浅议黄栀子组培苗的瓶外生根

涂庆华

[摘 要]随着社会经济与生物科学技术的迅猛推进，植物组织培养技术在当今人们的生产生活中得以广泛推广与应用。该技术属于一项经济效益较高的生物性技术，同时也是植物新品种迅速繁殖的创新手段，具有繁殖速度快、繁殖系数大、苗木整齐、节约成本等特征。因此，文章围绕黄栀子组培苗的瓶外生根研究，具有至关重要的实用价值与研究意义。

[关键词]栀子组;培苗;瓶外生根;栽培技术;植物繁殖

[中图分类号]S567.239 [文献标识码]A

黄栀子又被称之为林兰、山栀，系茜草科栀子属植物。近年来，试管苗瓶外生根技术被成功研发，尤其是在组培工厂化育苗快速发展的带动下，试管苗瓶外生根的相关研究愈来愈广泛，如技术方法、解剖学、生根生理等，但目前针对观赏类与药用类的黄栀子组培苗瓶外生根的研究较少。为此，文章拟以黄栀子为例，通过采用瓶外无土生根实验，深入研究无土栽培对黄栀子组培苗生根的影响，旨在最大程度压缩黄栀子组培苗的生产成本，并为相关研究或产业化生产提供可供参考的意见或建议。

1 材料与方法

1.1 实验的材料

采用本实验室黄栀子无菌丛生苗，并用带有叶片的黄栀子茎段作为本次实验材料。

1.2 实验方法

1.2.1 黄栀子组培苗增殖及生根的外部因子影响。BA与KT的影响。将MS作为基本的培养基，并加入5g/L的琼脂粉、30㎎/L的蔗糖和0.1㎎/L的NAA，把pH值定位5.8;注入40ml培养基到150ml的培养瓶之后封盖，并用高温灭菌。然后取2片叶单体接入到瓶中，并培养观察40天，且每个处理均设置3次重复。其中，BA与KT的浓度依次为0.2㎎/L、0.5㎎/L、1.0㎎/L。培养的温度范围为23OC-27OC，湿度为70%，光照强度1600Lux，且每天的光照时长达16h。

糖浓度的影响。在琼脂粉7g/L+NAA0.1㎎/L+BA1.0㎎/L+MS的培养基中（pH值为5.8），分别加入0g/L、10g/L、20g/L的蔗糖。培养的条件与方法同上。

光照强度的影响。从琼脂粉7g/L+NAA0.1㎎/L+BA1.0㎎/L+MS的培养基中（pH值为5.8）中取出40ml，并注入到150ml的培养瓶之中，将光照强度设置为800Lux、1600Lux、2400Lux。培养的条件与方法同上。

1.2.2 栀子生物反应器的具体培养。把15个外植体均接入到3L的柱形体生物反应器中，培养基为蔗糖307g/L+NAA0.1㎎/L+BA1.0㎎/L+MS的培养基中（pH值为5.8），1L的注入量。具体分为浸没式的黄栀子生物反应器培养、接触式与间歇浸没式的栀子生物反应器培养，其中空气的注入量要达到0.1vvm，温度在23°C-27°C，光照强度保持在2400Lux，且每天的光照时长为16h，培养40天，每个处理要重复3次。

1.2.3 黄栀子瓶外生根及幼苗的驯化。在黄栀子的瓶外生根培养实验中，选择25.2㎝（长）、18.2㎝（宽）、6.0㎝（高）为1.6L的四方形容器，并将1L的营养液倒入其中。支持物质为珍珠岩与泡沫板。

黄栀子生根的营养液pH值影响。分别将营养液的pH值调节为3、4、5、6，并保持10天更换一次，用电导率仪和pH计测量营养液的EC和pH。培养的条件与方法同上。

黄栀子生根的营养液电导率影响。分别将电导率调节成0.5、1.0、1.5、2.0，pH值定位5.0，且10天更换一次液体，并对营养液的EC和pH进行测定。培养的条件与方法同上。

1.3 数据的处理

实验的各项数据均采用SAS程序进行分析，并配置以邓肯氏新复极差法予以比较，p≤0.05为显著水平。

2 结果与分析

2.1 黄栀子组培苗增殖与发根的BA与KT的影响

把黄栀子无根组培苗接种到浓度不同的BA与KT的培养基中，发现5到7天时黄栀子叶片的切口处出现愈伤组织，当培养至18天左右，栀子切口处的腋芽出现萌动。根據40天培养期的结果调查显示，BA与KT的黄栀子增殖成效十分明显，尤其是BA的成效更优。

2.2 黄栀子组培苗增殖与发根的蔗糖浓度的影响

把黄栀子的幼苗接种到MS培养基之中，并添加浓度不同的蔗糖予以增殖培养，结果如下图1所示。诸如，蔗糖浓度为零时，栀子组培苗的腋芽部位膨大、叶片窄小、不定芽且叶片呈淡黄色;蔗糖浓度为10-30g/L时，栀子幼苗数量随着蔗糖的浓度增加而不断增加;蔗糖浓度超过30g/L时，栀子的不定芽分化明显处于被抑制状态。从中可见，蔗糖的浓度对栀子培苗增殖有重要影响。

2.3 黄栀子组培苗增殖与发根的光照强度的影响

光照强度显著对黄栀子组培苗增殖与生长产生影响（如图2所示）。譬如，当光照强度在1600Lux-4800Lux之间时，不定苗数没有显著性的差异，且都高于800Lux的处理;随着光照强度的不断增加，株高也呈递增态势，其中3200Lux与4800Lux分别是处理过程中的株高最大值。与此同时，通过对叶绿素含量的测定发现，在1600Lux与2400Lux的光照强度时，栀子组培苗的叶片颜色呈现深绿色，且叶绿素含量明显较高。

3 结论

（1） 黄栀子组培苗增殖培养的过程中，当培养基设置为琼脂粉7g/L+NAA0.1㎎/L+BA1.0㎎/L+MS+蔗糖30g/L （pH值为5.8），光照强度达到2400Lux时，黄栀子组培苗的增殖率不仅仅高，而且植株的成长十分健壮。另外，将0.1㎎/L的NAA加入到MS培养基中，有助于黄栀子的生根。

（2）在运用生物反应器对黄栀子进行大量扩繁时，采用完全的浸没式培养明显更具优势，但叶片卷曲较少。对此，可以采用调节供液的时间与次数进行改善。

（3）通过运用泡沫板促进黄栀子瓶外生根培养时，将营养液的pH值定位5.0，能够更加高质量、高效率地促进栀子的生根及生长。同时，与瓶内生根进行对比，瓶外生根能够节约超过47%的生产成本。

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