山慈菇的化学成分研究

司函瑞，陈小玲，付东兴，王园园，李平亚※，钟淑霞※

（1.吉林大学药学院，吉林长春130021；2.吉林大学第一附属医院，吉林长春130021）

兰科植物杜鹃兰[Cremastra appendiculata（D.Don）Makino]的干燥假鳞茎是药材山慈菇的基源之一[1]。山慈菇主要产于山西、甘肃、长江流域及长江流域以南，多生长于海拔900～3 600 m的山坡林下和溪边阴湿地。近年来，我国秦岭淮河以南地区人们将其用于煲汤和泡茶，其化学成分主要有菲类、联苄类和有机酸类等[2]，具有降压、抗菌和抗肿瘤等功效，临床上多有应用，是一种重要的药材。本文从山慈菇80%乙醇的提取物中分离得到15个化合物，分别鉴定为正三十二烷醇（Ⅰ）、麦角甾醇（Ⅱ）、5-羟甲基糖醛（Ⅲ）、羊毛甾（Ⅳ）、没食子酸（Ⅴ）、shancigusinⅠ（Ⅵ）、天麻素（Ⅶ）、1-（4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基苄基）-4-甲基-2-异丁基苹果酸（Ⅷ）、1-（4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基苄基）-4-乙基-2-异丁基苹果酸、5'-methoxyisolariciresinol-9'-O--D-xylopyranoside（Ⅹ）、山药素Ⅲ（Ⅺ）、-谷甾醇（Ⅻ）、葛根素（XIII）、芥子酸（XIV）和木犀草素（XV），其中化合物Ⅱ、Ⅹ和XIII为首次从杜鹃兰属中分离得到，化合物Ⅱ、Ⅹ、XIII和XIV为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

见表1。

表1 实验仪器及试剂Table 1 Experimental equipments and reagents

2 提取与分离

将药材山慈菇干燥后称取4.5 kg，用80%乙醇加热回流3次，每次2 h，合并提取液，回收溶剂后得浸膏390.1 g。将浸膏用水分散开，分别用石油醚、乙酸乙酯和水饱和正丁醇萃取。合并各萃取液，回收试剂后得各萃取层稠膏：石油醚层18.9 g、乙酸乙酯层37.2 g、正丁醇层80.1 g。石油醚层稠膏反复经正相硅胶柱色谱，石油醚:丙酮（50:1、30:1、20:1、15:1、10:1）梯度洗脱，TLC跟踪各柱色谱流分后合并得到Fr.A。Fr.A经正相硅胶色谱柱洗脱得化合物Ⅰ（3.7 mg）和化合物Ⅱ（9.3 mg）。乙酸乙酯层稠膏经正相硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮系统（50:1、30:1、10:1、5:1、0:1）和二氯-甲醇系统（10:1、5:1、1:1）梯度洗脱得到12个组分Fr.B～Fr.M,Fr.B用ODS反相硅胶柱色谱和重结晶技术得到化合物Ⅲ（4.7 mg）、Ⅳ（7.2 mg）、Ⅴ（2.9 mg），Fr.D用正相硅胶得到化合物Ⅵ（9.2 mg）、Ⅶ（8.6 mg），Fr.E经正相硅胶和半制备液相得到化合物Ⅷ（5.6 mg）、Ⅸ（6.4 mg）。Fr.G经Sephadex LH-20得到化合物Ⅹ（7.9 mg）。Fr.K经半制备液相和重结晶等技术得到化合物Ⅺ（16mg）、Ⅻ（26.4 mg）。正丁醇层稠膏经大孔树脂D101以乙醇-水（30:1、60:1、90:1、1:0）梯度洗脱得到4个组分Fr.N～Fr.Q，Fr.N经过ODS反相和半制备液相得到化合物XIII（4.7 mg）、XIV（5.2 mg），Fr.Q经过Sephadex LH-20和半制备液相得到XV（6.3 mg）。

3 结构鉴定

化合物Ⅰ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,CDCl3）3.64（2 H,t,J=6.8Hz,H-1）,1.58（2H,m,H-2）,1.27（58H,brs,H-3～H-31）,0.89（3H,t,J=6.8Hz,H-32）;13C-NMR（150MHz,CDCl3）:63.07（C-1）,32.74（C-2）,31.92（C-3）,29.69,29.44,29.35,25.75（C-4～C-30）,22.68（C-31）,14.09（C-32），以上波谱数据与文献[3]报道数据基本一致，故鉴定化合物Ⅰ为正三十二烷醇。

