体外受精 - 胚胎移植中发生受精失败的现状及其相关影响因素探讨

谢立汉，张 昭，钟树怀，聂 齐

（东莞市人民医院生殖医学科，广东 东莞 523059）

不孕不育会给患者带来严重的生理、心理问题，伴随医学技术的发展，治疗不育不孕症的技术也在不断改进，其中体外受精 - 胚胎移植技术是一种有效且成熟的人工辅助生殖技术，由体外受精和胚胎移植共同组成，通过药物诱导多卵泡发育、体外受精、胚胎培养、移植及黄体支持等操作，可有效提高临床妊娠率，但由于胚胎培养的环境不佳及精子、卵子的质量低，精卵结合过程中均可能导致受精障碍的发生，最终导致受精失败，造成妊娠失败，且目前尚缺乏预测受精失败的较为简便、明确的方案[1]。因此，分析体外受精 - 胚胎移植中受精失败的相关影响因素，对提高不孕不育症患者临床受精率，改善妊娠结局具有积极的意义。基于此，本研究旨在进一步分析体外受精 - 胚胎移植受精失败现状及其相关影响因素，为提高临床受精率提供参考依据，现将结果整理报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2015年1月至2021年6月于东莞市人民医院行体外受精 - 胚胎移植的1 000例不孕症患者的临床资料。纳入标准：均符合《不孕不育的诊断与治疗》[2]中相关诊断标准者；配偶精子总数≥ 20×106个，且向前精子活动率≥ 20%者；女性成熟正常卵子数≥ 3枚者；男、女双方年龄均＜40岁者；无肝癌、胃癌等恶性肿瘤疾病者等。排除标准：未成功获卵者；男方或女方染色体异常者；女方伴有卵子成熟障碍者；伴有自身免疫性疾病、血液系统疾病者等。本研究经院内医学伦理委员会审核批准。

1.2 研究方法

1.2.1 超促排卵 ①长方案：卵巢功能较好的患者在排卵后7 d开始使用长效促性腺激素（Gn）释放激素类似物降调节，月经第3天垂体完全降调节时开始使用重组人促卵泡激素注射液[Merck Serono S.p.A.，注册证号SJ20160040，规格：33 μg（450 IU）]，150～375 U/d。②短方案：卵巢功能较差的患者从月经第2天或第3天起使用Gn释放激素类似物降调节，第3～4天起使用重组人促卵泡激素注射液，150～375 U/d。③拮抗剂方案：月经第3天起用卵泡刺激素（FSH）或人绝经期Gn促卵泡发育，第5天用B超监测卵泡发育，并测定黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、孕酮（P），采集患者3 mL空腹静脉血，以3 000 r/min转速离心15 min，取血清，采用全自动免疫分析仪[伊诺(天津)医疗科技有限公司，型号：MIA10]检测血清LH、E2、P水平，并根据检测结果相应调整用药剂量。

1.2.2 取卵 当优质卵泡直径为约13 mm或Gn使用第5天起添加Gn释放激素类似物防止内源性促峰值出现，并每隔1 d或每天用B超监测卵泡发育情况，约2个主导卵泡直径＞18 mm时停用FSH或人绝经期Gn，当激素水平达到要求后，于同一天晚上进行5 000～10 000 U人绒毛膜Gn肌肉注射，35～36 h时在阴道B超下进行取卵。

1.2.3 分组 体外受精后16～18 h，在倒置显微镜（南京尼康江南光学仪器有限公司，型号：E200 MV）下观察受精情况，受精后18 h观察原核，出现2个原核和2个极体为受精成功，受精率=受精成功数/总获卵数×100%[2]。并根据受精情况分为完全受精失败组（受精率为0）、低受精率组（受精率＜30%）及正常受精组（受精率≥ 30%），其中完全受精失败组与低受精率组归于受精失败。

1.2.4 体外受精 - 胚胎移植 在阴道B超下穿刺取卵，并将卵泡液中卵冠丘复合体放置在6%二氧化碳培养箱中预培养，约5 h后完成精子计数并按照3万条精子/卵的比例进行体外受精，卵子与精子共孵育18 h，取卵日后第4天在B超下进行胚胎移植。自取卵日起给予阴道给药40～60 mg/d的黄体酮胶囊（浙江仙琚制药股份有限公司，国药准字H20041902，规格：50 mg/粒）。

1.3 观察指标 ①影响体外受精 - 胚胎移植中发生完全受精失败、低受精率的单因素分析。收集资料包含女方年龄、不孕年限、促排天数、女方基础激素水平（E2、LH、FSH水平）、Gn用量、应用Gn天数、FSH用量、总获卵数、原发不孕、男方因素不孕、排卵障碍、输卵管因素、子宫内膜异位症、其他不明原因不孕情况等。②影响体外受精 - 胚胎移植中发生受精失败的多因素Logistic回归分析。将单因素分析中差异有统计学意义的因素纳入多因素Logistic回归分析模型，筛选影响体外受精失败的相关独立危险因素。

