p63、TLR3和 Leptin在宫颈癌中的表达及临床意义

麻卲 李晓茹 吕志华

宫颈癌是常见的女性生殖系统癌症，与人乳头瘤病毒(HPV)感染具有密切关系。随着国外思想文化对国人的冲击、普遍的性早熟以及性教育缺失等多种原因，我国HPV感染以及宫颈癌的发病率逐年上升且趋于年轻化[1]。虽然目前临床上液基细胞学检测(TCT)和病毒检测(DH3)等辅助检查能够对宫颈癌早期病变进行诊断，但仍有一部分患者在确诊时已错过最佳治疗时期，因此进一步提高对宫颈癌的早期诊断和治疗具有积极意义[2]。研究显示，宫颈癌的发生发展与基因表达异常有关[3]。p63是一种核蛋白，在多种恶性肿瘤的发生发展过程中调控细胞的增殖与凋亡，瘦素(Leptin)可通过调节多个信号通路来抑制细胞凋亡、诱导不良细胞的增殖。HPV感染可抑制机体免疫功能，产生炎症因子，诱发炎症反应，造成组织损伤。Toll样受体3(TLR3)具有调节免疫反应的作用，与炎症反应、宫颈癌的发生发展关系密切。本研究通过检测宫颈组织中p63、TLR3和Leptin的表达情况，分析各因子水平与肿瘤分期的关系，为宫颈癌的早期诊断与治疗提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

纳入2018年3月至2020年1月在我院保留的118例妇科手术标本作为研究对象，纳入标准：①符合宫颈癌诊断或正常宫颈组织[4]；②患者年龄在30～60岁之间。排除标准：①合并有其他炎症或肿瘤疾病；②已行放化疗。本次纳入正常宫颈组织43例，宫颈癌组织75例。

1.2 检测方法

使用多聚甲醛充分固定标本，石蜡包埋，4 μm厚切片，脱蜡脱水后采用高压热修复，磷酸缓冲盐(PBS)液冲洗，免疫组化法检测p63、TLR3和 Leptin的表达，染色采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)，二氨基联苯胺法(DAB)显色，鼠抗人p63、TLR3、Leptin抗体均购自武汉奥科博泰生物科技有限公司。已知阳性组织切片和PBS一抗分别为阳性对照和阴性对照。

1.3 检测结果判定

p63、TLR3、Leptin的阳性表达均为细胞内的棕黄色颗粒，视野内阳性细胞数≤10%则判定阴性(-)，视野内阳性细胞数>10%～25%则判定为弱阳性(+)， 视野内阳性细胞数>25%～49%则判定为中阳性(++)，视野内阳性细胞数≥50%以上则判定为强阳性(+)。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 宫颈组织中p63、TLR3、Leptin表达情况

如表1所示，正常宫颈组织与宫颈癌组织中p63、TLR3、Leptin的表达差异均具有统计学意义(P<0.05)。

表1 正常宫颈与宫颈癌组织中p63、TLR3、Leptin的表达/例

2.2 p63、TLR3、Leptin表达与宫颈癌病理特征的关系

如表2所示，p63表达与FIGO临床分期、分化程度相关(P<0.05)，与年龄无关(P>0.05)。TLR3表达与分化程度相关(P<0.05)，与临床分期、年龄无关(P>0.05)。Leptin表达与临床分期、分化程度相关(P<0.05)，与年龄无关(P>0.05)。

表2 p63、TLR3、Leptin表达与宫颈癌病理特征的关系/例

2.3 不同指标间的相关性

TLR3与Leptin和p63的表达均呈显著负相关(γTLR3 vs Leptin=-0.549，PTLR3 vs Leptin=0.000；γTLR3 vs p63=-0.645，PTLR3 vs p63=0.000)，Leptin与p63呈显著正相关关系(γ=0.677，P=0.000)。

3 讨论

宫颈癌好发于35～55岁人群，在早期易出现淋巴结转移，患者远期生存质量差，生存期短，研究显示，宫颈癌患者的中位生存期不足3年[5]。目前临床使用的宫颈癌评估指标仍然具有一定局限性，对宫颈组织中相关蛋白表达进行检测，一方面能够作为宫颈癌疗效评估指标，另一方面，可为宫颈癌的诊治提供新的靶点，具有积极的临床意义。

HPV感染可抑制p63蛋白表达的下调，导致p63蛋白表达持续在一个高水平[6]。本研究显示，p63在正常宫颈组织中几乎不表达，而在宫颈癌组织中表达的阳性率可高达95.12%，这与方慧英等[7]的研究结果基本相符合。此外，本研究还显示，Ⅱ期宫颈癌和低-中分化的宫颈癌组织中p63的中强度阳性表达率显著高于Ⅰ期宫颈癌和高分化的宫颈癌，表明p63的表达与宫颈癌的恶性程度相关，检测p63有助于对宫颈癌患者的病情、预后进行评估。

TLR3是一种多功能受体，能够维持组织内环境稳态，调节细胞凋亡与增殖，可通过TLR3/NF-KB信号通路参与免疫、炎症以及肿瘤的发生发展过程。研究显示[8]，免疫介导的TLR3在病毒感染的抵御中具有重要作用。本研究显示，在正常组织中TLR3表达处于高水平，而宫颈癌组织中TLR3表达阳性率显著低于正常宫颈组织，且分化程度低的宫颈癌组织TLR3表达阳性率显著低于分化程度高的组织。分析认为，病毒的免疫逃逸是HPV持续复制和感染的重要因素，而有研究显示TLR3的正常表达能够增进病毒的清除，当TLR3异常下调时，可能出现HPV病毒的免疫逃逸，从而大量复制，导致宫颈的恶性病变[9]。

Leptin主要在脂肪细胞中表达，可通过结合相关受体来调节细胞内的第二信使，进一步影响PI3K/AKT等下游信号，促进细胞的异常增殖，抑制细胞凋亡，诱导细胞的异常分化[10]。Leptin在多种恶性肿瘤中高表达。本研究显示，Leptin在正常宫颈组织中低表达，在宫颈癌组织中表达的阳性率高，且Ⅱ期宫颈癌和低-中分化的宫颈癌组织中强度阳性表达率显著高于Ⅰ期宫颈癌和高分化的宫颈癌，这表明，leptin的表达与宫颈癌的恶性程度具有一定的相关性，这与赵靓等[11]的研究结果相符合，提示leptin可作为宫颈癌患者预后和病情评估的指标之一。

此外，本研究对p63、TLR3、Leptin表达情况进行相关性分析，发现TLR3与Leptin和p63的表达均呈显著负相关，Leptin与p63呈显著正相关关系。其原因可能是TLR3的表达下调导致了HPV感染加重，导致p63表达上调，Leptin的表达上调可能是因肿瘤细胞的增殖诱导而产生的，其具体机制有待进一步探究。

综上所述，p63、TLR3、Leptin均在宫颈癌组织中异常表达，与病理分期、分化程度存在相关性，且三者之间存在一定的关联。p63、TLR3、Leptin可作为宫颈癌的可靠标志物，用以评估患者病情和预后。