青羊参饮片的薄层色谱鉴别方法及浸出物限度标准*

杨德泉，佘永红，吉林芳，丁 野

(1.湘西土家族苗族自治州食品药品检验所，湖南 吉首 416000；2.湖南省药品检验检测研究院，湖南 长沙 410001)

青羊参始载于《植物名实图考》[1]，为萝藦科植物青羊参(CynanchumotophyllumSchneid.)的干燥根，含有青羊参苷元、青羊参苷甲、青羊参苷乙、本波苷元等成分[2-3]，临床上用于治疗癫痫、抑郁、子宫肌瘤、腰痛、结核等病症[4-6].《湖南省中药材标准(2009年版)》收载名称为“青阳参”[7]，《湖南省中药饮片炮制规范(2010年版)》收载饮片名称为“青阳参”[8]，饮片标准中以成品性状、显微鉴别、理化反应等为主要质量控制项目.青羊参与同属植物隔山消(C.wilfordii(Maxim.) Hemsl.)、昆明杯冠藤(C.wallichiiWight)外观相近，常易混淆[9].为进一步完善青羊参饮片质量标准，本研究对青羊参饮片的性状、薄层色谱、浸出物进行标准研究，为制订青羊参饮片标准提供依据.

1 仪器与试药

1.1 仪器与试剂

KM5200DE型超声波清洗器(昆山美美超声仪器有限公司)，AUW220D电子天平(日本岛津公司)，GoodSee-10型薄层色谱成像仪(上海科哲生化科技有限公司)，硅胶G薄层色谱板(Merck公司1.05626.0001，10 cm×20 cm).试剂均为分析纯，水为纯化水.

1.2 对照品与样品

青羊参对照药材购于中国食品药品检定研究院(批号：660012-201501).15批青羊参饮片样品来源于5家中药饮片生产单位，具体见表1.

表1 青羊参饮片来源表

2 方法与结果

2.1 成品性状

青羊参饮片的成品为类圆形或不规则形厚片.其外表皮呈黄褐色至棕褐色，有横皱纹及横长皮孔，表皮脱落处呈黄褐色.成品质硬，易折断，折断时有粉尘，折断面呈类白色，可见淡黄色点状突起(导管)，排列成不连续的环(图1).成品气辛香，味苦.

图1 青羊参饮片Fig. 1 Decoction Pieces of Cynanchum otophyllum

2.2 薄层色谱鉴别

分别称取15个青羊参饮片样品粉末各0.8 g，加入40 mL乙酸乙酯，超声处理30 min后过滤，滤液蒸干，在残渣中加入1 mL甲醇使其溶解，将溶解后溶液作为供试品溶液.另取青羊参对照药材0.8 g，按照供试品溶液的方法配制对照药材溶液.按照薄层色谱法(《中国药典(2020年版)》四部通则0502)试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙醚-乙酸丁酯-冰醋酸(体积比20∶6∶3∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外灯光(365 nm)下检视.

试验结果如图2所示，15批供试品色谱与对照品药材色谱在相应的位置上均呈现相同颜色的荧光斑点.青羊参供试品溶液和对照药材溶液的薄层色谱荧光斑点清楚，色谱一致，说明此薄层色谱鉴别方法可用于青羊参饮片的鉴别.

Q1～Q15—青羊参饮片；S—青羊参对照药材.图2 青羊参饮片薄层色谱Fig. 2 Thin Layer Chromatography of Cynanchum otophyllum

2.3 浸出物测定

按《中国药典》2020年四部通则(2201)中水溶性浸出物测定方法下的冷浸法[10]测定15批青羊参饮片的浸出物，浸出物见表2.15批青羊参饮片浸出物中，最低值为15.55%，最高值为22.96%，平均值为18.64%，中位值为22.41%.按平均值的80%计算浸出物的最低限度为14.91%，故建议青羊参饮片的浸出物限度定为“不得少于15.0%”.

表2 15批青羊参饮片浸出物测定数据

3 讨论

3.1 青羊参饮片薄层色谱鉴别方法的选择

青羊参经加工为饮片后，外观性状有了很大的改变，因此，薄层色谱鉴别方法显得尤为重要.已有学者对薄层色谱鉴别方法进行了研究，比如刘云怀等[11]采用正己烷—乙酸乙酯(体积比1∶3)作为展开剂，青羊参苷元为对照品的薄层色谱方法鉴别了青羊参药材；《云南省中药材标准》(2005年版第四册彝族药)[12]青羊参项下的薄层色谱鉴别方法是以甲苯—乙酸乙酯—甲酸(体积比5∶1∶0.5)作为展开剂，以青羊参对照药材为对照.采用这两种方法制备供试品溶液，前者需回流3 h，后者需回流1 h并进行两次萃取，两种方法均需要较长时间.本研究采用环己烷—乙醚—乙酸丁酯—冰醋酸(体积比20∶6∶3∶0.2)作为展开剂，青羊参对照药材为对照，青羊参饮片粉末加乙酸乙酯，超声处理30 min后过滤，滤液蒸干，残渣用1 mL甲醇溶解制备供试品溶液，供试品溶液制备过程时间短，操作简便.本研究结果显示，青羊参对照药材溶液和供试品溶液的薄层色谱荧光斑点清楚，色谱一致，说明此薄层色谱鉴别方法可靠，可作为青羊参饮片的鉴别方法.

3.2 青羊参饮片浸出物测定方法及限度的确定

青羊参饮片较少用在中成药制剂中，主要在中医临床中配伍使用[4].本研究在浸出物考察试验中，选择水为溶剂，使浸出物指标能更全面反映出青羊参饮片在汤剂中的溶出率.因青羊参饮片富含淀粉粒，本研究比较了水溶性浸出物的两种测定方法，分别是热浸法和冷浸法.结果发现，热浸法样品在经过水回流1 h后，呈粥样状态，不能过滤，经离心处理后，仍不能过滤；而冷浸法样品经水冷浸24 h后，能够正常过滤，故选择冷浸法作为青羊参饮片浸出物的标准测定方法.本研究根据15批青羊参样品浸出物测定结果计算获得浸出物的最低限度值，建议青羊参饮片标准的浸出物检查限度设置为“不得少于15.0%”.

4 结论

青羊参饮片的质量是其临床疗效的重要保证.本研究建立的青羊参饮片薄层色谱鉴别方法，以及提出的青羊参饮片水溶性浸出物检查限度建议，为制订青羊参饮片的质量标准提供了参考.