丹皮酚的体内抗炎镇痛和体外抗氧化效果评价

2022-08-30程凤琦金圣奇范露露

中国兽医杂志 2022年6期

张鹏，程凤琦，金圣奇，范露露，王超

(1.沈阳工学院，辽宁抚顺 113122 ； 2.辽宁农业职业技术学院，辽宁营口 115009)

丹皮酚(C9H10O3)又称芍药醇，是一种存在于毛茛科植物牡丹根皮中的小分子酚类化合物，以往依靠中药提取技术从牡丹根皮中获取。目前已有多种途径进行人工合成[1]。因丹皮酚具备多种药理活性，如抗炎、抗肿瘤、保护神经、保护心血管等[2]，在医学研究、生物医药等领域中备受关注。近些年，国内外对丹皮酚的药理作用及机制进行了大量的研究[3]，且已经证明丹皮酚在缓解结肠炎[4]、胰腺炎[5]、心肌缺血[6]、关节炎[7]、牙周炎[8]等疾病中发挥积极的作用。因此本试验在前人研究基础上进一步考察丹皮酚体内抗炎、镇痛和体外抗氧化能力，以期为临床抗炎、抗氧化兽药研发与应用提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 实验动物昆明系小鼠，SPF级，体质量18～22 g，雄性，购自辽宁长生生物技术股份有限公司，许可证号：SCXK(辽)2020—1—0001。

1.3 试验方法

1.3.1 丹皮酚对小鼠耳肿胀的影响选取30只小鼠，随机分为5个组，每组6只，分别为模型对照组、地塞米松对照组[5 mg/(kg·bw)]、丹皮酚低、中、高剂量组[100 mg/(kg·bw)、200 mg/(kg·bw)、300 mg/(kg·bw)]。采取灌胃给药，每日定时1次，持续喂药5 d。最后1次喂药40 min后，使用50 μL二甲苯均匀涂抹在小鼠右耳前后两面，左耳涂抹同等体积的蒸馏水作为对照，40 min后脱颈处死小鼠。将双耳顺着小鼠耳廓基线剪下，用直径 8 mm的打孔器分别在左右两耳相同位置切下圆耳片，用分析天平快速称重。用左耳、右耳质量的差值表达小鼠耳廓肿胀度。耳肿胀抑制率通过公式(1)计算。

(1)

1.3.2 丹皮酚对小鼠足趾肿胀的影响小鼠分组及喂药方法同1.3.1。最后1次喂药后1 h，用0.01 mL含0.1%角叉菜胶的氯化钠溶液在每只小鼠左后足皮下至踝关节处注入，致炎后4 h处死小鼠。将小鼠后足自踝关节剪下，用分析天平快速称重，用左足、右足质量的差值表达小鼠足趾肿胀度。足趾肿胀抑制率通过公式(2)计算。

(2)

1.3.3 冰醋酸致小鼠扭体试验小鼠分组及喂药方法同1.3.1。其中，用等量的阿司匹林替代地塞米松对照组中地塞米松。末次给药后1 h，向小鼠腹腔注射0.1 mL/(10 g·bw)的0.6%冰醋酸溶液，诱发小鼠扭体，疼痛反应指标以30 min后采用摄影机记录小鼠20 min内扭体频率为准。疼痛抑制率通过公式(3)计算。

(3)

DPPH自由基清除率/%=[1-(A测定组-A对照组)÷A空白组]×100%

(4)

(5)

(6)

(7)

1.4 试验数据统计与分析所有数据需要进行统计学分析，本试验使用SPSS Statistics 17.0和OriginPro 9.1软件对数据进行分析和绘图。

2 结果

2.1 丹皮酚对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响结果如表1所示，不同剂量丹皮酚均可以抑制小鼠耳廓肿胀，且呈剂量依赖性，但与模型对照组相比，只有丹皮酚高剂量组具有极显著差异(P<0.01)，丹皮酚中剂量组具有显著差异(P<0.05)。此外，丹皮酚中、高剂量组抑制率好于地塞米松对照组，由此可见丹皮酚剂量越大，抑制效果越好。

表1 丹皮酚对小鼠耳廓肿胀的影响

2.2 丹皮酚对小鼠足趾肿胀的影响结果如表2所示，与模型对照组相比，丹皮酚低剂量组显著抑制小鼠足趾肿胀(P<0.05)，地塞米松对照组、丹皮酚中剂量组和高剂量组极显著抑制小鼠足趾肿胀(P<0.01)。丹皮酚高剂量组的足趾肿胀抑制率与地塞米松对照组抑制率相当，高达63.41%，丹皮酚低剂量组仍有一定的抑制效果，抑制率为17.07%，由此可知，不同剂量的丹皮酚均有抑制足肿胀的效果。

表2 丹皮酚对小鼠足趾肿胀的影响

2.3 丹皮酚对冰醋酸致小鼠扭体的影响结果如由表3所示，低、中、高剂量丹皮酚均抑制小鼠扭体，且呈剂量依赖性。丹皮酚低剂量组显著抑制小鼠扭体(P<0.05)，阿司匹林对照组、丹皮酚中剂量组和高剂量组极显著抑制小鼠扭体(P<0.01)。丹皮酚高剂量抑制率(76.74%)要高于阳性药物阿司匹林(61.92%)。因此，不同剂量的丹皮酚均有抗炎效果，尤其是高剂量丹皮酚效果更加明显。

表3 丹皮酚对冰醋酸致小鼠扭体的影响

2.4 丹皮酚体外抗氧化效果

2.4.1 丹皮酚对DPPH自由基清除能力结果如图1所示，丹皮酚和维生素C的DPPH自由基清除率均随着质量浓度的增加而增加，并且呈现出较好的量效关系，将丹皮酚的DPPH自由基清除率(Y)与其浓度(X)进行线性拟合，线性拟合方程为：Y(DPPH)=-0.000 8X2+0.429 9X+14.697，R2=0.995 4，呈现出良好的线性量效关系；由此可计算出丹皮酚清除DPPH自由基的半抑制浓度(IC50)为98.90 mg/mL。丹皮酚对DPPH自由基具有清除效果，且存在剂量效应，当丹皮酚质量浓度为300 mg/mL时，其最大清除率达70.59%，呈现良好的抗氧化活性。

图1 丹皮酚和维生素C对DPPH自由基清除能力

图2 丹皮酚和维生素C对抑制率

2.4.3 丹皮酚抑制·OH-的产生结果如图3所示，丹皮酚和维生素C的·OH-抑制率均随着质量浓度的增加而增加，并且呈现出较好的量效关系。对丹皮酚的·OH-抑制率(Y)与其浓度(X)进行线性拟合，线性拟合方程为：Y=-0.000 4X2+0.274 7X+42.388，R2=0.994 6，呈现出良好的线性量效关系；由此可计算出丹皮酚抑制·OH-的IC50为29.03 mg/mL。丹皮酚对·OH-具有抑制效果，且存在剂量效应，当丹皮酚质量浓度为300 mg/mL时，其最大抑制率达85.45%，呈现良好的抗氧化活性。

图3 丹皮酚和维生素C对·OH-抑制率

2.4.4 丹皮酚的总抗氧能力总抗氧化能力是物质清除不同自由基的有效和，可一定程度上反映机体防御体系的抗氧化能力。本试验用总抗氧化能力(T-AOC)测试盒测定1 mg/mL 的丹皮酚和维生素C的总抗氧化能力，其结果如表4所示。丹皮酚的总抗氧化能力为 65.04 U/mg，维生素C的总抗氧化能力为 229.07 U/mg。