麸炒白术、牡丹皮免煎颗粒与中药饮片有效成分的含量研究

吕艳玲,李嘉慧，刘宇

(1.北京中医医院顺义医院，北京 101300；2.中国中医科学院西苑医院，北京 100091)

中药已经成为中国传统文化不可分割的一部分，在治疗疾病方面具有很好的疗效，而传统的治疗过程中往往使用的都是中药材饮片，但是随着患者对于治疗效果要求的增高和中药现代化的快速发展，多种中药饮片的有效成分得以提取，同时不同的中药剂型应运而生，如中药免煎颗粒。中药免煎颗粒作为一种中药新剂型，主要以中药饮片为依托，根据药剂学理论为方向，选择靶向溶媒，提取单味中药饮片的有效成分，采用现代技术分离、纯化，进一步包装而成的颗粒物质，患者可以直接温水服用，避免了服用过程中传统中药饮片的煎煮过程，规避了传统中药饮片不易存储和携带的缺点[1-3]。但是有关中药免煎颗粒与中药饮片有效成分含量比较的研究报道尚不多见，限制了中药免煎颗粒在临床上的应用。本文通过对麸炒白术和牡丹皮2味中药免煎颗粒和其饮片有效成分含量进行研究，来判断两者的差别。

1 实验药物和仪器

麸炒白术免煎颗粒、牡丹皮免煎颗粒分别由广东一方药业公司提供，批号分别为8086742、8115382。白术、牡丹皮中药饮片分别由北京时珍堂巴东有限公司、北京明辉恒通有限公司提供，批号分别为18050401、 17022501。丹皮酚对照品由中国药品生物制品检定所提供，标准品含量均>99%。无水乙醚(分析纯)、甲醇(色谱纯)和乙腈(色谱纯)均由国药集团化学试剂北京有限公司提供。气质联用仪由安捷伦公司提供，型号为7890A-5975C。高效液相色谱仪由日本岛津公司提供，型号为LC-20AT。

2 麸炒白术免煎颗粒与中药饮片中挥发油含量的测定

2.1 挥发油提取

取白术饮片200 g，粉碎，备用，白术颗粒20包，备用。分别放入100 mL圆底烧瓶中，加入纯水500 mL，混合均匀，静置60 min，提取直至提取装置中挥发油量组分不再增加为止，冷却至室温，乙醚萃取直至乙醚层无色透明，收集乙醚层液体，低温、水浴蒸发乙醚后真空干燥48 h，精密称重[4-5]。有关白术饮片和麸炒白术颗粒中挥发油提取结果见表1。

表1 白术饮片和麸炒白术颗粒挥发油色泽及提取率结果

2.2 有效成分的测定

将干燥后样品加入适量乙醚，定容至100 mL，采用气质联用仪分析挥发油组成成分和含量。

气相色谱条件：进样量1.0 μL；分流进样(分流比5∶1)；初始温度50 ℃保温3 min，4 ℃/min匀速升温至120 ℃，保温8 min,6 ℃/min匀速升温至250 ℃保温10 min[4-5]。

质谱条件：选用电子轰击电离源，离子源温度220 ℃，0.9 kV，采用质谱数据库分析数据[4-5]。

结果显示，麸炒白术免煎颗粒与白术饮片挥发油成分存在差异，中药饮片中含有43种挥发油成分，占总含量的92.33%，含量最多的成分为苍术酮，其次为香橙烯，α-雪松烯；免煎颗粒分离出33种挥发油成分，占总含量的87.77%，含量最多的成分同样为苍术酮，其次γ-榄香烯，香橙烯。共有31种挥发油为两种中药剂型共有，相比较中药饮片，β-绿叶烯和8-十七碳烯为中药免煎颗粒特有，12种独特成分为中药饮片特有，免煎颗粒与中药饮片所含挥发油组分比较如表2。

表2 麸炒白术免煎颗粒与中药饮片所含挥发油组分比较

续表2

编号出峰时间(min)化合物名称分子量相对含量白术饮片麸炒白术颗粒2727.05α-石竹烯2040.580.332827.25S-十七碳烯238-0.302927.76杜松脑2220.770.933028.174(14),11-桉叶二烯2041.251.483128.746,7-二氢甲氧呋豆素2183.462.853229.31柏木烯2040.880.503329.429-methylene-7-pentadecyne2200.430.573429.732,6-ditert-butylquinone2200.550.603529.96香橙烯20411.8810.943631.15绿叶烯2041.280.943731.05荐草烯2040.02-3832.722-methoxymethyl-4,4-dimethyl-5-phenyldihydropyran2321.822.423933.91α-红没药醇2220.34-4034.11十六酸2560.77-4134.82匙叶桉油稀醇2200.560.254235.21芹烷二烯酮2181.320.994335.56Isolantolactonoid butenolide A2320.771.964436.98油酸2821.802.244537.21十八酸2840.41-

3 牡丹皮免煎颗粒与中药饮片有效成分含量的测定

3.1 色谱条件

色谱柱：伊力特C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，中国科学院北京化学物理研究所提供)；流动相∶甲醇-水(50∶50)；检查波长：274 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；理论塔板数按丹皮酚峰值计算应大于等于5 000[6]。

