长白山野生软枣猕猴桃组培快繁技术研究

玄英实，周丽洁，周旭，李敏，张阳，朴雪梅，匙坤，金雪梅

（延边特色产业发展中心，吉林延吉133000）

软枣猕猴桃[Actinida arguta(Sieb.et Zucc.)Planch]属于猕猴桃属（Actinidiace）多年生大型落叶藤本植物，俗称软枣子[1]。分布于东北、华北、西北及长江流域[1]，朝鲜、日本也有分布[2]，但以我国东北三省的资源最为丰富，尤其长白山更为常见。软枣猕猴桃因其果实酸甜可口，柔软多汁，富含维生素C[3]、B族维生素、氨基酸、类胡萝卜素及镁、铁、钾、钠等多种营养成分[4]，深受广大人们的青睐，近10年人工栽培也得到快速发展。吉林省对软枣猕猴桃人工栽培研究历史虽长，但发展速度相对较慢，近几年受辽宁省软枣猕猴桃产业的影响，多数推广品种基本依靠辽宁省品种，还未发挥长白山丰富资源优势，形成自己独特的软枣产业。课题组在长白山一带资源考察过程中，发现果实较大、酸甜适口、果皮浅绿而较厚的野生种质资源。为了该优良种质资源快速应用于试验示范推广，也为了给长白山野生软枣资源利用工作提供科学依据，对其组培快繁技术进行了研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料

2019年3 月份取1年生枝条，剪成约50 cm长的茎段，放入罐中水培催芽，温度控制在20～25℃，15 d后腋芽陆续萌发，待腋芽长到5 cm左右，剪取作为外植体。

1.2 试验方法

1.2.1 消毒方法将剪取的外植体放入小烧杯中罩纱布后，流水冲洗30 min，移到超净工作台上，用75%酒精消毒15 s，后用无菌水冲洗2次，再用0.1%升汞消毒3 min，最后用无菌水冲洗5～6次。

1.2.2 初代培养将消毒的外植体剪成1 cm长1芽1段，在无菌条件下将其接种于以MS为基本培养基，添加6种不同浓度6-BA和NAA的初代培养基中。每处理5瓶，每瓶接3个，设3次重复。每天观察生长情况，30 d后在无菌条件下调查腋芽萌发率和株高。

1.2.3 增殖培养将培养30 d的上述腋芽，在无菌条件下剪成至少有1芽的1 cm长小段，转接于以MS为基本培养基，添加9种不同浓度6-BA和ZT的增殖培养基中。每处理5瓶，每瓶接3个，设3次重复。每天观察生长情况，40 d后在无菌条件下调查增殖系数和株高。

1.2.4 生根培养将培养40 d的上述增殖腋芽在无菌条件下剪成1 cm长的顶芽或1芽1段侧芽，分别转接于以1/2MS为基本培养基，添加5种不同浓度IBA和IAA植物激素的生根培养基中。每处理5瓶，每瓶接3个，设3次重复。每天观察生长情况，30 d后打开培养瓶在室内放置1 d，取出试管苗用水洗掉培养基，调查根数和株高。

1.2.5 移栽将调查后的生根试管苗移栽于草炭土中，15 d后调查小苗长出新叶个数（成活率）和长势情况。

1.2.6 培养环境所有培养基均含蔗糖3%，琼脂0.8%，pH 5.8～6.0。培养温度25℃，光照时间15 h/d，光照强度2 000 lx。

2 结果与分析

2.1 初代培养

从表1可以看出，不同浓度的6-BA、NAA均能诱导外植体腋芽萌发，其中6-BA浓度为1.0 mg L-1、NAA浓度为0.3 mg L-1和6-BA浓度为1.5 mg L-1、NAA浓度为0.3mg L-1的两种处理培养基中，其组培苗萌发率分别是88.97%和86.50%，显著优于其他处理，并且6-BA浓度为1.0 mg L-1、NAA浓度为0.3 mg L-1的培养基中，组培苗的平均株高达到5.29 cm，长势也显著优于其他处理。综上所述，此软枣猕猴桃资源腋芽萌发的最适初代诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg L-1+NAA 0.3 mg L-1培养基。

