喉癌组织中NCAPH、Survivin、p53的表达及与临床病理特征的相关性研究

文 娟

湖南省湘潭市中心医院病理科 411100

喉癌是指发生于喉部上皮的恶性肿瘤，主要临床症状为声音沙哑、咽喉异常感、疼痛、血痰、吞咽困难、呼吸困难等，严重威胁患者的生命健康[1]。并且大量研究表明[2-3]，早期发现喉癌能够通过放射或镭射局部切除进行治疗，且术后能够发声，对于后期患者需接受范围更大之手术或全喉切除，需借助人工发声器说话。非染色体结构维持蛋白凝缩蛋白复合体Ⅰ亚单位H(NCAPH)是一种蛋白复合体，在细胞分裂过程中对染色体的组装和分裂起着重要的作用；Survivin是凋亡抑制蛋白家族成员，能够抑制细胞凋亡，参与肿瘤的发生与发展；p53是一种肿瘤抑制基因，可使细胞分裂终止于复制前期与合成期，诱导细胞凋亡[4]。三者均在早期诊断其他癌症中起到重要的作用。鉴于此，本文为了研究喉癌组织中NCAPH、Survivin、p53的表达及与临床病理特征的相关性，选取2018年12月—2019年12月收治的43例喉癌患者组织标本和同期在我院治疗的43例声带息肉患者组织标本进行对比。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2018年12月—2019年12月收治的43例喉癌患者组织标本，定为观察组；选择同期在我院治疗的43例声带息肉患者组织标本，定为对照组。观察组中男25例，女18例；年龄38～65岁，平均年龄为(51.62±10.27)岁。对照组中男24例，女19例；年龄38～66岁，平均年龄为(51.65±10.30)岁。两组的性别、年龄等比较差异无统计学意义(P>0.05)。本次研究获得我院伦理委员会的认证。纳入标准：(1)观察组经术前活检确诊为喉鳞状细胞癌者，对照组经频闪喉镜确诊为声带息肉者；(2)近1个月内未进行其他方式进行治疗者；(3)知情本次研究，签署知情同意书者。排除标准：(1)精神障碍者；(2)伴有心、肝、肾等功能不全者；(3)接受过专业发声或歌唱学习者。

1.2 试剂及药品 从武汉三鹰生物有限公司购买多克隆兔NCAPH抗体，稀释浓度为1∶100；从北京中山生物技术有限公司购买单克隆鼠Survivin、p53抗体。北京中杉金桥生物技术有限公司购买从免疫组染色(SP)试剂盒、二氨基联苯胺(DBA)显色试剂盒。

1.3 方法 先用10%甲醛固定喉癌组织标本和声带息肉组织标本，然后用石蜡包埋进行切片(厚度为4μm)，并用免疫组织化学SP染色处理(先脱蜡水化，用10%H2O2封闭10min，在pH=6.0的柠檬酸盐缓冲液中行高温高压抗原修复并加血清封闭；然后加一抗孵育，用DAB染色，苏木素复染，脱水，透明封片)。选取自制磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗设定为阴性对照，以阳性组织切片设定为阳性对照，按照购买试剂盒的操作说明进行操作。涉及仪器包括石蜡切片机、显微镜、电热恒温干燥箱等。喉癌组织标本和声带息肉组织标本NCAPH、Survivin、p53表达情况：喉癌组织标本中细胞核出现棕黄色或棕褐色颗粒判定为NCAPH阳性细胞；喉癌组织标本中细胞质或/和细胞核出现淡黄至棕黄色颗粒判定为Survivin阳性细胞；喉癌组织标本中细胞核出现棕黄至褐色颗粒判定为p53阳性细胞。其中在400倍镜下随机发现500个细胞中NCAPH阳性细胞>10%判定为阳性，≤10%判定为阴性。在400倍镜下随机发现500个细胞中Survivin阳性细胞>5%判定为阳性，≤5%判定为阴性。在400倍镜下随机发现500个细胞中p53阳性细胞>5%判定为阳性，≤5%判定为阴性。统计喉癌患者的性别、年龄、淋巴有无转移、分化程度、临床分型、病理分级、临床分期等，分析喉癌组织中NCAPH、Survivin、p53的表达与临床病理特征的相关性。

2 结果

2.1 两组组织标本中NCAPH、Survivin、p53表达情况比较 相比于对照组，观察组组织标本中NCAPH、Survivin、p53阳性率明显更高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组组织标本中NCAPH、Survivin、p53的表达情况比较[n(%)]

2.2 喉癌组织中NCAPH、Survivin、p53的表达与临床病理特征的相关性分析 喉癌患者性别、年龄、临床分型与喉癌组织中NCAPH、Survivin、p53的阳性表达无相关性(P>0.05)。喉癌患者淋巴转移、分化程度、病理分级和临床分期随喉癌组织中NCAPH、Survivin、p53阳性率显著增高(P<0.05)。见表2。

表2 喉癌组织中NCAPH、Survivin、p53的表达与临床病理特征的相关性分析[n(%)]

3 讨论

喉癌在头颈肿瘤家族中比较常见，发病率占全身癌症的1%～5%。大量研究表明[5-6]，早期发现、早期诊疗对于减轻喉癌的危害非常重要，及时治疗能够降低并发症，提高术后生存率，保留喉的发音功能。并且临床影像诊断喉癌往往处于晚期，术后影响患者发音功能，增加并发症。同时在恶性肿瘤的诊断、侵袭与预后的预测中分子与基因标志物日益受到重视[7]。

NCAPH、Survivin、p53均为恶性肿瘤分子与基因标志物，且相关研究报道[8]，其在喉癌的发生、发展中起着重要的作用。本文结果发现，喉癌患者组织标本中NCAPH、Survivin、p53阳性率明显高于声带息肉组织标本。分析其原因，首先NCAPH在癌细胞有丝分裂过程中能够促进染色体的组装和分离，参与调节拓扑异构酶Ⅱ的活性，从而促进癌细胞的分裂；另外，Survivin因结构简单，能够较强抑制异常突变细胞凋亡，延长癌细胞的存活时间，促进癌细胞的生长、增殖等；并且p53蛋白的生物活性较高，与DNA的复制和修复有密切的关系，对促进细胞分裂增生具有重要的作用，在恶性肿瘤中较常见。故喉癌患者组织标本中NCAPH、Survivin、p53的阳性表达率较高。

另外本文发现，喉癌患者性别、年龄、临床分型与喉癌组织中NCAPH、Survivin、p53的阳性表达无相关性。喉癌患者淋巴转移、分化程度、病理分级和临床分期随喉癌组织中NCAPH、Survivin、p53阳性率显著增高。进一步说明NCAPH、Survivin、p53与喉癌发展密切相关，均有望成为肿瘤诊断的分子标记物及治疗的新靶点。

综上所述，NCAPH、Survivin、p53在喉癌组织中均有不同程度的阳性表达，且喉癌患者淋巴转移、分化程度、病理分级和临床分期随NCAPH、Survivin、p53阳性率显著增高。