化合物Ⅱ，白色针晶（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,DMSO-d6）:5.56（1H,d,J=4.8Hz,H-6）,5.38（1H,m,J=4.8Hz,H-7）,5.19（2H,m,H-22,H-23）,3.61（1H,m,H-3）,1.04（3H,d,J=6.6Hz,H-21）,0.94（3H,s,H-19）,0.91（3H,d,J=6.8Hz,H-26）,0.84（3H,d,J=6.8Hz,H-28）,0.82（3H,d,J=5.6Hz,H-27）,0.63（3H,s,H-18）;13C-NMR（150MHz,DMSO-d6）:140.93（C-8）,140.66（C-5）,134.85（C-22）,132.25（C-23）,119.11（C-6）,116.65（C-7）,70.59（C-3）,55.90（C-17）,54.94（C-14）,45.61（C-9）,42.33（C-24）42.15（C-13）,38.78（C-12）,37.30（C-1）,37.05（C-10）,33.82（C-25）,32.19（C-2）,28.27（C-16）,23.08（C-15）,21.07（C-11）,20.84（C-21）,20.20（C-26）,19.77（C-27）,17.12（C-28）,16.81（C-19）,12.16（C-18）。以上数据与文献[4]报道数据基本一致,故鉴定化合物Ⅱ为麦角甾醇。

化合物Ⅲ，棕色油状物（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:9.54（1H,s,H-5）7.42（1H,d,J=3.6Hz,H-2）,6.60(1H,d,J=3.6Hz,H-3）,4.53（2H,s,CH2O）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:179.91（CHO-）,162.23（C-5）,153.82（C-2）,124.79（C-3）,110.82（C-4）,57.69（CH2）。以上数据与文献[5]报道数据基本一致，故鉴定化合物Ⅲ为5-羟甲基糠醛。

化合物Ⅳ，白色针晶（石油醚-丙酮）。1H-NMR（600 MHz,CDCl3）:5.12（1H,t,J=7.0Hz,H-24）3.23（1H,m,H-3）,1.71（3H,s,H-27）,1.60（3H,s,H-26）,1.01（3H,s,H-29）,0.99（3H,s,H-19）,0.93（3H,d,J=6.7 Hz,H-20）,0.91（3H,s,H-28）,0.83（3H,s,H-18）,0.71（3H,s,H-30）;13C-NMR（150MHz,CDCl3）:134.78（C-8）,134.45（C-9）,130.26（C-25）,125.96（C-24）,79.05（C-3）,52.28（C-17）,48.10（C-5）,47.26（C-14）,35.65（C-1）,32.91（C-12）,30.40（C-15）,28.14（C-16）,26.50（C-2）,26.01（C-7）,25.44（C-26）,21.12（C-11）,19.32（C-19）,18.01（C-21）,15.00（C-29）。以上数据与文献[6]数据基本一致，故鉴定化合物Ⅳ为羊毛甾醇。

化合物Ⅴ，无色结晶（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:7.06（2H,s,H-3,H-7）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:167.45（C-1）,146.40（C-4,C-6）,137.97（C-5）,120.42（C-2）,108.70（C-2,C-7）。以上数据与文献[7]报道数据基本一致，故鉴定化合物Ⅴ为没食子酸。

化合物Ⅵ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:7.64（1H,d,J=16.0 Hz,H-7）,7.53（2H,d,J=8.2 Hz,H-2,H-6）,7.34（2H,d,J=8.2 Hz,H-2',H-6'）,7.10（4H,d,J=8.2 Hz,H-3,H-5,H-3',H-5'）,6.40（1H,d,J=16.0 Hz,H-8）,5.14（1H,s,H-7'）,4.92（1H,d,J=7.2 Hz,H-1″）,4.91（1H,d,J=7.2 Hz,H-1'''）,3.89（2H,d,J=12.0 Hz,H-6″,H-6'''）,3.71（2H,dd,J=12.0Hz,5.4 Hz,H-6″,H-6'''）,3.49（2H,m,H-5″,H-5'''）,3.47（2Hm,H-2″,H-2'''）,3.46（2H,m,H-3″,H-3'''）,3.44（2H,m,H-4″,H-4'''）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:167.86（C-9）,160.55（C-4）,159.61（C-4'）,145.62（C-7）,130.61（C-1'）,130.35（C-2',C-6'）,130.24（C-2,C-6）,129.34（C-1）,118.45（C-3,C-5）,118.32（C-3',C-5'）,116.51（C-8）,101.91（C-1'''）,101.71（C1″）,77.73（C-3″,C-3'''）,77.69（C-5″,C-5'''）,74.55（C-2″,C-2'''）,71.92（C-4″）,71.83（C-4'''）,68.61（C-7'）,62.19（C-6″,C-6'''''）。以上数据与文献[8]报道数据对照基本一致，故确定化合物Ⅵ为shancigusinⅠ.

