552例男性HPV感染者基因型分布及临床特征分析

肖海璐 卢 彬 刘利华 谭兴友 牛李莉 鲁 楠 姚树兰 刘 香

1济宁医学院附属医院皮肤科，山东济宁，272000；2济宁医学院附属医院检验科，山东济宁，272000

人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)是性传播感染中最常见的病原体之一，按其引起的良性或恶性病变分为低危型和高危型。低危型HPV感染常可引起肛门生殖器疣等良性增生性疾病，而持续的高危型HPV感染可导致上皮内瘤变和癌变[1]。临床上，男性感染高危型HPV通常无明显症状，且男性感染后不仅有癌变风险，还可能会导致男性不育症的发生[2]。此外，不同地区男性感染HPV亚型的分布也不同[3-6]。目前尚无鲁西南地区男性HPV感染的相关研究数据，本研究运用PCR+膜杂交法技术，对鲁西南地区就诊的552例男性HPV感染者进行分型检测并结合临床数据分析，为本地区男性HPV感染流行病学调查、临床防治和HPV疫苗接种提供理论依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象 本研究为回顾性分析。纳入2017年1月至2021年7月于济宁医学院附属医院皮肤性病科门诊HPV 基因分型检测阳性的552例男性患者标本。标本取自男性包皮、冠状沟、尿道口及肛周等处。采集的标本立即放入专用采集管中，冷藏保存并送往本院实验室进行HPV检测，检测阳性者进行统计分析。本研究通过济宁医学院附属医院伦理委员会审批。

1.2 研究方法 收集并分析患者的基本信息和实验室检测结果。人乳头状瘤病毒(HPV)分型检测试剂盒(PCR+膜杂交法)，由广东潮州凯普生化公司生产，PCR扩增仪为美国ABI 2720。

1.2.1 HPV DNA提取 用HPV DNA基因分型检测试剂盒附带的取样拭子稍用力刮取患处皮损组织，放入专用的样品保存管中，取脱落细胞保存液0.5 mL, 14000 r/m离心1 min，弃上清，使用DNA提取试剂盒在生物安全柜提取。提取后,取1 μL样品进行PCR扩增。

1.2.2 PCR扩增 HPV通用引物用于PCR扩增，引物序列在5’端用生物素标记，PCR产物也用生物素标记。将23.25 mL PCR-MIX、0.75 mL Taq酶和1 μL DNA模板混合。同时设置了阴性和阳性对照，以控制操作造成的假阳性或假阴性。ABI 2720扩增仪PCR扩增条件如下: UNG (Uracil DNA糖基化酶)酶在20℃处理10 min, 95℃预变性9 min, 95℃变性20 s，55℃退火30 s，72℃延长30 s，40个循环，72℃延长5 min。

扩增结束后95℃ 5 min变性。变性产物于核酸杂交仪上进行杂交、孵育和显色。按试剂说明书进行杂交显色及判读结果。每组实验均设阴性和阳性对照，阴性和阳性对照均由试剂盒厂家提供。

1.2.3 统计学方法 数据分析采用SPSS 23.0统计软件。单一感染组和多重感染组中各基因亚型频率用%表示，不同年龄段感染HPV的危险类型以及不同危险类型的感染类型的组间使用卡方检验，以P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV各亚型频率分布 552例患者均来自济宁、菏泽、枣庄县市区，年龄最小者14岁，最大者82岁，平均年龄34岁(标准差12)。不同HPV亚型总计出现931次阳性(含多重感染)，试剂盒包含的21种基因型均有检出。低危型感染占比较高的基因型有：HPV6型196例(35.51%)和HPV11型131例(23.73%)；高危型感染占比较高的基因型有：HPV16型91例(16.49%)、HPV51型56例(10.14%)、HPV58型55例(9.96%)和HPV52型53例(9.60%)，见表1。单一感染和多重感染中HPV各亚型对比分析显示，除了HPV6，其他型HPV多重感染均高于单一感染，差异有统计学意义(P<0.05)，见图1。

表1 HPV各亚型分布情况 例

图1 单一感染和多重感染中HPV各基因型频率分布

2.2 不同年龄段感染HPV的危险类型 552例男性HPV感染者中，单纯低危型感染占比为36.05%，单纯高危型感染占比为32.79%，高低危混合型感染占比为31.16%，组间比较无明显差异(P>0.05)；HPV高危亚型感染占比高，占63.95%(单纯高危型感染占比+高低危混合型感染占比)。