表1 不同处理对初代培养的影响Table 1 Effects of different treatments on the primary culture

2.2 增殖培养

增殖培养10 d后，腋芽开始萌发，第40天观察记录其生长情况。由表2可以看出，不同浓度的6-BA和ZT均能诱导出丛生芽。当6-BA浓度为1.5 mg L-1、ZT浓度为0.4 mg L-1时，其组培苗平均增殖系数为3.55，显著优于其它处理；当6-BA浓度为1.5 mg L-1、ZT浓度为0.4 mg L-1和6-BA浓度为0.5 mg L-1、ZT浓度为0.6 mg L-1时，其增殖苗平均株高为5.44 cm和5.71 cm长势优于其他处理。综上所述，此品种软枣猕猴桃增殖的最佳增殖培养基是MS+6-BA 1.5 mg L-1+ZT 0.4 mg L-1培养基，见图1。

表2 不同处理对增殖培养的影响Table 2 Effects of different treatments on proliferation culture

2.3 生根培养

由表3可以看出，不同浓度的IBA和IAA均能促使组培苗生根。当IBA浓度为0.2 mg L-1、IAA浓度为0.1 mg L-1时，生根率达93%，平均主根数最多达4.92个，株高为3.92 cm，毛细根发达旺盛数量较多，见图2。所以此软枣猕猴桃资源最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg L-1+IAA 0.1 mg L-1。

表3 不同处理对组培苗生根的影响Table 3 Effects of different treatments on the rooting culture

图2 野生软枣猕猴桃组培苗生根情况Fig.2 Rooting of the tissue culture seedlings of Actinidia arguta

2.4 炼苗

将组培苗移栽至草炭土中，在室内温度控制在25℃、湿度控制在70%，15 d后调查其成活率为90%，且成活的苗长势良好，生长健壮，见图3。

图3 野生软枣猕猴桃组培苗移栽花盆成苗情况Fig.3 The seedling formation of wild Actinidia arguta tissue culture seedlings transplanted in flowerpots

3 结论与讨论

以长白山野生软枣猕猴桃嫩茎段为外植体，研究不同植物激素种类及浓度对外植体的初代培养、增殖培养和生根培养的影响，结果表明，此软枣猕猴桃资源的外植体最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg L-1+NAA 0.3 mg L-1，平均萌发率达86.50%，平均株高5.29 cm；最佳增殖培养基为MS+6-BA 1.5 mg L-1+ZT 0.4 mg L-1，平均增殖系数3.55，平均株高5.44 cm；最佳生根培养基为1/2MS+IBA0.2mg L-1+IAA0.1mg L-1，成活率达93%，平均主根数4.92个，平均株高3.92 cm。生根后的组培苗移栽至草炭土中，其成活率达90%。植物组织培养中外植体芽的诱导、增殖培养、生根培养都与激素种类和激素组合浓度有关。外植体来源不同，内源激素水平也不同，而且培养基中所含激素相对浓度也不同，从而导致来源不同的外植体在分化能力等方面存有差异[5,6]。

我国野生猕猴桃资源丰富，目前国内外已有许多软枣猕猴桃优良品种的人工繁殖获得成功[7-9]。在已报道的软枣猕猴桃繁殖技术中，生根培养几乎是把增殖培养的新苗转接到生根培养基中继续培养，本研究繁殖技术中生根培养是把培养40 d的增殖培养苗的腋芽转接于生根培养基中培养，此繁殖技术能增加生根培养苗的数量，并在一定程度上能有效提高组织培养的效率。软枣猕猴桃品种很多，但真正各项性状都比较优秀的品种很少[10]。本试验研究长白山野生软枣猕猴桃的组培快繁技术，可为吉林省此软枣猕猴桃资源开发及其优良品种培育奠定基础。