化合物Ⅶ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:7.06（2H,d,J=8.5Hz,H-3,H-5）,6.89（2H,d,J=8.5Hz,H-2,H-6）,4.52（1H,s,H-1'）,4.42（2H,s,H-7）,3.77（1H,m,J=12.1Hz,3.7Hz,H-6'）,3.45（1H,dd,J=12.1Hz,3.7Hz,H-6'）,3.36（4H,m,H-2'～H-5'）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:132.82（C-4）,129.56（C-3,C-5）,117.82（C-2,C-6）,102.59（C-1'）,78.28（C-3'）,78.16（C-5'）,75.09（C2'）,71.55（C-4'）,64.97（C-7）,62.68（C-6'）。以上数据与文献[9]报道数据基本一致,故确定化合物Ⅶ为天麻素。

化合物Ⅷ，白色粉末（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:7.36（2H,d,J=8.4Hz,H-2',H-6'）,7.26（2H,d,J=8.4Hz,H-2',H-6'）,5.10（1H,d,J=11.6Hz,H-7'）,5.07（1H,d,J=11.6Hz,H-7'）,4.92（1H,d,J=7.4Hz,H-1'''',H-1'''）,3.90（1H,dd,J=1.8Hz,12.0Hz,H-6''''）,3.47（1H,m,H-2'''',H-2'''''）,3.45（1H,m,H-3'''',H-3'''''）,3.45（1H,m,H-5'''',H-5'''''）,3.41（1H,m,H-4'''',H-4'''）,2.91（1H,d,J=15.7Hz,H-3）,2.62（1H,d,J=15.7Hz,H-3）,1.62（1H,m,H-6）,1.58（1H,m,H-5）,1.47（1H,m,J=5.6Hz,14.0Hz,H-5）,0.93（3H,d,J=6.5Hz,H-7）,0.86（3H,d,J=6.5Hz,H-8）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:175.34（C-1）,171.80（C-4）,159.37（C-4'）,136.72（C-1'）,131.67（C-2',C-6'）,117.92（C-3',C-5'）,102.44（C-1''''）,78.28（C-3'''',C-3'''）,78.09（C-5'''',C-5'''''）,76.80（C-2）,75.04（C-2'''',C-2'''''）,71.51（C-4'''',C-4'''''）,68.12（C-7'）,62.65（C-6'''',C-6'''''）,46.35（C-5）,44.64（C-3）。以上数据与文献[10]报道数据基本一致，故确定化合物Ⅷ为1-（4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基苄基）-4-甲基-2-异丁基苹果酸。

