探讨煤工尘肺合并非小细胞肺癌患者中P53基因蛋白的表达

张建红，化静

（北京京煤集团总医院，北京 102300）

煤工尘肺是一种由于过量吸入尘土而形成的肺部疾病，多发于长时间处于多灰尘环境的人群中。煤工尘肺持续发展极易引发多种并发症，其中肺癌是最严重的并发症之一，严重威胁患者的生命健康和安全[1]。临床表明，多种肿瘤疾病发生时，机体内的P53 基因会出现突变、缺失或者失活情况，形成肺癌时，机体内具有较高的P53 基因蛋白表达阳性率，普遍超过50%[2]。因此，检测P53基因蛋白表达情况是临床诊断煤工尘肺合并非小细胞肺癌疾病的重要依据，同时，为临床制定具有针对性的治疗方案提供科学依据[3]。由于现阶段临床上关于P53 基因蛋白表达报道较少，基于此，本研究旨在分析煤工尘肺合并非小细胞肺癌患者中P53 基因蛋白的表达情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017 年1 月至2019 年1 月本院收治的煤工尘肺合并非小细胞肺癌患者64 例作为研究组，其中患者的煤工尘肺符合《GBZ 70-2015 职业性尘肺病的诊断》中的煤工尘肺诊断标准，并经过专业的煤工尘肺鉴定小组确诊。另选取同期本院收治的按确诊时间顺序符合入组条件的前64 例非职业病相关的男性非小细胞肺癌患者作为对照组。研究组年龄50～75 岁，平均年龄（62.5±1.8）岁；接尘时间 4～30 年，平均接尘时间（16.0±1.7）年；煤工尘肺分期：Ⅰ期29 例，Ⅱ期21 例，Ⅲ期14 例；并发肺癌病理组织学类型：鳞状细胞癌35 例，腺癌29 例。对照组年龄49～74 岁，平均年龄（61.5±1.6）岁；肺癌病理组织学类型：鳞状细胞癌34 例，腺癌30 例；全部为无接尘史，且无肺部职业病。两组临床资料比较差异无统计学意义，具有可比性。患者及家属均签署知情同意书，本研究获得医院伦理委员会批准。

1.2 方法 肿瘤个体化基因检测采用高通量测序技术对患者的样本（组织）进行DNA 分子序列深度测序，将研究组与对照组肺癌组织标本的蜡块组织切成10 µm 的薄片5～10片，取样品加入反应体系中，94 ℃预变性5 min，扩增条件为94 ℃ 45 s，55 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，扩增35个循环后72 ℃延伸5 min。取扩增产物5µL加入5µL上样缓冲液，在94 ℃保温5 min 后满上将其置于冰浴中5 min。将处理好的标本加样于8%非变性聚丙烯酰胺凝胶中，200 V电压电泳4 h。电泳结束后用P53 即用型SABC 试剂盒（武汉博士德公司）实施染色，DAB显色，利用Harris苏木素进行复染。检测结果为：细胞核内存在棕黄色颗粒。显色情况，阴性：肿瘤细胞显色低于10%；阳性：肿瘤细胞核显色超过10%。

1.3 观察指标 比较两组患者P53基因蛋白表达、不同病理类型中P53基因蛋白表达情况；两组患者P53基因蛋白表达情况与淋巴结转移的关系；两组P53基因蛋白表达情况与术后生存期的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析，计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验，计量资料以“”表示，行t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组P53 基因蛋白表达阳性率比较 研究组P53 基因蛋白表达阳性率明显高于对照组（χ2=5.165，P＜0.05），见表1。

表1 P53基因蛋白表达结果Table 1 P53 gene protein expression results

2.2 不同病理类型中P53 基因蛋白表达情况 研究组的鳞状细胞癌的P53 基因蛋白表达阳性率明显高于对照组（P＜0.05），而研究组的腺癌P53基因蛋白表达阳性率明显低于对照组（P＜0.05），见表2

表2 不同病理类型中P53基因蛋白表达情况（%）Table 2 Expression of P53 gene protein in different pathological types(%)

