抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3在胃癌组织中的表达及与病理特征的相关性

黄莎莎 韩峥 谭洁 刘蒙 田霞

武汉大学附属同仁医院（武汉市第三医院）消化内科（武汉430060）

胃癌是临床常见的消化系统恶性肿瘤，具有高发病率、高病死率的特点，被列为十大恶性肿瘤首位［1-2］。据相关流行病学调查数据显示，我国胃癌发病率一直居高不下，每年新增病例连年上升［3］。中老年人群为胃癌发病主要人群，但是近年来我国胃癌患者年龄逐渐趋于年轻化，引起广大专家学者的重视［4］。胃癌发病早期无特异性、明显临床症状，难以引起患者重视，致使胃癌症状早期诊断率较低，确诊时病情已出现恶化现象，导致治疗难度变大，患者预后较差，因此早诊断、早治疗对胃癌患者临床治疗以及预后改善具有重要意义［5-6］。本研究中对胃癌患者手术切除癌组织标本中抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 表达进行检测，旨在探究抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 在胃癌组织中的表达及与病理特征相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019年6月⁃2020年6月于我院进行手术治疗的胃癌患者72 例，包括男46 例，女26 例，年龄45 ～67 岁，平均年龄（56.2±8.9）岁。72例胃癌患者包括Ⅰ期患者26例，Ⅱ期患者27 例，Ⅲ期患者11 例，Ⅳ期患者8 例；浆膜内浸润患者47 例，浆膜外浸润患者25 例；淋巴结转移情况：淋巴结转移患者27 例，无淋巴结转移患者45 例；癌组织分化程度：高分化41 例，中分化22 例，低分化9 例。本研究所有患者及家属均知情同意，并获我院伦理委员会批准。纳入标准：所有患者均符合中华医学会对胃癌的诊断标准［7］，无手术禁忌症，均接受手术治疗。排除标准：（1）病历资料不全者；（2）心、肝、肾、肺等功能不全者；（3）3 个月内接受过相关治疗者；（4）并发其他消化系统疾病患者；（5）接受过放化疗治疗患者。

1.2 方法

1.2.1 标本采集、免疫组化染色手术切除胃癌患者癌组织、距癌组织5 cm 癌旁组织制作标本，4%中性福尔马林固定、石蜡包埋，厚度3 μm，连续切片作免疫组化标记。待测标本脱蜡、水化处理后浸泡于0.01 mol/L、95 ℃枸橼酸缓冲液中，3%H2O2环境下培育10 min，滴入山羊血清，26 ℃环境中培养30 min，抽离封闭液、添加一抗，5 ℃环境过夜培养，次日加入二抗，37 ℃恒温箱中培养0.5 h，清洗后进行DAB 显色、封片。

1.2.2 抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3相对表达量检测使用Western blot 法检测。提取50 μg 蛋白，煮沸5 min使蛋白变性后用SDS⁃PAGE 凝胶电泳，然后依据蛋白分子大小把凝胶切开并转移至PVDF 膜上，用Western 封闭液把待测蛋白和内参蛋白封闭90 min在室内，按1∶1 000 加到待测蛋白抗体，内参抗体以1∶2 000 加入抗体，孵育过夜，使用Western 洗涤液洗涤5次，每10 min 1次。按1∶5 000加入稀释山羊抗兔IgG，孵育60 min 室温水平摇床，Western 洗涤液洗涤5 次，每10 min 1 次。经过ECL 显色和曝光后，进行BIO⁃RAD 成像，使用Image J 图像分析系统检测条带的灰度值，以内参条带灰度值与蛋白比值为结果统计分析。

1.3 统计学处理使用SPSS 26.0 软件，计量资料以（）描述，多组对比行F检验，组间对比行独立样本t检验，P＜0.05 具有统计学意义。相关性采用Pearson 相关性分析。

