不同杀青工艺对裸花紫珠主要有效成分的影响

宋 潇 左美玲 杨中保

湖南省长沙市第四医院 湖南师范大学附属长沙医院药学部，湖南长沙 410006

裸花紫珠是马鞭草科紫珠属的干燥叶，裸花紫珠性味苦、微辛、平。具有止血、消炎、化湿浊、解肿毒的功能。主治细菌性感染引起炎症肿毒，急性传染性肝炎，内外伤出血[1-4]。裸花紫珠主要含有黄酮类、苯丙素类与有机酸类成分[5-10]。据报道，鲜叶被采摘后，其叶内原果胶酶、转化酶、淀粉酶等活性增强，加速淀粉、蛋白质的水解[11]；杀青过程通过热化学反应，可迅速灭活生物活性酶[12-14]。因此从酶灭活角度进行阐释，“杀青”作为中药材初加工方式应用广泛，对中药材特别是叶类、花类中药材的活性成分影响十分显著[15-17]。如枇杷花茶经杀青后，黄酮、总酚、三萜酸含量增加，且香气更加浓郁[18]。随着中药传统炮制技术与现代化工艺的相结合，杀青技术在中药加工中的应用成为研究热点。在杀青过程中，不同的工艺参数对饮片质量产生一定的影响，目前关于裸花紫珠初加工的研究甚少。因此，本研究通过杀青时间和干燥温度这两项工艺参数研究，观察其对裸花紫珠主要有效成分含量的影响，旨在提供适宜裸花紫珠炮制的加工方式，为裸花紫珠的加工生产提供理论和技术支持。

1 材料

1.1 药材

本研究所用的裸花紫珠药材采自海南，经湖南中医药研究院谢昭明研究员鉴定为马鞭草科植物裸花紫珠的干燥叶。

1.2 仪器与试药

仪器：Waters e2695-2998 型高效液相色谱仪（美国Waters 公司）；电子天平，万分之一，AR220（日本岛津公司）；电子天平，十万分之一，CP225D（sartorius 公司）；KQ300DE 型数控超声波清洗器（昆山仪器）；Milli-Q 纯水系统（美国Millipore 公司）。

试剂：乙腈为色谱纯；水为Millipore 制备的超纯水；其他试剂均为分析纯。

对照品：木犀草苷（批号：11720-201408，含量测定用，中国食品药品检定研究院）；毛蕊花糖苷（批号：111530-201208，含量测定用，中国食品药品检定研究院）。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

取本品粉末（过4 号筛）约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 ml，称定重量，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）40 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2 对照品溶液的制备

取木犀草苷、毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，分别加70%甲醇制成每1 ml 含木犀草苷20 μg、毛蕊花糖苷40 μg 的溶液，即得。

2.3 色谱条件及系统适用性

Kromasil 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，瑞典AKZO NOBEL 公司），乙腈为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱0～30 min，16%A，30～41 min，16%→80%A，41～51 min，80%A；木犀草苷检测波长为350 nm，毛蕊花糖苷检测波长为330 nm；柱温为35℃；流速：1 ml/min；进样量：10 μl。毛蕊花糖苷色谱图见图1，木犀草苷对照品色谱见图2，裸花紫珠供试品色谱图见图3～4。

2.4 线性关系考察

2.4.1 对照品母液的制备 取木犀草苷对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，分别加70%甲醇制成每1 ml 含木犀草苷、毛蕊花糖苷1 mg 的溶液，即得。

2.4.2 对照品溶液的制备 分别精密吸取对照品母液5、2、1、0.8、0.6 ml 置于10、10、10、50、50 ml 的容量瓶中，加甲醇至刻度，与母液一起制成系列不同浓度的对照品溶液（0.5、0.25、0.1、0.05、0.008、0.006 mg/ml）。

2.4.3 测定法 按“2.3”项下分别进样，以峰面积为纵坐标，以对照品溶液浓度为横坐标进行线性回归。结果显示：毛蕊花糖苷、木犀草苷对照品分别在1.852～9.260 μg、2.140～10.700 μg 范围内线性关系良好，毛蕊花糖苷的回归方程分别为：Y=2721.6X+212.49，r=0.9999；木犀草苷的回归方程：为Y=1490.6X+294.66，r=0.9998。

