土家药材黄瓜香的显微特征及其薄层色谱鉴别*

佘永红，杨德泉

(湘西土家族苗族自治州食品药品检验所，湖南 吉首 416000)

土家药黄瓜香，又名蔓茎堇菜、七星莲、黄花草、毛毛香，为堇菜科植物蔓茎堇菜(VioladiffusaGing.)的全草，土家语名“拍替塔王嘎那”.《土家族医药学》[1]、《土家族药学》[2]、《实用土家族药物》[3]等载其性冷，味甜、微苦，具有益精助孕，生血补虚，败毒消肿，中和药毒等功效；主要用于治疗精亏不孕，血虚症，痈疮诸毒，药物中毒，跌打损伤，烫伤等.在二十世纪八十年代，湘西自治州人民医院用黄瓜香全草蒸鸡服用方法，治疗再生障碍性贫血，湖南省人民医院和湖南省劳动卫生研究所用黄瓜香提取物治疗再生障碍性贫血，均获得一定疗效[4].药理研究表明，黄瓜香具有抗菌、抗炎、调控免疫、利胆保肝、抗肿瘤、抗氧化等作用[5-11].在医药市场中，黄瓜香存在同名异物现象，如百合科油点草属植物黄花油点草(Tricyrtismaculata(D. Don) Machride)的干燥全草，药材名也为黄瓜香[12]，其功效为润肺止咳、理气止痛、散结，与堇菜科植物蔓茎堇菜的黄瓜香功效完全不同.为科学地鉴别土家药黄瓜香(蔓茎堇菜)药材，笔者用黄瓜香(蔓茎堇菜)对照药材作为对照，研究建立黄瓜香(蔓茎堇菜)的薄层色谱鉴别方法，以期为黄瓜香药材的鉴别提供技术支持.

1 仪器与试药

1.1 仪器与试剂

AUW220D电子天平(日本岛津公司)；KM5200DE型超声波清洗器(昆山美美超声仪器有限公司)；GoodSee-10型薄层色谱成像仪(上海科哲生化科技有限公司).硅胶G薄层板(青岛海浪干燥剂有限公司，批号2017年3月2日，10 cm×20 cm)；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂分厂，批号2018年5月15日，10 cm×20 cm)；硅胶G高效薄层板(青岛海洋化工厂分厂，批号2021年5月28日，10 cm×20 cm).本研究所用试剂的纯度均为分析纯，水为纯化水.

1.2 对照品与样品

1.2.1 对照药材 笔者在吉首市寨阳村采集了黄瓜香对照药材，经佘永红主任药师鉴定为堇菜科植物蔓茎堇菜的全草(图1).

图1 黄瓜香植物Fig. 1 Viola diffusa Plants

1.2.2 实验样品及来源 2022年4月中旬，笔者在吉首市红枫林场采集了黄瓜香药材1号样品；2022年5月上旬，笔者在吉首市寨阳村采集了黄瓜香药材2号样品.采集的样品，均洗净，干燥，备用.

2 方法与结果

2.1 药材性状

本品多皱缩成团.主根呈长圆锥形，直径2～5 mm，淡黄色至黄棕色，有稀纵皱纹，具多条细小须根；叶基生，上表面深绿色，下表面灰绿色，展平后叶片呈卵形或卵状长圆形，长1.5～3.5 cm，宽1～2 cm，先端钝或稍尖，基部宽楔形，下延于叶柄，边缘具钝齿，叶柄具明显的翅(图2).

图2 黄瓜香药材Fig. 2 Viola diffusa Herbal Medicine

2.2 显微鉴别

2.2.1 根的横切面 根的横切面呈类圆形.表皮2～3列薄壁细胞组成，排列疏松.皮层宽广，细胞类圆形，薄壁细胞由外向内体积逐渐减小，细胞间隙不发达；木质部发达，导管单个或2～6个聚集而成；韧皮部呈压扁皱缩状，环绕木质部排列；无形成层；维管束为有限外韧型(图3).