3.2 对照品溶液制备

称取丹皮酚对照品0.55 mg，加入甲醇10 mL，混合成浓度为0.055 mg/mL的对照品溶液，备用。

3.3 供试品溶液制备

称取牡丹皮免煎颗粒1.2 g，牡丹皮中药饮片10 g，放于锥形瓶中，加入甲醇100 mL，密封，摇匀，超声处理(300 w，50 kHz)，30 min，冷却至室温，准确称量，甲醇补足缺失量，摇匀，过滤[7]。精密量取滤液1 mL放于10 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，微孔滤膜(0.45 μm)过滤，备用[7]。

3.4 标准曲线与线性关系分析

紧密吸取对照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL放于100 mL容量瓶中，按照3.1中色谱条件，分别进样10 μL，测定峰面积，以峰面积为纵坐标(y)，丹皮酚含量(μg)为横坐标(x)，绘制标准曲线，计算回归方程：y=1.777 1×10-3x-0.275 6，相关系数r≥0.999 9，结果显示，丹皮酚在56～276 μg范围内线性关系良好。

3.5 稳定性试验

室温条件下，取免检颗粒的样品溶液，静置0 h、2 h、4 h、6 h、8 h后测定其有效成分含量，计算相对标准偏差RSD=0.29%(n=5)，结果显示，至少在8 h内丹皮酚含量稳定。

3.6 精密度试验

取配置好的标准品溶液，分别量取10 μL，每种样品进样5次，测量峰面积，计算丹皮酚峰面积的相对标准偏差RSD=0.21%(n=5)，结果显示，此方法的精密度较好。

3.7 回收率试验

精密量取已知含量的免煎颗粒6份，加入适量丹皮酚标准品，按照上文3.3的方法制备供试品，使用移液枪吸取10 μL进行测定，计算加样回收率的相对标准偏差RSD值，RSD=0.70%(n=6)。结果显示，丹皮酚的回收率为97.10%，回收率试验结果如表3。

公式[6]：回收率(%)=[(测得丹皮酚的含量-样品中丹皮酚的含量)/添加丹皮酚的含量]×100%

3.8 供试品溶液的测定

对供试品进行含量测定，取3.3中供试品溶液经0.45 μm微孔滤膜过滤，进样，进样量为10 μL，测定含量。将免煎颗粒中的丹皮酚含量转化成相当生药中的丹皮酚含量，比较分析[6]。结果显示，丹皮酚在牡丹皮免煎颗粒中的含量与在中药饮片中的含量存在明显差异，分别为，免煎颗粒含有丹皮酚4.67 mg/g，中药饮片含有丹皮酚24.25 mg/g。

表3 丹皮酚回收率试验结果

4 讨论

白术和牡丹皮是有较高药用价值的中药饮片，其中挥发油成分是白术的主要活性成分，临床上具有利尿、消炎、镇痛、降血糖、抗衰老和安胎等作用[8-10]，临床上有多种方法可以用于分析白术的挥发油的含量，其中气质色谱是最重要的分析方法，文献报道，邱琴等[11]利用超临界CO2提取法对挥发油进行提取，进而利用气质色谱对其含量进行分析。潘欢欢等[12]运用气质色谱联用法分析出了白术饮片中挥发油的成分。丹皮酚是牡丹皮的主要活性成分，严安定等[13-14]研究发现，丹皮酚是牡丹皮有效成分中含量和活性都较高的成分，是目前牡丹皮质量评价的重要指标之一,具有多种药理活性，如抗炎[15]，抗氧化[16]，抗动脉粥样硬化[17-18]，抗抑郁[19-20]等。同时，以白术和牡丹皮为代表的中药免煎颗粒是中药现代化过程中发展起来的一种新的中药剂型，与传统的中药饮片相比较，具有使用方便、有效成分明确、用量准确和服用方便等多方面的优点，越来越受到病人的喜爱。但是在临床应用上，中药免煎颗粒能否代替传统的中药饮片被广泛的应用于临床，还需要大量的试验数据作为支撑，此项研究已经成为目前中医界研究的热点问题。

本次实验通过对麸炒白术免煎颗粒中挥发油的种类和含量、牡丹皮免煎颗粒中丹皮酚有效成分的含量与其相应的中药饮片有效成分种类和含量进行研究，发现麸炒白术免煎颗粒、牡丹皮免煎颗粒与其相应的中药饮片的有效成分存在明显的差别，同时相同成分含量也存在明显差别。

由于中药饮片及其制剂质量的临床使用的优劣，不能仅凭借一种或者几种有效成分的差别来判断。因此，在传统的中药材饮片对比衍生出的各种新剂型的研究中，正确选择靶向较强，对于中药材化学成分分析较全面、具体，并充分利用中药现代化产业技术，例如指纹图谱手段，建立完善的中药材质量评价标准，为中药饮片及其制剂的临床发展提供帮助[6，21]。