茶树菇提取物对高强度剧烈运动的抗疲劳作用*

郑绪恒

（西北政法大学体育部，陕西 西安 710100）

茶树菇（Agrocybe aegerita） 学名柱状田头菇，属于粪绣伞科（Bolbitiacea） 田头菇属（Agrocybe）。野生茶树菇一般只生长在油茶树的枯树枝干或树桩上，因此而得名茶树菇[1]。茶树菇目前已经被人工驯化，一般选用杨树、枫树、柳树等阔叶树作栽培材料，也可以用棉籽壳、甘蔗渣等碳源，以米糠、麸皮等作为氮源进行人工栽培[2]。茶树菇营养丰富、味道鲜美，含有丰富的氨基酸、蛋白质和矿物质。茶树菇还具有补肾利尿、美容保健的功效，民间常见用来治疗腹泻、尿频、高血压和心血管方面的疾病，是一种药食兼用的食用菌。

茶树菇提取物具有很好的抗氧化能力，是天然的抗氧化剂，对高强度剧烈运动后所产生的各种氧自由基有很好的清除效果，可以有效缓解高强度运动后所产生的疲劳感；茶树菇提取物还可以提高机体的免疫力，调节人体的新陈代谢，具有促进运动疲劳恢复的功能[3]。其药理活性和抗疲劳的功效使得茶树菇提取物具有了很好的开发应用前景。

1 茶树菇提取物的分离纯化

1.1 试验材料

1.1.1 试验材料与试剂

干茶树菇，天津市宏胜源食用菌科技发展有限公司；大孔吸附树脂XDA-8，陕西蓝深特种树脂有限公司；无水乙醇，天津市红岩化学试剂厂（分析纯）；二苯代苦味酰自由基，济宁华凯树脂有限公司；磷酸、三氯乙酸、邻苯三酚、盐酸，天津市东丽区天大化学试剂厂（分析纯）；50%卵黄盐水悬液，上海一研生物科技有限公司；硫代巴比妥酸（TBA） 溶液，南京亿迅生物科技有限公司；硫酸亚铁，淄博宏洁化工有限公司；邻苯三酚，湖北齐飞医药化工有限公司；盐酸三（羟甲基）氨基甲烷（Tris-HCl）缓冲液，索来宝科技有限公司。

1.1.2 试验仪器

756PC紫外可见分光光度计，上海天普分析仪器有限公司；AE124型电子天平，上海皓拂仪器仪表有限公司；PHS-3C精密pH计，上海精密科学仪器有限公司；FW400A型高速万能粉碎机，北京科伟永鑫实验仪器厂；J-HH-6A精密数显恒温水浴锅，上海胜卫电子科技有限公司；1TDL-5台式离心机，上海安亭科学仪器厂；SK-1型快速混匀器，上海向帆仪器有限公司；101-2型电热鼓风干燥箱，北京科伟永兴仪器有限公司。

1.2 茶树菇粗提物的制备

茶树菇提取物的制备分2个步骤：粗茶树菇提取物的制备，采用水提和醇提2种方法进行提取，然后对比抗疲劳功效与抗氧化作用，确定粗提取的方法；对粗提取物进行分离纯化，进行抗疲劳功效与抗氧化作用对比试验，最终优选出分离纯化的茶树菇提取物。

将干茶树菇洗净、晾干，在60℃下烘箱中烘干60 min后，上粉碎机制成茶树菇粗粉，过80目筛。将水和80%乙醇分别按照1∶10的料液比与茶树菇粉末混合均匀，在60℃恒温水浴锅中水浴60 min，浸提3次后合并滤液，上离心机，2 500 r·min-1离心15 min后取上清液即得茶树菇叶粗提溶液。将茶树菇粗提液在60℃下烘箱中烘干浓缩，得干燥粉末即可分别得到水提茶树菇粗提物（1号样品） 和醇提茶树菇粗提物（2号样品）。

1.3 茶树菇分离纯化提取物的制备

使用XDA-8大孔吸附树脂进行分离纯化。将1号样品和2号样品粉末分别配置成200 mg·mL-1浓度的吸附液，将吸附液作为上柱液，以1 BV·h-1的流速流入层析柱，上柱液全部流入层析柱树脂吸附饱和后，静置12 h进行静态吸附，先用蒸馏水冲洗树脂直到出口流出的水变为无色透明，然后再以1 BV·h-1的流速用80%的乙醇溶液洗脱2 h，乙醇溶液体积为200 mL。收集洗脱液进行干燥处理，在60℃下烘箱中烘干1 h，最终分别可得2种茶树菇分离纯化提取物，即水提茶树菇分离纯化提取物干燥粉末（3号样品）、醇提茶树菇分离纯化提取物干燥粉末（4号样品）。