1.4 统计学方法 应用SPSS 25.0统计软件进行数据分析，计量资料以(±s)表示，采用t检验；计数资料以[ 例(%)]表示，采用χ2检验，危险因素筛选采用多因素Logistic回归分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 单因素分析 单因素分析结果显示，完全受精失败组、低受精率组患者女方年龄均显著大于正常受精组；总获卵数均显著少于正常受精组；原发不孕、男方因素不育、不明原因不孕占比均显著高于正常受精组；输卵管因素占比均显著低于正常受精组；且完全受精失败组患者不孕年限显著长于正常受精组、低受精率组，而低受精率组患者不孕年限显著短于正常受精组；完全受精失败组原发不孕占比显著高于低受精率组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表 1。

表1 影响体外受精 - 胚胎移植中发生受精失败、低受精率的单因素分析

2.2 多因素Logistic回归分析 以体外受精 - 胚胎移植中发生受精失败作为因变量，将单因素中差异有统计学意义的指标作为自变量，纳入多因素Logistic回归模型进行分析，结果显示，女方年龄大、总获卵数少、原发不孕、男方因素不育、不明因素不孕均是导致体外受精 - 胚胎移植中发生受精失败的独立危险因素，差异均有统计学意义（OR= 3.710、2.221、2.986、5.801、4.792，均P＜0.05），见表2。

表2 影响体外受精 - 胚胎移植中发生受精失败的多因素Logistic回归分析

3 讨论

不孕不育是指已婚男女在未采取任何避孕措施下，同居且有正常性生活1年以上未怀孕。在目前的辅助生殖技术中，体外受精 - 胚胎移植技术在临床上运用较为成熟，被广泛运用于不孕不育的治疗中，但相关研究显示，受病理原因、遗传因素及手术环境的影响，体外受精 - 胚胎移植技术受精成功率仍不容乐观，仍有较多受精失败的发生，卵子的利用率和受精率仍较低[3-4]。因此，有效分析影响体外受精 - 胚胎移植中受精失败的危险因素，对临床采取针对性的方法提高受精率意义重大。有研究显示，原发不孕且不孕年限较长者，体内存在的精卵结合障碍较为严重，且随着不孕年限的增长，患者卵子的质量会降低，最终易导致体外受精 - 胚胎移植过程中受精失败，无胚胎移植[5]。本研究单因素分析结果与上述报道相似，完全受精失败组患者不孕年限显著长于低受精率组，原发不孕占比显著高于低受精率组，提示存在不孕年限较长的患者与原发不孕患者行体外受精 - 胚胎移植时可能更容易导致其失败。

本研究多因素Logistic分析结果显示，女方年龄大、总获卵数少、原发不孕、男方因素不育、不明因素不孕均是导致体外受精 - 胚胎移植中发生受精失败、低受精率的独立危险因素。分析其原因可能为，女方年龄越大，卵细胞质量下降，卵子发生染色体非整倍体增多，或者染色体不分离的概率增加，进而导致受精率低，影响体外受精 - 胚胎移植的成功率[6]。体外受精 - 胚胎移植受精成功与获卵数密切相关，随着年龄的增长，患者卵巢的储备功能也会受到影响，会减少可回收卵子的数量，使总获卵数越少，受精成功的概率也会降低，进而影响体外受精 - 胚胎移植的效果，造成受精失败、低受精率的情况[7]。因此，女性最佳生育时间是25～29岁，此年龄段卵子处于最佳状态，受精成功率相对较高。有研究发现，原发不孕患者发生体外受精 - 胚胎移植受精失败的风险较大[8]。原发不孕是指有过性生活仍不能受孕，与女性盆腔粘连、输卵管病变等有关，其中输卵管病变、排卵功能障碍等均会导致不孕，进而影响体外受精 - 胚胎移植的效果，引发受精失败、低受精率[9]。对于原发不孕导致受精失败或受精率较低患者，可根据病因选择合适的手术方式进行治疗。男方因素不育主要是由于精子结合卵子的功能障碍、卵子精子结合障碍的免疫因素等，研究显示，虽然男性常规精液分析显示结果正常，但部分男性患者存在精子与透明带非正常的结合，或是透明带功能不正常，对诱发精子发生顶体反应存在障碍，因此会影响体外受精 - 胚胎移植的效果，造成受精失败、低受精率的情况[10-11]。针对受精失败、低受精率的患者，可对男方进行精子碎片的检测，或者适当调理男方精子活力，使男方养成健康的生活方式，加强锻炼、规律作息。不明因素不孕由于对于不孕的因素不明确，其可能是因为卵泡发育不良、子宫内膜功能异常及难以发现的精子功能障碍等，故临床不能进行针对性的治疗和干预，进而使进行体外受精 - 胚胎移植的妊娠结局受到限制，引发受精失败、低受精率[12-13]。因此对于不明因素不孕患者还需要及时、全面的检查，尽快发现问题，给予对应的解决方案；其中对于精子功能障碍患者可尝试单精子卵胞浆内注射，其情况会得以改善。

综上，体外受精 - 胚胎移植中发生受精失败、低受精率的危险因素包括女方年龄大、总获卵数少、原发不孕、男方因素不育、不明因素不孕等，临床可对伴有以上情况的患者进行针对性治疗和干预，以提高体外受精 - 胚胎移植的成功率。