不同年龄组之间HPV感染占比总体比较，21～30岁组和31～40岁组的HPV感染占比最高(P<0.05)，分别为38.04%和28.80%。

不同感染类型的各年龄段之间HPV感染占比比较，单纯低危型中21～30岁组和31～40岁组感染占比最高(P<0.05)，分别为15.04%和11.41%，两组间比较无明显差异(P>0.05)；单纯高危型中21～30岁组和31～40岁组感染占比最高(P<0.05)，分别为11.41%和10.51%，两组间比较无明显差异(P>0.05)；高低危混合型中21～30岁组的感染占比为11.59%，高于其它年龄组(P<0.05)，见表2。

表2 不同年龄段感染HPV的危险类型 例

2.3 不同HPV感染类型分布 不同感染类型中单一感染有314例，占56.88%，多重感染有238例，占43.12%，单一感染的占比高于多重感染(P<0.05)。随着感染重数的增加，单纯低危型、单纯高危型和高低危混合型的感染占比均呈下降趋势(见图2)，其中单一感染中，单纯低危型占34.42%，单纯高危型占22.46%，单纯低危型感染占比高于单纯高危型(P<0.05)；多重感染中，二重感染和三重感染的感染占比最高，分别为27.90%和9.24%，且高低危混合型组感染占比高于单纯低危型组或单纯高危型组(P<0.05)，见表3。

图2 不同感染类型的感染占比分布情况

2.4 HPV结果与临床联系 552例男性HPV感染者中，根据临床表现分为尖锐湿疣、亚临床感染和鲍温样丘疹病，其临床特征见表4和图3。尖锐湿疣患者335例，占总病例数的60.69%，不同HPV亚型总计出现607次阳性(含多重感染)，试剂盒包含的21种基因型均有检出。主要感染亚型为HPV6、11、16、51型，分别为173例(51.64%)、119例(35.52%)、46例(13.73%)、29例(8.66%)。HPV6和11型感染占尖锐湿疣患者的87.16%。其中9例合并其他疾病，分别为梅毒4例，支原体感染、疥疮、龟头扁平苔藓、股癣、银屑病各1例。

亚临床感染者210例，占总病例数的38.04%，不同HPV亚型总计出现315次阳性(含多重感染)，试剂盒包含的21种基因型均有检出。主要感染亚型为HPV16、52、58、51型，分别为41例(19.52%)、35例(16.67%)、30例(14.29%)、26例(12.38%)，均为高危型，以上4种亚型占亚临床感染者的62.86%。其中11例合并其他疾病，梅毒1例，支原体感染3例，生殖器疱疹、阴茎珍珠样疹、传染性软疣、念珠菌感染、寻常疣(下肢)、银屑病、龟头炎各1例。

7例鲍温样丘疹病患者中， HPV16型4例，余感染亚型分别为HPV6、11、43、51、68，各1例。高危型HPV16型感染占比高，占57.14%。

2.5 HPV结果与感染预防 结合鲁西南地区男性HPV感染流行数据，我们计算了3种疫苗对本地区HPV覆盖情况，见表5，552例男性感染者中，2价、4价、9价HPV疫苗覆盖全部感染亚型的比例分别为6.34%、41.49%、54.53%；至少能覆盖一种亚型的比例分别为20.47%、69.93%、83.51%。

表3 不同HPV感染类型分布 例(%)

图3 各类患者HPV基因型频率分布

表4 不同临床诊断HPV感染特点及合并其他疾病情况

表5 3种疫苗对鲁西南地区男性HPV感染者覆盖情况

3 讨论

HPV因其致癌性备受关注，高致癌风险的HPV持续感染可促进肿瘤的发生发展。在女性，由于系统的筛查和疫苗的预防接种，宫颈癌的发病率呈下降趋势[7]，然而，对于男性HPV感染，却缺乏有效的筛查系统，且男性HPV疫苗的接种率远远低于女性。研究发现HPV相关的口咽鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma of the oropharynx, OPSCC)的发病率在过去20年一直在上升，且大多数发生在65岁以内的男性[8]。在皮肤性病学领域，HPV感染最常见的临床表现是肛门生殖器疣，近年来研究发现，HPV感染呈多重感染趋势，且高低危混合感染广泛存在[3-6]，HPV有200余种亚型，且分布因地区而异。无论HPV感染后引起的口腔-生殖器肿瘤，还是肛门生殖器疣，都给患者乃至社会造成沉重的负担，接种疫苗是预防HPV感染主要手段，目前男性HPV疫苗接种仍未普及，因此，在实施疫苗接种计划之前，研究该地区HPV类型的流行和分布极为重要。