2.3 P53 基因蛋白表达情况与淋巴结转移的关系 研究组淋巴结转移阳性率明显高于对照组（P＜0.05），研究组无淋巴结转移阳性率明显低于对照组（P＜0.05）；两组淋巴结转移阳性率明显高于无淋巴结转移阳性率（P＜0.05），见表3。

表3 P53基因蛋白表达情况与淋巴结转移的关系Table 3 Relationship between P53 gene protein expression and lymph node metastasis

2.4 P53基因蛋白表达情况与生存期的关系 治疗后，机体内P53 基因发生突变的阳性率持续降低。手术治疗的生存期明显长于放化疗、靶向、免疫等治疗方式的生存时间。研究组生存时间≤18个月的阳性率明显高于对照组（P＜0.05），研究组生存时间＞18 个月的阳性率明显高于对照组（P＜0.05）；两组患生存时间≤18 个月的阳性率明显高于生存时间＞18个月的阳性率（P＜0.05），见表4。

表4 P53基因蛋白表达情况与生存期的关系（%）Table 4 Relationship between p53 gene protein expression and survival time(%)

3 讨论

野生型P53是一类特殊的抑癌基因，突变型P53则丧失了抑癌功能，同时，对野生型P53 活性进行抑制或使其彻底丧失活性，导致机体内的细胞发生转化和癌变[4]。煤工尘肺组病理组织学类型可依据P53 基因蛋白阳性表达情况分为鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌和细支气管肺泡癌等多种类型。大量临床研究表明，煤工尘肺合并肺癌生存期、淋巴结转移情况与P53基因蛋白阳性表达均密切相关，因为煤工尘肺普遍合并其他疾病发生，造成患者机体的抵抗力持续降低，同时机体自身的肺呼吸功能不断降低，实施肺叶手术切除后，患者的呼吸代偿功能得到较大程度的限制，同时基因蛋白阳性表达过高[5-6]。有研究表明，P53基因突变对患者的生存时间有较大影响，基因蛋白突变阳性患者的生存期较短，因此，临床上检测P53基因蛋白的表达具有重要意义[7]。

长期处于粉尘环境下可增加多种致癌物质的产生，促进SiO物质处于游离状态并造成致癌物质大量聚集，进一步发展为肺癌[8]。本研究结果显示，研究组P53 基因蛋白表达阳性率明显高于对照组（P＜0.05），且研究组鳞状细胞癌的P53基因蛋白表达阳性率明显高于对照组（P＜0.05），而研究组腺癌P53 基因蛋白表达阳性率明显低于对照组（P＜0.05），说明长期接受粉尘以及多种化学物质的局部刺激可以明显增加肺癌的发病风险。另外，说明不同病理类型中P53基因蛋白表达存在明显差异，为区分是否存在尘肺病提供重要的参考依据。煤工尘肺合并肺癌组患者长时间处于矿区井下环境中，其氡气含量和内照射剂量持续增加，临床研究表明，氡及其子体可以明显提高患者肺癌的发生率。本研究结果显示，研究组淋巴结转移阳性率明显高于对照组（P＜0.05），研究组无淋巴结转移阳性率明显低于对照组（P＜0.05）；两组淋巴结转移阳性率明显高于无淋巴结转移阳性率（P＜0.05）；研究组生存时间≤18 个月的阳性率明显高于对照组（P＜0.05），研究组生存时间＞18 个月的阳性率明显高于对照组（P＜0.05）；两组生存时间≤18个月的阳性率明显高于生存时间＞18 个月的阳性率（P＜0.05），说明机体内P53 阳性表达与淋巴结转移、生存期呈正相关，P53 基因蛋白表达是促使肺癌转移、决定患者预后中的重要因素。

综上所述，检测煤工尘肺合并NSCLC 肺癌患者机体内的P53基因蛋白表达，其检测结果可反映机体内淋巴结转移的关系以及生存期，为煤工尘肺合并NSCLC 肺癌的临床综合诊断和临床治疗提供重要的参考依据。