病理学检查确诊；②均为原发性脑胶质瘤；③未出现远处转移。排除标准：①合并血液系统疾病；②合并其他恶性肿瘤；③合并脏器功能异常；④合并免疫系统疾病或结缔组织病变。依据纳入和排除标准，本研究共纳入152 例脑胶质瘤患者，其中男87 例，女65 例；年龄51～80 岁，平均（63.09±6.49）岁；世界卫生组织（WHO）脑胶质瘤分级：Ⅰ～Ⅱ级（恶性程度较低）90 例，Ⅲ～Ⅳ级（恶性程度较高）62 例。本研究经医院伦理委员会批准通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 免疫组化法检测PTEN、Ki-67蛋白的表达情况

取152 例脑胶质瘤患者的肿瘤组织及相应的癌旁组织，免疫组化法检测PTEN、Ki-67 蛋白的表达情况。组织标本切片、脱蜡、水化处理后，浸泡于3%过氧化氢中20 min，封闭其内源性过氧化物酶活性。高压枸橼酸盐抗原修复，温水清洗后使用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）清洗3 次，每次5 min，滴加10%血清以阻断非特异性结合，37 ℃孵育10 min。滴加一抗兔抗人Ki-67 多克隆抗体（1∶400）、鼠抗人PTEN 单克隆抗体（1∶400），4 ℃过夜，PBS 再次清洗，滴加生物素标记的Ki-67、PTEN 二抗，37 ℃孵育10 min，PBS清洗3 次后，滴加过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液孵育10 min。二氨基联苯胺显色，苏木素复染，脱水、干燥后中性树脂封片，用PBS 代替一抗作为阴性对照。结果判定：选择5 个不同视野进行全面观察，每个视野中细胞应不少于200 个，计算每个视野中阳性细胞所占比例。阳性细胞所占比例﹤5%为阴性，阳性细胞所占比例5%～50%为弱阳性，阳性细胞所占比例﹥50%为强阳性，其中弱阳性、强阳性判定为阳性[7]。

1.3 随访

采用电话、微信、回院复查等方式对所有患者进行为期1 年的随访，记录并统计患者的预后情况，以全因性死亡或复发再入院为随访终点，随访截止时间为2019 年12 月，并将全因性死亡或复发再入院作为预后不良的标准，分析脑胶质瘤患者预后的影响因素。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件对所有数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t 检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；脑胶质瘤患者预后的影响因素采用多元Logistic 回归分析；以P﹤0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ki-67、PTEN 表达情况的比较

脑胶质瘤患者肿瘤组织中Ki-67 的阳性表达率明显高于癌旁组织，PTEN 的阳性表达率明显低于癌旁组织，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。Ⅲ～Ⅳ级脑胶质瘤患者肿瘤组织中Ki-67 的阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ级患者，PTEN 的阳性表达率明显低于Ⅰ～Ⅱ级患者，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。（表1、表2）

表1 脑胶质瘤患者肿瘤组织和癌旁组织中Ki-67、PTEN表达情况的比较[n（%）]

表2 不同分级脑胶质瘤患者肿瘤组织中Ki-67、PTEN 表达情况的比较[n（%）]

2.2 脑胶质瘤患者预后影响因素的单因素分析

随访1 年，152 例脑胶质瘤患者中，预后不良47例，预后良好105 例。单因素分析结果显示，预后不良和预后良好脑胶质瘤患者年龄、性别、合并高血压、合并糖尿病、合并冠心病情况比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）；预后不良和预后良好脑胶质瘤患者WHO分级、Ki-67表达情况、PTEN表达情况比较，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。（表3）

表3 脑胶质瘤患者预后影响因素的单因素分析

2.3 脑胶质瘤患者预后影响因素的多因素分析

将单因素分析中差异有统计学意义的WHO分级、Ki-67 表达情况、PTEN 表达情况作为自变量，脑胶质瘤患者的预后作为因变量纳入多元Logistic 回归分析，结果显示，WHO 分级为Ⅲ～Ⅳ级、Ki-67 阳性表达、PTEN 阴性表达均为脑胶质瘤患者预后的独立危险因素（P﹤0.01）。（表4）

表4 脑胶质瘤患者预后影响因素的多元Logistic回归分析

3 讨论

脑胶质瘤根据临床病理类型可分为星形胶质细胞瘤、少突胶质细胞瘤、混合型少突星形胶质细胞瘤及室管膜瘤，其中以星形胶质细胞瘤最为常见[8]。统计数据显示，脑胶质瘤占原发性脑肿瘤的40%～50%，多呈浸润性生长，治疗十分困难[9-10]。虽然影像学检查技术的不断进步和显微神经外科技术的应用对神经外科的发展发挥了明显的促进作用，但对恶性脑肿瘤的治疗似乎并没有突破性进展，恶性程度较高的胶质瘤患者大多在确诊1 年内死亡。近年来，分子生物学认为，肿瘤的发生发展与基因的异常表达密切相关，肿瘤的发生与原癌基因激活及过表达、抑癌基因缺失及突变有关，是细胞增殖和凋亡失衡等多基因参与、多步骤演变的过程，并认为这些基因的变异和失控会导致基因编码与表型的不恰当表达，以细胞的生长繁殖不受控制为特征[11-13]。

本研究结果显示，脑胶质瘤患者肿瘤组织中Ki-67的阳性表达率明显高于癌旁组织，PTEN的阳性表达率明显低于癌旁组织，与既往研究结果相似[14]。Ki-67是一种与细胞增殖密切相关的核内蛋白，普遍存在于人类增生细胞核中，具有半衰期短的特点，与细胞周期关系密切，还与恶性肿瘤的发生发展、转移和预后密切相关，Ki-67过表达可反映肿瘤细胞增殖活性过度[15]。PTEN 属于抑癌基因，具有磷酸酶活性，通过发挥磷酸酶活性来减弱磷酸根活性，阻断细胞内的信号转导通路，从而抑制细胞转化，对肿瘤发生、发展起负调控作用[16]。有研究认为，Ki-67 表达上调、PTEN 表达下调提示胶质瘤病理级别较高[17]。本研究结果显示，Ⅲ～Ⅳ级脑胶质瘤患者肿瘤组织中Ki-67 的阳性表达明显高于Ⅰ～Ⅱ级患者，PTEN 的阳性表达率明显低于Ⅰ～Ⅱ级患者。这可能是因为PTEN属于抑癌基因，参与调节细胞的正常生长和发育，通过作用于细胞周期蛋白来抑制细胞转化、促进细胞凋亡，从而抑制肿瘤的发生发展、侵袭和转移过程；而Ki-67 是一种与细胞增殖密切相关的核内蛋白，其过表达可明显促进细胞增殖[18-20]。本研究多元Logistic 回归分析结果显示，WHO 分级为Ⅲ～Ⅳ级、Ki-67 阳性表达、PTEN 阴性表达均为脑胶质瘤患者预后的独立危险因素（P﹤0.01）。

综上所述，脑胶质瘤患者肿瘤组织中Ki-67 的阳性表达率较高、PTEN 的阳性表达率较低，WHO分级为Ⅲ～Ⅳ级、Ki-67 阳性表达、PTEN 阴性表达均为脑胶质瘤患者预后的独立危险因素。