长白山野生珊瑚状猴头菌菌丝最佳培养基配方研究*

曲 娜，刘 迪，2**，王 皓，王静文，刘玉冰，徐铁金，胡 雪

[1.延边大学农学院，吉林 延吉 133002；2.延边大学农学院食（药）用真菌研究所，吉林 延吉 133002]

珊 瑚 状 猴 头 菌 [Hericium coralloides（Scop.）Pers.]，其属于担子菌亚门（Basidiomycetes） 伞菌纲（Agaricomycetes） 红 菇 目（Russulales） 猴 头 菌 科（Hericiaceae） 猴头菌属（Hericium）[1]。珊瑚状猴头菌含有多种人体必须氨基酸、不饱和脂肪酸、以及维生素等，是十分美味的珍稀食（药）用菌[2]。图力古尔等[3]在2010年对长白山野生珊瑚状猴头菌完成了驯化栽培；张鹏等[4]对珊瑚状猴头菌子实体进行了研究；针对长白山区珊瑚状猴头菌的生态栽培技术，吴秀玲等[5]进行了研究。随着社会的发展，越来越多的人注重食品保健，市场上也更需要珊瑚状猴头菌这样的药食兼用菌，国内学者对珊瑚状猴头菌的多糖进行了大量的研究[6-11]。由于野生珊瑚状猴头菌有性繁殖时间过长，而无性繁殖约20 d左右，因此筛选珊瑚状猴头菌的最佳培养基配方具有重要的研究意义。

1 材料与方法

1.1 试验材料

菌种：猴头1号，延边大学农学院食（药）用真菌研究所保藏菌种。

1.2 基础培养基配方

葡萄糖 20 g·L-1、蛋白胨 2 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1、琼脂 20 g·L-1。

2 因素分析

2.1 不同碳源对珊瑚状猴头菌菌丝体生长的影响

在培养基 （蛋白胨 2 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1、琼脂20 g·L-1）中，分别将20 g·L-1的葡萄糖、淀粉、蔗糖、乳糖以及甘露醇作为碳源。另设1组对照组（CK），其中不添加任何碳源，每个处理重复5次。采取平板培养法，每个培养皿倒入35 mL培养液。将大小约为0.5 mm长势良好的菌块用打孔器接种于平板中央，并于25℃恒温箱中进行暗培养。菌丝生长后，用十字交叉法测定菌落直径并记录菌落生长速度、菌丝长势、干重和边缘等特征。采取Excel以及SPSS 22.0整理和分析数据。

2.2 不同氮源对珊瑚状猴头菌菌丝体生长的影响

在培养基 （葡萄糖 20 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1、琼脂20 g·L-1）中，分别将2 g·L-1的酪蛋白胨、酵母膏、氯化铵、硝酸铵、硝酸钾作为氮源。另设1组对照组（CK），其中不添加任何氮源，其余试验方法，测定项目及数据分析同2.1。

2.3 不同无机盐对珊瑚状猴头菌菌丝体生长的影响

在培养基 （葡萄糖 20 g·L-1、蛋白胨 2 g·L-1、琼脂20 g·L-1）中，分别添加0.5 g·L-1的MgSO4、CaSO4、ZnSO4和MnSO4的无机盐，另设1组对照组（CK），其中不添加任何无机盐。其他试验方法，测定项目及数据分析同2.1。

2.4 正交试验

采用L9（33）正交设计设定试验因素与水平见表1，从单因素分析中的最佳碳源、氮源、无机盐中选取各因素之间的最佳组合，便于选取最适珊瑚状猴头菌菌丝体生长的培养基配方。其余试验方法、步骤、测定项目同2.1。

表1 正交试验因素与水平Tab.1 Factors and levels in orthogonal test

3 结果与分析

3.1 不同碳源对珊瑚状猴头菌菌丝体生长的影响

不同碳源对菌丝体生长的影响见表2。

表2 不同碳源对珊瑚状猴头菌菌丝体生长的影响Tab.2 Effects of different carbon sources on mycelia growth of Hericium coralloides

从表2可以看出，珊瑚状猴头菌菌丝体在不同碳源中均可生长，在以葡萄糖为碳源时，菌丝生长势最优且干重最重，为1.7 mg，菌丝生长速度最快。综上所述，适合珊瑚状猴头菌菌丝体生长的最佳碳源为葡萄糖，其次为甘露醇。

3.2 不同氮源对珊瑚状猴头菌菌丝体生长的影响

不同氮源对菌丝体生长的影响见表3。

表3 不同氮源对珊瑚状猴头菌菌丝体生长的影响Tab.3 Effects of different nitrogen sources on mycelia growth of Hericium coralloides

从表3可看出，珊瑚状猴头菌在以酵母膏为氮源时，菌丝生长势最优且干重最重，为23.6 mg，明显高于其余处理，但菌丝长速与酪蛋白胨并无明显差异。综上所述，最适合珊瑚状猴头菌菌丝体生长的氮源为酵母膏，其次为酪蛋白胨。

3.3 不同无机盐对珊瑚状猴头菌菌丝体生长的影响不同无机盐对菌丝体生长的影响见表4。

从表4可看出，珊瑚状猴头菌菌丝体在以CaSO4为无机盐时，菌丝体生长速度及生长势最佳，菌丝体粗壮，菌丝边缘整齐，干重最重，为1.7 mg。综上所述，最适合珊瑚状猴头菌菌丝体生长的无机盐为CaSO4，其次是MgSO4。

表5 L9（33）正交试验结果Tab.5Results of L9（33）orthogonal test

3.4 正交试验

L9（33）正交试验结果与极差分析见表5。

如表5所示，A、B、C因素的极差值分别为1.14、0.67、0.95，所以对菌丝体干重的影响程度为葡萄糖＞CaSO4＞酵母膏。因此影响菌丝干重的重要因素是葡萄糖。A3B2C1是珊瑚状猴头菌菌丝生长和发育的最佳组合，即培养基最佳比例为葡萄糖25 g·L-1、酵母膏 2.5 g·L-1、CaSO40.3 g·L-1、琼脂 20 g·L-1。

4 结论

通过正交试验研究表明，珊瑚状猴头菌菌丝生长的最佳培养基配为葡萄糖25 g·L-1、酵母膏2.5 g·L-1、CaSO40.3 g·L-1、琼脂 20 g·L-1。

通过单因子方差明确了影响菌丝干重的3个因素，最适宜猴头菌菌丝生长的碳源、氮源、无机盐分别为葡萄糖、酵母膏、硫酸钙。