化合物Ⅸ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:7.36（2H,d,J=8.4 Hz,H-2',H-6'）,7.26（2H,d,J=8.4 Hz,H-2',H-6'）,5.12（2H,d,J=11.6Hz,H-7'）,5.07（1H,d,J=11.6Hz,H-7'）,4.92（1H,d,J=7.4Hz,H-1'''',H-1'''）,3.90（1H,dd,J=1.8Hz,12.0Hz,H-6''''）,3.72（1H,m,J=5.2Hz,12.0Hz,H-6'''''）,3.47（2H,m,H-3'''',H-3'''''）,3.46（2H,m,H-2'''',H-2'''''）,3.41（2H,m,H-5'''',H-5'''''）,3.40（2H,m,H-4'''',H-4'''''）,2.57（1H,d,J=15.6Hz,H-3）,2.43（1H,d,J=15.6Hz,H-3）,1.71（1H,m,H-6）,1.67（1H,m,H-5）,1.54（1H,d,J=5.6Hz,14.0Hz,H-5）,0.94（3H,d,J=6.5Hz,H-7）,0.82（3H,d,J=6.5Hz,H-8）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:175.73（C-1）,170.97（C-4）,159.85（C-4'）,132.82（C-2',C-6'）,129.56（C-1'）,117.82（C-3',C-5'）,102.59（C-1'''',C-1'''''）,78.28（C-5'''',C-5'''''）,78.16（C-3'''',C-3'''''）,75.09（C-2）,74.82（C-2'''',C-2'''''）,71.55（C-4'''',C-4'''''）,67.34（C-7'）,62.68（C-6'''',C-6'''''）,46.89（C-5）,44.89（C-3）,25.33（C-6）,24.98（C-7）,24.89（C-8）。以上数据与文献[11]报道数据基本一致，故鉴定化合物Ⅸ为1（-4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基苄基）-4-乙基-2-异丁基苹果酸。

化合物Ⅹ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,DMSOd6）:6.60（1H,s,H-6）,6.41（2H,s,H-2',H-6'）,6.01（1H,s,H-3）,4.06（1H,d,J=9.6 Hz,H-7'）,3.89（1H,d,J=7.4 Hz,H-1″）,3.86（1H,d,J=8.3Hz,H-9'）,3.73（3H,s,5-OCH3）,3.67（6H,s,3',5'-OCH3）,3.63（1H,m,H-5″）,3.58（1H,m,H-9）,3.45（1H,m,H-9）,3.29（1H,m,H-4″）,3.24（1H,m,H-9'）,3.11（1H,m,H-3″）,3.03（1H,dd,J=7.6Hz,4.6Hz,H-2″）,2.97（1H,d,J=11.0Hz,H-4）,2.94（1H,s,H-5″）,2.72（2H,m,H-7）,1.92（1H,m,H-8）,1.74（1H,m,H-8'）;13CNMR（150MHz,DMSO-d6）:148.48（C-3'）,148.09（C-5'）,144.08（C-3）,143.88（C-4）,136.78（C-1'）,133.88（C-4'）,132.33（C-6）,127.47（C-1）,115.94（C-5）,111.29（C-2）,105.03（C-2'）,75.99（C-3″）,72.11（C-2″）,69.32（C-4″）,67.07（C-9'）,61.09（C-9）,56.98（3'-OCH3,5'-OCH3）,44.34（C-7'）,38.40（C-8）,33.31（C-7）。以上数据与文献[11]报道数据基本一致，故鉴定化合物Ⅹ为5'-methoxyisolariciresinol-9'-O--D-xylopyranoside。

化合物Ⅺ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,DMSOd6）:7.14（1H,t,J=7.9Hz,H-5′）,6.74（1H,d,J=7.6 Hz,H-6′）,6.66（1H,s,J=7.9 Hz,H-4′）,6.62（1H,s,H-2′）,6.30（1H,s,H-6）,6.24（2H,s,H-2,H-4）,3.72（3H,s,5-OCH3）,2.78（4H,m,H-,H-′）;13C-NMR（150MHz,DMSO-d6）:158.26（C-5）,157.28（C-3）,157.22（C-3′）,143.70（C-1）,142.97（C-1′）,129.10（C-5′）,118.95（C-6′）,115.22（C-2′）,112.74（C-4′）,107.88（C-2）,104.88（C-6）,98.76（C-4）,54.77（5-OCH3）,37.11（C-）,36.77（C-′）。以上波谱数据和文献[12]数据基本一致，故鉴定化合物Ⅺ为山药素III。

化合物Ⅻ，白色晶体（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,DMSO-d6）:5.28（1H,m,H-1）,3.55（1H,m,H-3）,1.03（3H,s,19-CH3）,0.97（3H,d,J=1.0 Hz,21-CH3）,0.87（3H,m,26-CH3），0.85（3H,m,29-CH3）,0.83（3H,m,27-CH3）,0.70（3H,m,18-CH3）;13C-NMR（150 MHz,DMSO）:140.43（C-5）,121.20（C-6）,70.09（C-3）,56.15（C-14）,55.41（C-17）,49.58（C-9）,41.84（C-24）38.29（C-4）,36.81（C-13）,36.20（C-12）,33.33（C-20）,31.41（C-22）,31.35（C-8）,29.25（C-25）,28.69（C-16）,25.42（C-2）,23.85（C-15）,22.59（C-28）,20.58（C-11）,19.70（C-27）,19.40（C-18）,19.03（C-29）,18.92（C-21）,11.77（C-26）,11.66（C-19）。以上数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定化合物Ⅻ为-谷甾醇。