2 茶树菇提取物的抗氧化试验

2.1 茶树菇提取物的抗氧化试验原理

人体内的自由基过多会与正常的人体细胞抢夺电子，破坏正常细胞结构，从而引起人体细胞的变异，导致癌症、肿瘤、心血管等多种疾病[6]。采用体外抗氧化性试验来对茶树菇提取物对自由基的清除能力进行检测，在不同条件下茶树菇提取物的抗氧化活性进行研究，以研究茶树菇提取物对运动抗疲劳程度和影响。具体试验分别采用了二苯代苦味酰自由基体系、超氧阴离子自由基体系，对茶树菇提取物的抗氧化能力进行全面考察[4]。

2.2 清除率的计算

清除率（E，%） 计算公式为：

式中：A0为空白的平均吸光度；A1为试样的平均吸光度。

2.3 对二苯代苦味酰自由基体系清除作用的试验方法

二苯代苦味酰自由基试验是一种用以评价天然抗氧化剂抗氧化活性的快速、简便、灵敏可行的方法。首先，精密称取二苯代苦味酰自由基0.02 g，用无水乙醇定容至100 mL，配成0.02%的二苯代苦味酰自由基无水乙醇溶液，避光保存；将上面制备的1号～4号茶树菇提取物样品粉末分别用蒸馏水溶解成0.2 g·mL-1的样品提取液，然后分别取1 mL样品提取液；再取5支刻度试管，各加1.0 mL二苯代苦味酰自由基无水乙醇溶液，其中4支作为测定管，分别加入1号～4号样品提取液各3 mL，另1支作为空白管对照管加3 mL蒸馏水；在室温下避光保存30 min后，在517 nm吸收峰下用分光光度计测吸光度值。

2.4 对超氧阴离子自由基体系清除作用的试验方法

首先将制备的1号～4号茶树菇提取物样品粉末分别用蒸馏水溶解成0.2 g·mL-1的样品提取液；然后精密称取 0.05 mol·L-1的 Tris-HCl缓冲溶液 4.5 mL，于25℃预热20 min。然后取5支刻度试管，各加25 mmol·L-1邻苯三酚0.4 mL，其中4支作为测定管，各加1 mL的1号～4号样品提取液，另1支作为空白加1 mL蒸馏水；最后再加入8 mol·L-1HCl溶液终止反应。在299 nm吸收峰下用分光光度计测吸光度值。

3 试验结果及分析

1号样品：水提茶树菇粗提物；2号样品：醇提茶树菇粗提物；3号样品：水提茶树菇分离纯化提取物；4号样品：醇提茶树菇分离纯化提取物。将这4种样品所测定的吸光度值分别代入清除率公式，计算出每一种样品对不同抗氧化剂的清除率，同类进行比较分析。

3.1 对二苯代苦味酰自由基的清除作用

样品对二苯代苦味酰自由基的清除作用试验结果见图1。

如图1所示，1号～4号样品提取液对二苯代苦味酰自由基均有较好的清除作用，平均清除率达55.13%，其中4号样品的清除率最高64.80%；2种水提法的茶树菇提取物（1号、3号样品）对二苯代苦味酰自由基的清除能力均低于醇提法提取物（2号、4号样品），说明通过醇提法提取的茶树菇提取物的抗氧化能力更强；而茶树菇粗提取物（1号、2号样品）对二苯代苦味酰自由基的清除能力均低于分离纯化后的提取物（2号、4号样品），说明分离纯化后的茶树菇提取物对二苯代苦味酰自由基清除效果更好，其抗氧化能力也更强。

3.2 对超氧阴离子自由基的清除作用

4种样品对超氧阴离子自由基的清除作用试验结果见图2。

试验结果如图2所示，1号～4号样品提取液对超氧阴离子自由基均有较好的清除效果，平均清除率达62.55%，其中4号样品的清除率最高73.80%；2种茶树菇的粗提取物（1号、2号样品）平均清除率为62.50%，2种茶树菇的分离纯化提取物（3号、4号样品）平均清除率为62.60%，说明这一次提取和二次提取对超氧阴离子自由基的清除效果相当。但同一类提取物中，水提法提取物对超氧阴离子自由基的清除效果均低于醇提法（2号＞1号样品，4号＞3号样品），说明醇提法茶树菇提取物对超氧阴离子自由基的清除效果更好，抗氧化能力也更高。

4 讨论

可以看出，1号～4号茶树菇提取物样品对二苯代苦味酰自由基、超氧阴离子自由基均有一定的抑制作用。从总体清除率上比较，分离纯化后的提取物清除效果要好于粗提取物，可能的原因是二次提纯后的提取物中，多糖、多酚和黄酮类物质浓度更高，推测这些物质是茶树菇粗提物表现出抗氧化、抗疲劳功效的主要成分，而且随着浓度的增加，抗氧化抗疲劳效果会增强[5]。

茶树菇提取物对超氧阴离子自由基清除效果较好，分析其主要原因可能是，超氧阴离子自由基是人体内活跃的自由基，其氧化活性要高于其它自由基，即超氧阴离子自由基更加不稳定，更容易和多糖的大分子发生一系列的自由基反应，可以更快地打断自由基链式反应，从而减少这类自由基的生成；也可能是由于茶树菇提取物中的黄酮、多酚等抗氧化成分所表现出的抗疲劳功效和抗氧化作用。