2.5 精密度试验

取毛蕊花糖苷、木犀草苷对照品溶液于同1 d 内重复进样连续进样6 次，计算毛蕊花糖苷、木犀草苷峰面积相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）分别为0.14%、0.26%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一裸花紫珠样品，连续在分别在0、6、12、18、24 h 进样测定毛蕊花糖苷、木犀草苷峰面积。毛蕊花糖苷、木犀草苷峰面积RSD 分别为2.00%、0.54%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

2.7 重现性试验

取同一裸花紫珠样品，按“2.1”项下平行制备6 份，依法测定，计算毛蕊花糖苷、木犀草苷的含量RSD 分别为1.51%、1.58%，表明方法重现性良好。

2.8 加样回收试验

精密称取已知含量的供试品6 份（木犀草苷含量为1.28 mg/g，毛蕊花糖苷含量为43.65 mg/g），分别精密加入一定量的毛蕊花糖苷和木犀草苷对照品，照“2.3”项下制备回收率试验液，依法测定，计算回收率。见表1。

表1 方法回收率试验结果（n=6）

2.9 试验方法及测定指标

将裸花紫珠鲜叶充分混匀，均分为10 份，每份100 g，使用网袋装好。2 因素3 水平完全随机区组试验，设杀青时间和干燥温度两因素，蒸汽杀青时间设0.5、1、1.5 min 3 个水平，干燥温度分别以60、70、80℃3 个水平进行烘干见表2；另取一份样品直接以60℃烘干，至叶恒重，将处理好的裸花紫珠叶粉碎，过4 号筛，分别测其毛蕊花糖苷、木犀草苷的含量。重复加工鲜叶样品2 次，共计20 份样品，试验结果取平均值。结果显示，直接以60℃烘干的样品木犀草苷含量为1.21 mg/g，毛蕊花糖苷含量为31.59 mg/g，以杀青时间1 min 干燥温度60℃为最优的蒸汽杀青条件。见表3。

表2 优选裸花紫珠加工工艺因素-水平

表3 不同加工方式裸花紫珠单体成分含量比较（mg/g）

3 讨论

本研究建立了同时测定裸花紫珠叶中一种黄酮类成分和一种苯乙醇苷类成分含量的高效液相色谱法，所建立的方法操作简便、结果准确且重复性好。毛蕊花糖苷属于苯乙醇苷类成分，木犀草苷属于黄酮类成分，这两个成分在裸花紫珠中含量较高且属于主要活性成分[19-21]，因此，选择同时测定这两个成分可以作为裸花紫珠药材质量控制的有效方法之一。

本研究通过木犀草苷和毛蕊花糖苷的高效液相色谱法含量测定，结果显示蒸气杀青处理后以不同温度干燥对裸花紫珠化学成分保留效果优于不杀青直接干燥处理。同时研究了不同杀青时间和不同的干燥温度对裸花紫珠有效成分的影响，结果显示以杀青时间1 min干燥温度60℃为最优的蒸汽杀青条件。

裸花紫珠为海南传统民族药材，临床应用已有数千年的历史，是我国中医药文化的重要传承之一[22]，裸花紫珠目前以晒干为主要的加工方式，存在受环境影响较大，生产效率低，药材质量控制不易等问题。中国中药生产、加工炮制在长期的生产实践和经验积累形成了独具特色、内容丰富、较为系统的中药材初加工方法和技术，现代的科技发展为中药传统生产加工技术和质量控制也提供了更详细的理论基础和技术设备支持，现代杀青手段也越来越多，如微波杀青、热风杀青等[23-24]。下一步将结合不同的杀青技术以及不同的杀青设备，研究其对裸花紫珠的有效成分含量变化，为裸花紫珠的炮制加工提供进一步的科学依据，提高裸花紫珠的生产效率，加速裸花紫珠的产业化、规模化发展。