细胞角蛋白CK14和CK18在早期宫颈癌中的表达及意义分析

马延伟

河南省叶县人民医院妇产科 467200

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，高发于绝经后女性，近年来发病呈年轻化趋势[1]。临床分期Ⅰa～Ⅱa期的宫颈癌患者以手术治疗为主，预后较好，但部分患者病情进展快，预后不理想[2]。目前临床中对宫颈癌诊断的分子标志物较多，但能够用于早期病情进展及预后评估的分子标志物很少[3]。细胞角蛋白(CK)是一类细胞中间丝蛋白，已发现54种基因型，人体不同类型上皮细胞中表达不同基因型的细胞角蛋白，肿瘤组织中细胞角蛋白表达可用于患者诊断及预后评估[4]。研究者发现，CK14低表达可能与胃癌患者术后症状复发有关[5]；CK18表达与乳腺癌患者预后明显相关[6]。本文比较了正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织、早期宫颈癌组织中CK14、CK18表达水平，分析其与早期宫颈癌患者病理指标的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2017年1月—2018年6月在本院行宫颈手术切除样本的石蜡切片。根据病理检查结果分为正常宫颈组30例，宫颈上皮内瘤变组30例(低级别瘤变15例、高级别瘤变15例)，早期宫颈癌组60例。纳入标准：(1)病理组织活检确诊为早期宫颈癌；(2)病理确诊为宫颈上皮内瘤变组织者未合并其他系统肿瘤；(3)正常宫颈组织为距离病灶3cm的癌旁组织。排除标准：(1)有免疫系统疾病，近3个月有免疫治疗史；(2)临床资料不完整者。本研究经医院伦理委员会批准，患者签署知情同意书。

1.2 方法 组织标本经10%甲醛溶液固定后石蜡包埋，4μm连续切片，经脱蜡至水后高温、高压修复抗原，滴加鼠抗人CK14单克隆抗体(1∶300)、鼠抗人CK18单克隆抗体(1∶300)，4℃过夜，磷酸缓冲液洗涤后滴加HRP标记的山羊抗鼠IgG(1∶2 000)，室温下孵育30min，加DAB显色10min、苏木素复染、脱水、封片，置于光学显微镜下观察。检测试剂购于上海群己生物科技有限公司。

1.3 评价标准 取5个高倍镜视野，各计数200个细胞，黄色或棕黄色颗粒为阳性染色，阳性细胞占细胞总数比例：≤5%、6%～25%、26%～50%、51%～74%、≥75%依次记0～4分。细胞染色强度：无色、黄色、棕黄色、黄褐色分别记0～3分。二者评分相乘后0～3分为阴性，4分及以上为阳性。

2 结果

2.1 各组CK14和CK18表达情况分析 CK14阳性表达于细胞质，在正常宫颈组织中表达于棘细胞层与颗粒层之间，见图1。正常宫颈组、宫颈低级别上皮内瘤变组、宫颈高级别上皮内瘤变组、早期宫颈癌组CK14阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)；CK14阳性率与宫颈病变程度呈负相关(r=-0.426，P<0.01)。CK18阳性表达于细胞质，在正常宫颈组织中无表达，在宫颈低级别上皮内瘤变组织中表达于基底层上部，在宫颈高级别上皮内瘤变组织中表达于基底层中上部，见图2。在宫颈癌组织中完全覆盖鳞状上皮层CK18阳性率之间差异有统计学意义(P<0.01)；CK18阳性率与宫颈病变程度呈正相关(r=0.704，P<0.01)。见表1。

图1 CK14在不同宫颈组织中的表达(SP法，×100)

图2 CK18在不同宫颈组织中的表达(SP法，×100)

表1 各组CK14和CK18阳性表达率比较[n(%)]

2.2 CK14、CK18表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系 不同病理类型、组织分化程度、淋巴结转移情况的宫颈癌患者CK14阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)；其中腺鳞癌CK14阳性率最高，其次为鳞癌，腺癌最低；组织分化中等的CK14阳性率明显高于低分化者；无淋巴结转移的CK14阳性率明显高于有淋巴结转移者。不同病理类型、组织分化程度的宫颈癌患者CK18阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)；其中鳞癌和腺癌CK18阳性率明显高于腺鳞癌，组织分化中等的CK18阳性率明显低于低分化者。见表2。

表2 CK14、CK18表达与宫颈癌患者临床病理特征关系[n(%)]

3 讨论

细胞角蛋白属于细胞骨架的中间丝蛋白家族，在细胞分化各阶段和不同类型上皮细胞中表达存在差异。研究者发现，细胞角蛋白具有组织特异性和高度保守性，与上皮角质细胞活性明显相关，在维持上皮细胞形态及功能中发挥重要作用[7]。相关研究显示，细胞角蛋白CK14在非小细胞肺癌、胃癌、食管鳞状细胞癌等多种恶性肿瘤组织中均存在表达，但与肿瘤病变程度的关系不一致，在非小细胞肺癌、胃癌组织中CK14阳性率与病变程度呈正相关，在食管鳞状细胞癌中CK14阳性率与病变程度呈负相关[8-9]。本文结果显示，细胞角蛋白CK14阳性表达于细胞质，随着宫颈病变程度的增加CK14阳性表达率逐渐下降，提示CK14低表达可能为宫颈表皮细胞恶性转变的一个特异性标志物。进一步分析显示，宫颈癌患者CK14阳性率与宫颈癌患者病理类型、组织分化程度、淋巴结转移情况明显相关，CK14阳性率越高宫颈癌组织分化程度越高，淋巴结转移率越低，预后越好。

研究者发现，CK18广泛表达于乳腺癌、胃肠道癌等多种恶性肿瘤，能够用于鉴别腺癌和鳞癌，可作为辅助诊断乳腺癌和胃癌的分子生物标志物[10]。本文中细胞角蛋白CK18阳性表达于细胞质，在正常宫颈组织中不表达，阳性表达率与宫颈癌恶性程度呈正相关，表明CK18高表达能够提示宫颈表皮细胞恶性转变。同时，鳞癌和腺癌CK18阳性率明显高于腺鳞癌，组织分化中等的CK18阳性率明显低于低分化者，说明CK18在一定程度上能够预测宫颈病变的发展趋势，CK18阳性表达的宫颈癌患者未来病情可能进一步发展，而阴性表达患者病情发展的可能性较小。但CK14、CK18对宫颈癌病情发展和预后的预测价值仍需进一步大样本长期随访研究。