化合物XIII，黄色粉末。1H-NMR（600MHz,DMSO-d6）:8.18（1H,s,H-2）,7.89（1H,d,J=8.8Hz,H-5）,7.37（2H,d,J=8.0 Hz,H-2',H-6'）,6.96（1H,d,J=8.8Hz,H-6）,6.82（2H,d,J=8.0Hz,H-3',H-5'）,5.10（1H,d,J=9.9Hz,H-1″）,4.05-3.29（5H,m,H-2″,H-3″,H-4″,H-5″,H-6″）;13CNMR（150MHz,DMSO-d6）:174.89（C-4）,161.04（C-7）,157.14（C-9）,152.64（C-2）,130.01（C-2′,C-6′）,126.22（C-5）,123.05（C-1′）,122.51（C-3）,116.08（C-10）,115.67（C-6）,114.94（C-3′,C-5′）,112.65（C-8）,81.83（C-5″）,78.74（C-1″）,73.41（C-2″）,70.75（C-3″）,70.45（C-4″）,61.40（C-6″）。以上数据与文献[13]报道基本一致，故鉴定化合物XIII为葛根素。

化合物XIV，黄色针晶（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,DMSO-d6）:7.58（1H,d,J=15.8Hz,H-7）,6.90（2H,s,H-2,H-6）,6.34（1H,d,J=15.8Hz,H-8）,3.85（6H,s,3-OCH3,5-OCH3）;13C-NMR（150MHz,DMSO）:168.42（C-9）,148.49（C-3,C-5）,145.28（C-7）,138.52（C-4）,125.06（C-1）,116.52（C-8）,106.55（C-2,C-6）,56.38（4-OCH3）。以上数据与文献[14]报道基本一致，故鉴定化合物XIV为芥子酸。

化合物XV，黄色粉末。1H-NMR（600 MHz,DMSOd6）:12.95（1H,s,5-OH）,7.42（1H,d,J=2.0 Hz,H-6'）,7.38（1H,d,J=2.0 Hz,H-2'）,6.87（1H,d,J=8.2 Hz,H-5'）,6.64（1H,s,H-3）,6.52（1H,d,J=1.7 Hz,H-8）,6.19（1H,d,J=1.6 Hz,H-6）;13C-NMR（150MHz,DMSO-d6）:181.64（C-4）,164.10（C-7）,163.87（C-2）,161.46（C-5）,157.26（C-9）,149.67（C-4'）,145.71（C-3'）,121.48（C-1'）,118.97（C-6'）,115.99（C-5'）,113.35（C-2'）,103.68（C-10）,102.85（C-3）,98.80（C-6）,93.81（C-8）。以上数据与文献[15]报道数据基本一致，故鉴定化合物XV为木犀草素。

4 讨论

本实验采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、半制备高效液相、结晶、重结晶等技术对山慈菇80%乙醇提取物进行分离，并依据所得单体化合物的物理化学性质和核磁共振波谱图对所得单体进行结构分析鉴定得到15个化合物，分别鉴定为正三十二烷醇（Ⅰ）、麦角甾醇（Ⅱ）、5-羟甲基糖醛（Ⅲ）、羊毛甾（Ⅳ）、没食子酸（Ⅴ）、shancigusinⅠ（Ⅵ）、天麻素（Ⅶ）、1-（4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基苄基）-4-甲基-2-异丁基苹果酸（Ⅷ）、1-（4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基苄基）-4-乙基-2-异丁基苹果酸、5'-methoxyisolariciresinol-9'-O--D-xylopyranoside（Ⅹ）、山药素Ⅲ（Ⅺ）、-谷甾醇（Ⅻ）、葛根素（XIII）、芥子酸（XIV）和木犀草素（XV），其中化合物Ⅱ、Ⅹ和XIII为首次从杜鹃兰属植物中分离得到，化合物Ⅱ、Ⅹ、XIII和XIV为首次从该植物中分离得到。