2 结果

2.1 抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 在胃癌组织、癌旁组织中的表达对比如表1、图1、2 所示，与癌旁组织相比，胃癌组织中抑瘤素M、Id⁃1 相对表达量较高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与癌旁组织相比，胃癌组织中Foxp3 相对表达量较低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 表达与胃癌患者病理特征的关系如表2 所示，与无淋巴结转移患者相比，有淋巴结转移胃癌患者抑瘤素M、Id⁃1 相对表达量较高，Foxp3 相对表达量较低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与浆膜内浸润患者相比，浆膜外浸润胃癌患者抑瘤素M、Id⁃1 相对表达量较高，Foxp3 相对表达量较低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与Ⅰ、Ⅱ期患者相比，Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者抑瘤素M、Id⁃1 相对表达量较高，Foxp3 相对表达量较低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与高分化患者相比，中分化胃癌患者抑瘤素M、Id⁃1 相对表达量较高，Foxp3 相对表达量较低；与中分化患者相比，低分化胃癌患者抑瘤素M、Id⁃1 相对表达量较高，Foxp3 相对表达量较低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表1 抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 在胃癌组织、癌旁组织中的表达对比Tab.1 The expression contrast of oncostatin M，Id⁃1 and Foxp3 between gastric cancer tissues and adjacent tissues x±s

2.3 胃癌组织中抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 表达相关性如图3 所示，对胃癌组织中抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 表达相关性进行分析。胃癌组织中抑瘤素M、Id⁃1 表达呈正相关（r= 0.310，P= 0.008）；胃癌组织中抑瘤素M、Foxp3 表达呈负相关（r=-0.422，P= 0.001）；胃癌组织中Id⁃1、Foxp3 表达呈负相关（r=-0.308，P=0.009）。

图1 抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 在癌旁组织中表达免疫组化染色图Fig.1 Immunohistochemical staining of tumor suppressor m，Id⁃1 and Foxp3 in paracancerous tissues

图2 抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 在癌组织中表达免疫组化染色图Fig.2 Immunohistochemical staining of tumor suppressor m，Id⁃1 and Foxp3 in cancer tissue

3 讨论

临床医学将发生于机体胃粘膜组织的恶性肿瘤统称为胃癌，具有发病率高、恶性程度高、治疗难度大、病死率高的特点。世界卫生组织调查数据显示，胃癌发病率、病死率均高居所有恶性肿瘤前两位［8-9］。目前胃癌发病机制尚未明确，有研究表示，家族遗传、生活环境、癌前病变、饮食习惯等均为胃癌发病危险因素［10］。胃癌患者发病早期无明显临床症状，早期诊断率较低，随着病情的不断发展和恶化，胃癌患者主要临床表现为上腹部疼痛、不适、消化道出血、贫血、消瘦等，严重影响患者身体健康和生活质量，而此时临床治疗难度大幅提升，对患者临床治疗和预后造成严重影响［11-12］。因此，越来越多的专家学者开始通过分子生物学、基础医学等途径对胃癌发病机制进行研究［13-14］。

作为一种多功能细胞因子，抑瘤素M 是IL⁃6细胞因子家族的重要组成成员，主要由机体巨噬细胞、T 细胞、中性粒细胞等分泌产生，在细胞多种生物学行为中均具有重要作用［15-16］。有研究表示，抑瘤素M 与其受体相结合，介导信号传导，对细胞增殖、生长等生物学行为以及机体炎症反应、免疫系统变化以及细胞外基质重塑中均具有重要作用。近年来，越来越多的学者致力于抑瘤素M表达变化与恶性肿瘤发生发展相关性的研究。有研究表示，抑瘤素M 在不同恶性肿瘤组织中具有不同的作用，在宫颈癌、卵巢癌等妇科恶性肿瘤中，抑瘤素M 能够促进癌细胞增殖、侵袭，对疾病发展起到促进作用，但是关于抑瘤素M 表达变化与胃癌发生演进相关性的研究还鲜有报道。本文研究结果显示，相比癌旁组织，胃癌癌组织中抑瘤素M 相对表达量较高，说明抑瘤素M 在胃癌中呈现异常高表达，可能参与胃癌的发生发展。本文研究还发现，有淋巴结转移、浆膜外浸润、Ⅲ、Ⅳ期、低分化胃癌患者抑瘤素M 相对表达量较高，这一研究结果说明抑瘤素M 表达变化与胃癌组织淋巴结转移、浸润程度、病理分期、分化程度等临床特征具有一定的相关性，参与胃癌的发生演进过程因此，抑瘤素M 能够作为胃癌潜在的诊断指标和治疗靶点，为胃癌症状的诊断、临床治疗提供新的研究方向。