2.2.2叶的下表面特征 单细胞非腺毛，有的略弯曲，基部稍膨大，末端狭尖，长20～40 μm，直径4～8 μm.气孔多数呈直轴式，少数不等式(图4).

图3 黄瓜香根横切面Fig. 3 Viola diffusa Root Cross Section

图4 黄瓜香叶的下表面特征Fig. 4 Viola diffusa Leaf Cross Section

2.3 薄层色谱鉴别

2.3.1 供试品溶液制备 称取黄瓜香药材样品粉末(过2号筛)1 g，加入乙醇30 mL，稀盐酸10 mL，超声处理20 min，过滤，滤液水浴蒸干，残渣再加5 mL乙醇溶解，过滤，滤液水浴蒸干，残渣用1 mL乙醇溶解，作为供试品溶液.

2.3.2 对照药材溶液制备 称取黄瓜香对照药材粉末(过2号筛)1 g，同2.3.1节方法制成对照药材溶液.

2.3.3 鉴别方法 按照薄层色谱法(《中国药典2020年版》四部通则0502)试验方法，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮(体积比10∶8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365 nm)下检视.

结果显示，供试品色谱在与对照药材色谱相应位置上，均呈现出相同颜色的斑点(图5).

S—黄瓜香对照药材;1—黄瓜香药材1号；2—黄瓜香药材2号.图5 黄瓜香薄层色谱图Fig. 5 Thin Layer Chromatogram of Viola diffusa

2.3.4 耐用性考察 采用2个不同生产厂家的薄层硅胶G薄层板，分别在不同的湿度、温度条件下，按2.3.3节方法实验.

(1)硅胶G薄层板(青岛海浪干燥剂有限公司，批号：2017年3月2日)，温度：28.1 ℃，湿度：70%.实验结果见图6.

(2)硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂分厂，批号：2018年5月15日)，温度：19.8 ℃，湿度：42%.实验结果见图7.

S—黄瓜香对照药材；1—黄瓜香药材1号；2—黄瓜香药材2号.图6 黄瓜香薄层色谱耐用性考察(1)Fig. 6 Durability of Viola diffusa Through Thin Layer Chromatography (1)

S—黄瓜香对照药材；1—黄瓜香药材1号；2—黄瓜香药材2号.图7 黄瓜香薄层色谱耐用性考察(2)Fig. 7 Durability of Viola diffusa Through Thin Layer Chromatography (2)

从图6、图7可以看出，耐用性实验结果的色谱斑点清晰，分离度较好，结果稳定，表明本方法耐用性能较好.

3 讨论

黄瓜香为全草类药材，叶多且易碎.本研究选择黄瓜香根的横切面和叶的下表皮显微结构，作为鉴别特征，方法易于操作，能够鉴别黄瓜香药材.彭源贵等[13]报道黄瓜香中含赪桐留醇、棕榈酸等化学成分，戴娇娇[14]分离鉴定了黄瓜香中化学成分，其中包含了表木栓酮、木栓酮、桐甾醇、violaic A、violaic B、violaide、clerosterol galactoside、decorinone、decortinol、isodecortinol、stigmast-25-ene-3β,5α,6β-triol、cerevisterol.因以上成分缺乏市场供应，故采用已知黄瓜香的单体成分作为对照品，建立黄瓜香薄层色谱鉴别方法的条件尚不成熟.因此，本研究以黄瓜香(蔓茎堇菜)对照药材作为对照，研究建立了黄瓜香(蔓茎堇菜)的薄层色谱鉴别方法，在不同实验条件下，供试品与对照药材色谱一致，色谱斑点分离清楚.表明该方法稳定性好，可以作为土家药黄瓜香药材的鉴别方法.

本研究建立的黄瓜香显微组织鉴别方法和薄层色谱鉴别方法，具有方法简便，稳定性好等优点，可用于黄瓜香药材的质量控制.