显色培养基筛查无乳链球菌及药物敏感性分析

耿伏生，苏丽霞，冯宝芹

（安阳市灯塔医院1.检验科；2.医务科，河南 安阳 455000）

近些年来，随着医疗技术水平的提高，孕产妇越来越重视分娩质量和安全，按照美国CDC《围产期B 族链球菌感染筛查及防治指南(2010)》的推荐，对于每个即将分娩的孕产妇都应进行无乳链球菌筛查，防范可能存在的风险，减少对孕产妇和新生儿的危害。 对于无乳链球菌的筛查，实验室常用的方法有显色培养基法、普通培养法、免疫层析法、PCR 法[1]等，阳性检出率各有差异，各地报道也有不同。 由于细菌培养为诊断感染性疾病的 “金标准”，故本实验室着重研究显色培养基法与普通培养法的无乳链球菌阳性检出率情况。

无乳链球菌为触酶阴性的革兰阳性球菌，显微镜观察成对或链状排列，Lancefield 血清分型为B 群，所以又称 B 族链球菌[2]（GBS），接种于哥伦比亚血琼脂平板上，置于5～10%CO2条件下35℃培养24～48h 可有狭窄的 β 溶血环，1887 年被报道第一次获得分离[3]，健康人群携带率为 15%～35%[4]，可定植于妊娠期妇女的泌尿道、肠道和生殖道[5]，易导致产妇感染或通过垂直传播感染新生儿，引起新生儿败血症。

本研究旨在找出一种筛查阳性检出率高的方法，并对阳性菌株进行抗生素药物敏感性试验，从而为临床医生提供可靠的治疗依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2017 年1 月至2018 年1 月我院妇产科收治的行产前检查的孕晚期孕妇，年龄在20～35 岁，随机抽出1100 例作为研究对象。

1.2 筛查标准 依据美国疾病控制与预防中心《围产期B 族链球菌感染筛查及防治指南(2010)》有关标准进行筛查，以显色培养基法作为试验组，以普通培养法作为对照组进行比较。

1.3 排除标准 严重的肝、肾、肺功能不全；合并凝血功能障碍以及其他血液性疾病；合并恶性肿瘤；合并言语及意识障碍。

1.4 实验室检查

1.4.1 方法 对送检标本均采用显色培养基培养法和普通培养法，5～10%CO2条件下 35℃培养 24～48h。

1.4.2 试剂 无乳链球菌显色培养基和哥伦比亚血平板均由郑州安图绿科生物有限公司提供。

1.4.3 药敏试验 参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）制定的标准，使用纸片扩散法进行药敏试验； 质控菌株和药敏纸片由杭州天和生物有限公司提供。

1.4.4 样本要求 孕35～37 周时从阴道下1/3 部取拭子或肛门取拭子标本， 置于增菌培养基内立即送检培养。

1.5 统计学处理 采用SPSS22.0 软件进行统计分析，试验组与对照组比较采用 χ2检验，P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组与试验组筛查情况比较 于孕35～37周时采集阴拭子或肛拭子立即送检，经微生物实验室在严格质量控制下接种于无乳链球菌显色培养基（试验组）和哥伦比亚血琼脂平板（对照组）上，经48h 培养观察结果，对于可疑阳性菌株进一步鉴定确证。在1100 例研究对象中，试验组与对照组阳性检出率分别为 8.91%（98 株）和 5.91%（65 株），两者相比较有统计学意义（P＜0.05），表明采用显色培养基法筛查无乳链球菌阳性检出率明显高于普通培养法。

2.2 阳性菌株药敏结果分析 将无乳链球菌显色培养基培养阳性的98 株阳性菌株转种到哥伦比亚血琼脂平板上继续培养， 并采用K-B 法进行药物敏感性试验，研究表明阳性菌株对青霉素、头孢噻肟、万古霉素、美罗培南、替考拉宁的敏感率为100.00%，对苯唑西林的敏感率为91.00%，对左氧氟沙星、克林霉素、红霉素、四环素的耐药率分别为 31.70%、56.00%、61.70%、85.90%， 对甲氧苄啶/磺胺甲唑的耐药率为100.00%，见表1。

表1 98 株无乳链球菌药物敏感试验

3 讨论

目前来看，国内大多实验室普遍采用细菌培养法用来筛查孕晚期无乳链球菌的感染情况，但普通细菌培养阳性检出率极低，容易出现假阴性，给临床提供不可靠的参考依据，造成大量的漏诊。 而无乳链球菌显色培养基中添加了人工合成的特异性酶底物，经无乳链球菌的酶解作用释放出显色原而显色，无乳链球菌在该培养基上生长菌落为红色或紫红色，并且该培养基也具有一定抑制其他杂菌生长的作用，使无乳链球菌菌落能够在平板上更好地生长，易于辨认及分离。 本研究通过采用显色培养基法与普通培养法相比较，发现显色培养基法阳性检出率明显高于普通培养法（P＜0.05），这可能由于显色培养基相对于普通培养基具有结果直观，且灵敏度高、特异性强的特点，便于实验室分离病原菌，从而提高了检出率。

无乳链球菌属于条件致病菌[6]，可定植男性和女性生殖道、肠道和尿道，可经性传播。 成人中无乳链球菌感染少见，以产妇为主，少数情况下亦可为免疫功能低下者，如糖尿病、慢性肝功能不全、HIV 感染、恶性肿瘤、接受免疫抑制剂治疗等患者。无乳链球菌感染在围产期感染中占有重要的位置[7]，当机体微生态平衡被破坏、内环境紊乱情况下，可发生 GBS 机会感染[8]。 可以导致产妇发生胎膜早破、绒毛膜炎、子宫内膜炎、泌尿系感染、败血症。还可导致孕晚期流产、早产、死胎，还可传播给新生儿导致败血症[9]，是新生儿败血症死亡的主要原因[10]。 严重影响孕妇和胎儿的生命健康。 无乳链球菌引起的产褥感染大多呈单一细菌感染，症状出现早，高热、心动过速等。无乳链球菌也是引起孕妇菌血症和伤口感染的主要致病菌，还可发生链球菌性肺炎、脑膜炎、肝脓肿和败血症等，死亡率较高，有报道其死亡率可达29%～52%。 本研究通过分析阳性菌株的药物敏感性试验，发现无乳链球菌对青霉素、头孢噻肟、万古霉素、美罗培南、替考拉宁高度敏感，对四环素、红霉素、克林霉素耐药，对甲氧苄啶/磺胺甲唑高度耐药这与《指南》基本一致。 由于导致无乳链球菌感染的具体机制尚未明确[11]，为了减少无乳链球菌感染对孕产妇和胎儿造成严重的危害[12]，建议临床医师引起重视，把握时机，尽早筛查无乳链球菌，并根据抗生素药物敏感性试验结果，合理使用抗菌药物。