葵肽清风对高尿酸血症动物模型的降尿酸作用

边学峰，刘 玲，兰 梦，吴 楠*，张 辉*

（1.长春中医药大学，长春 130117；2.吉林省东北亚生物科技有限公司，长春 130117）

高尿酸血症的特征是血液中尿酸水平异常升高，一般来说，女性的正常范围上限为360 mol/L（6 mg/dL），男性为416 mol/L（7.0 mg/dL）[1]。高尿酸血症已成为威胁人类健康的代谢性疾病[2-3]，可能与代谢综合征、中风发病率、慢性肾脏疾病和心血管疾病有关，被认为是引发痛风的重要因素之一。目前使用的抗高尿酸血症的药物主要包括：秋水仙碱、苯溴马隆、别嘌呤醇、黄嘌呤氧化酶（XOD）抑制剂等[4]。但具有不良反应，如秋水仙碱可导致腹泻、呕吐，别嘌呤醇可导致胃肠刺激，骨髓抑制，过敏综合征，肝炎和恶化的肾功能[5]。尿酸氧化酶仅用于治疗高尿酸血症，未被广泛应用[6]。抗高尿酸血症药物由于其严重的不良反应而限制了其临床应用[7]。因此，寻找具有更安全的毒理学特征的替代抗高尿酸血症药物，特别是从传统中医药寻找开发新型抗高尿酸血症药物具有重要的意义。葵肽清风是由葵花盘、薏苡仁、白茅根、淡竹叶、杜仲雄花、山楂为主要原料制成的代茶饮，具有增强免疫力、提高肾功能尿酸代谢的能力。

1 实验材料

8 周龄雄性Wistar 大鼠，体质量（180±10）g，实验动物生产许可号：SCXK（吉）20180007，购于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。葵肽清风（吉林敖东健康科技有限公司），秋水仙碱片（云南望子隆药业有限公司），苯溴马隆胶囊（德国赫曼大药厂），尿酸钠晶体（sigma），腺嘌呤（浙江天瑞药业有限公司），高酵母饲料（长春市亿斯实验动物技术有限责任公司），尿酸检测试剂盒（磷钨酸法）、黄嘌呤氧化酶检测试剂盒（比色法）（南京程健生物技术公司）。所有检测都是根据制造商的说明进行的。葵肽清风是一种由6 种成分组成的中药混合物：葵花盘提取物、薏苡仁粉、白茅根粉、淡竹叶粉、杜仲雄花粉、山楂粉。每日最大食用量不超过30 g（每袋5 g）。在大鼠中，等效剂量分别约为人类剂量的6 倍[8]。根据对药物安全性的临床观察，我们分别选择了人体剂量的3倍、6 倍和9 倍作为低剂量、中剂量和高剂量。在本研究中，三剂葵肽清风以1.5、3、4.5 g 悬浮在蒸馏水中并通过灌胃法给药7 d。秋水仙碱和苯溴马隆用作阳性对照，并在蒸馏水中相似地制备。

2 实验方法

2.1 动物模型的建立 通过注射尿酸钠晶体（MSU）建立大鼠急性痛风性关节炎模型。于之前的研究类似，采用尿酸钠晶体诱导的痛风性关节炎大鼠评估葵肽清风对痛风性关节炎的作用。第1～14 天给予高酵母饲料饲养，并给予腺嘌呤100 mg/（kg·d）灌胃，第15～21 天停止高酵母饲养及腺嘌呤灌胃，第18 天于造模组关节腔内注射尿酸钠晶体溶液[9]，选择右踝关节外侧后方作为穿刺点，针口斜面与胫骨成45°角向上前方穿入踝关节腔内[10]，以关节囊对侧鼓起为注入标准，制备急性痛风性关节炎，继续药物干预72 h（3 d）后，于第21 天大鼠眼眶静脉丛取血，留取标本。

2.2 动物分组 Wistar大鼠共77只，分7组，每组11只。分别为正常对照组、模型组、秋水仙碱（0.48 g/kg）阳性对照组、苯溴马隆（50 g/kg）阳性对照组及葵花盘低（1.5 g/kg）、中（3 g/kg）、高（4.5 g/kg）剂量组。正常对照组和模型组给予生理盐水10 mL/kg。药物剂量按照《中药药理研究方法学》中实验动物和人体剂量的换算方法换算[11]。

2.3 肿胀度测量 通过游标卡尺测量尿酸钠晶体（MSU）注射后0、12、24、48 h 所有大鼠的右膝关节周长。肿胀度（%）=（Ct -C0）/C0。其中，Ct 表示不同时间的周长，C0 表示0 h 的周长。观测大鼠血液和肝脏的尿酸（SUA）水平、肝脏黄嘌呤氧化酶（XOD）水平。

2.4 样品收集 最后一次给药后1 h，各组大鼠眼眶静脉丛取血，血浆静置30 min 后，以3 000 r/min 的速度离心，取上清。置于-80 ℃保存[12]。