HPV感染存在地域差异性，我们的研究表明，鲁西南地区552例男性HPV感染者中，以HPV6、11、16、51、58和52亚型感染常见，感染占比分别为35.51%、23.73%、16.49%、10.14%、9.96%和9.60%。曾成龙等[3]报道西安男性HPV感染最常见的亚型从高到低为6、11、16、43、42、52、59、58、51和11；薛耀华等[4]报道广州地区HPV感染最常见的亚型为6、11、16、52 和58；戴永刚等[5]报道鲁中地区HPV感染最常见的HPV亚型依次为11、6、52和16；吕家庆等[6]报道海南地区571例男性HPV感染者中，6、11、52、51、16是主要的感染亚型；以上表明，不同地区常见的HPV感染亚型有地域差异性，但均以HPV6、11、16亚型感染为主。这一结果为本地区男性HPV感染的防治提供了数据支持。

从总体人群来说，于功奇等[9]报道，山东地区男性感染率与年龄无关，而我们的研究从已感染HPV的男性人群的角度得出，21～30岁组和31～40岁组的HPV感染占比居高，分别为38.04%和28.80%，此结果可能与21～40岁组男性为性活跃人群，接触性伴多，导致这些人群感染占比偏高。因此尽早接种HPV疫苗，可以大规模阻断HPV的传播与感染。

本研究数据发现，鲁西南地区男性HPV感染者中，HPV高危亚型感染占比高，达63.95%(其中单纯高危型感染占比为32.79%，高低危混合型感染占比为31.16%)。鲁中地区报道的[5]男性患者HPV高危型感染占比达61.72%(其中单一高危型感染占比为10.04%，多重高危型感染占比为3.72%，高低危混合型感染占比为 47.96%)；海南地区[6]报道的571例男性HPV感染者中，HPV高危亚型感染占比为61.82%(其中单纯高危型感染占比为34.15%，高低危混合型感染占比为27.67%)；以上地区男性HPV感染者中高危亚型感染占比均在60%以上。男性高危HPV持续感染往往会增加前列腺癌、肛门癌和口腔癌的风险，尤其男男性接触者的发病率明显高于其他人[10-12]。男性是HPV病毒的“传送者”，作为肿瘤相关的高危型HPV，在男性人群中以如此高的比例存在，不仅增加了自身癌变的潜在风险，同时也增加了其性伴侣的感染和癌变机率，从而严重威胁人群健康，值得警惕。这也为男性HPV疫苗接种以及新型多价HPV疫苗的研制提供依据。

本研究552例男性感染HPV患者中，尖锐湿疣占60.69%，主要感染亚型为6和11型，与指南[13]报道一致。亚临床感染比例较高，占总感染数的38.04%，以高危型HPV感染为主，主要感染亚型为16、52、58、51型，占亚临床感染者的62.86%，由于该人群发病隐匿，无自觉症状，极易造成病毒的播散，因此，亟需加强对该人群的监测。鲍温样丘疹病是一种与HPV感染相关的性传播疾病。大多数病变与致癌 HPV 类型相关，主要是HPV16型，我们的研究与文献报道一致。尖锐湿疣和亚临床感染者，可同时由于通过性接触传播，HPV感染通常合并其他性传播疾病，或银屑病等疾病，这也为临床治疗HPV感染增加难度。

国内批准应用的HPV疫苗有3种：二价疫苗预防HPV16、18型感染，四价疫苗预防HPV6、11、16和18型感染，九价疫苗预防HPV6、11、16、18、31、33、45、52和58型感染。结合鲁西南地区男性HPV感染流行数据，我们计算了3种疫苗对本地区HPV覆盖情况，见表5，与二价疫苗和四价疫苗相比，九价疫苗针对HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58，覆盖本地区大多数最常见的HPV类型(HPV6、11、16、51、58和52)，可能更适合鲁西南地区。

本研究为单中心回顾性研究，且数据量相对不足，对研究结果可能造成偏倚，是本文局限性所在。综上，通过本研究，初步预测鲁西南地区男性HPV感染的流行病学特征，为未来男性HPV感染的防治、疫苗接种以及新型疫苗的研发提供流行病学依据。