表2 抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 表达与胃癌患者病理特征的关系Tab.2 Relationship between expression of oncostatin M，Id⁃1 and Foxp3 and pathological features of gastric cancer patients x±s

图3 胃癌组织中抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 表达相关性Fig.3 Correlation between expression of oncostatin M，Id⁃1 and Foxp3 in gastric cancer

Id⁃1 是DNA 结合抑制因子家族的重要组成成员［17-18］。有研究表示，Id⁃1 具有永生性基因的特性，具有调控细胞增殖、分化、周期分布的作用。大量实验研究表示，Id⁃1 在肝癌、乳腺癌等恶性肿瘤中呈现异常高表达，并且其表达变化与癌组织分化程度具有一定相关性［19-20］。本文研究结果显示，相比癌旁组织，胃癌癌组织中Id⁃1 相对表达量较高，说明Id⁃1 在胃癌中呈现异常高表达，可能参与胃癌的发生发展。本文研究中还对Id⁃1 在不同临床病理特征胃癌中的表达进行比较，结果发现，有淋巴结转移、浆膜外浸润、Ⅲ、Ⅳ期、低分化胃癌患者Id⁃1 相对表达量较高，这一研究结果说明Id⁃1表达变化与胃癌癌组织淋巴结转移、浸润程度、病理分期、分化程度等临床特征具有一定的相关性，参与胃癌的发生演进过程。因此，本研究认为Id⁃1可作为胃癌潜在的诊断指标和治疗靶点，检测Id⁃1表达对胃癌的诊断、临床治疗具有重要意义。

Foxp3 是Fox 家族的重要组成成员，具有调节Treg 细胞生长发育的作用［21-23］。大量研究结果表明，Foxp3 在肿瘤细胞中表达出现异常，因此Foxp3表达变化与肿瘤组织发生发展之间相关性成为许多专家学者的研究方向。有研究表明，Foxp3 在乳腺癌、肺癌等恶性肿瘤中均呈异常表达，其表达变化与癌组织细胞增殖、转移具有密切联系［24-25］。本文研究结果显示，相比癌旁组织，胃癌癌组织中Foxp3 相对表达量较低，说明Foxp3 表达变化参与胃癌的发生发展。本文研究还发现，有淋巴结转移、浆膜外浸润、Ⅲ、Ⅳ期、低分化胃癌患者Foxp3相对表达量较低，这一研究结果说明Foxp3 低表达与胃癌癌组织淋巴结转移、浸润程度、病理分期、分化程度等临床特征具有一定的相关性，参与胃癌的发生演进过程，Foxp3 能够作为胃癌潜在的诊断指标和治疗靶点，为胃癌症状的诊断、临床治疗提供了新的研究方向。

本文研究还对抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 在胃癌组织中表达相关性进行研究，结果显示，抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 在胃癌组织中具有一定相关性，说明抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 可能共同参与胃癌的发展演进。

综上所述，抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 在胃癌中均呈异常表达，三者相对表达量变化与胃癌患者淋巴结转移情况、浸润程度、TNM 分期、分化程度相关，三者表达之间具有一定相关性，共同参与胃癌发展演进过程，并且抑瘤素M、Id⁃1、Foxp3 能够作为胃癌潜在的诊断指标和治疗靶点，为胃癌的诊断、治疗提供新的研究方向。