2.5 数据处理及统计 采用SPSS 19.0 处理数据，用.E.M.表示结果，利用双t-t 实验检验显著性[13]。

3 结果

3.1 葵肽清风对大鼠肝脏中尿酸浓度的影响 按照尿酸试剂盒的检测方法，对大鼠肝脏尿酸（SUA）含量进行测定。如图1 所示，与空白组相比，模型组肝脏尿酸含量显著上升（P＜0.05），这表明，利用腺嘌呤灌胃的方式，能够使大鼠血尿酸升高，成功建立高尿酸血症模型[14]。结果显示，与模型组相比，秋水仙碱（COL）组和苯溴马隆（Ben）组与葵肽清风（KTQF）各组均能够不同程度地使血尿酸含量下降。秋水仙碱组和苯溴马隆组与模型组比较差异具有统计学意义（P＜0.05），结果证明葵肽清风有降低肝脏尿酸含量的效果能够治疗高尿酸血症；并且在葵肽清风各组中，葵肽清风高剂量（KTQFG）组对于降低肝脏尿酸水平最有效[15]。

图1 葵肽清风对大鼠肝脏中尿酸含量的影响

3.2 葵肽清风对大鼠血清中尿酸浓度的影响 按照尿酸试剂盒的检测方法，对大鼠血尿酸（SUA）含量进行测定。如图2 所示，与空白组相比，模型组血清尿酸含量显著上升（P＜0.05），这表明，利用腺嘌呤灌胃的方式，能够使大鼠血尿酸升高，成功建立高尿酸血症模型。结果显示，与模型组相比，秋水仙碱和苯溴马隆组与葵肽清风各组均能够不同程度地使血尿酸含量下降[16]。秋水仙碱组和苯溴马隆组与模型组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。结果证明葵肽清风有降低血尿酸含量的效果能够治疗高尿酸血症；并且在葵肽清风各组中，葵肽清风高剂量组对于降低血尿酸最有效[17]。

图2 葵肽清风对大鼠血尿酸含量的影响

3.3 葵肽清风对大鼠肝脏黄嘌呤氧化酶（XOD）活性的影响 根据血尿酸含量测定结果，分别对空白组、模型组、秋水仙碱、苯溴马隆组以及葵肽清风组的肝脏组织进行测定。取大鼠肝脏，制备成匀浆[18]。按照肝脏黄嘌呤氧化酶试剂盒的测定方法进行操作。如图3 所示，与空白组相比，模型组大鼠肝脏匀浆中黄嘌呤氧化酶活性显著上升（P＜0.05）；与模型组相比，秋水仙碱组、苯溴马隆组使得黄嘌呤氧化酶活性显著下降（P＜0.05），葵肽清风高剂量组、葵肽清风中剂量组（KTQFZ）、葵肽清风低剂量组（KTQFD）使得肝脏黄嘌呤氧化酶活性显著下降（P＜0.01）。结果表明，葵肽清风组对于大鼠肝脏中肝脏黄嘌呤氧化酶活性有显著抑制作用。

图3 葵肽清风对大鼠肝脏中黄嘌呤氧化酶活性的影响

3.4 葵肽清风对大鼠关节肿胀度的影响 如图4 所示，在注射尿酸钠晶体（MSU）的12、24、48 h 后，与空白对照组相比，模型组大鼠右膝关节肿胀度均显著增加（P＜0.05），由此可见，注射尿酸钠结晶能成功建立急性痛风性关节炎大鼠模型，且所建立的动物模型相对稳定[19]。秋水仙碱组在0.48 mg/kg 剂量时，未能调节由尿酸钠晶体（MSU）引起的肿胀（P＞0.05）。注射尿酸钠晶体12 h 后，葵肽清风高剂量组、葵肽清风中剂量组、葵肽清风低剂量组显著抑制了右膝的肿胀（P＜0.05）；而在48 h，葵肽清风高剂量组显著抑制肿胀（P＜0.01）。各组中，葵肽清风高剂量组在尿酸钠晶体注射诱导的急性痛风性关节炎大鼠中，显示出对右膝肿胀的最佳抑制作用。

图4 葵肽清风对大鼠关节肿胀度的影响

4 讨论

痛风是一种以体内尿酸过量为基础的临床和病理特征表现的疾病，部分表现为高尿酸血症，其定义为血清尿酸水平大于6.8 或7.0 mg/dL。关节及其他部位细胞外液中尿酸钠结晶的沉积，介导痛风的大部分临床和病理特征[20]。

在治疗方面，现代医学主要以非甾体抗炎药、糖皮质激素、抑制尿酸生成药、促进尿酸排泄药等为主要治疗手段，其或多或少存在毒副作用[21]。本实验研究发现[22]，葵肽清风干预高尿酸血症模型大鼠及急性痛风性关节炎模型大鼠过程中，血尿酸水平较模型组明显下降[23]，同时中药干预各组大鼠的患病关节肿胀程度较模型组轻微，表现为中药组患病关节直径增大的幅度小，且恢复时间快，表明葵肽清风可控制血尿酸水平、痛风局部症状[24]。进一步统计学分析数据发现，在高、中、低3 个浓度梯度上，高浓度组葵肽清风无论是对于大鼠病足关节肿胀程度的改善，还是对于血尿酸水平的降低，均优于其余2 个浓度梯度[25]。

综上所述，葵肽清风能显著改善痛风症状，改善关节肿胀程度，降低血尿酸水平[26]。