趋化因子C-C-基元受体4在结直肠癌中的表达及意义

陈子辉

(河北省廊坊市第四人民医院 普外科, 河北 廊坊, 065700)

据世界卫生组织(WTO)调查[1]显示，中国结直肠癌(CRC)的发病率和病死率均保持上升趋势。及早检测并发现肿瘤分子标志物，对于改善结直肠癌患者预后具有重要的临床指导意义[2]。随着医学水平的不断提升，针对趋化因子的检测的操作更为简单，创伤更小，价格更低[3]。研究[4]认为，趋化因子C-C-基元受体4(CCR4)高表达于某些肿瘤细胞，与多种肿瘤的生物学行为有关，其配体为趋化因子(CC基序)配体17(CCL17)，配体对受体的吸引可以促进CCR4表达阳性的肿瘤细胞循配体浓度梯度定向转移，可能形成了肿瘤转移的机制。本研究探讨趋化因子受体CCR4在结直肠癌中的表达，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年3月—2019年3月在本院接受结直肠癌原发灶外科手术的患者共80例作为A组，标本采用免疫组化法检测，患者年龄30～65岁，平均(42.30±2.50)岁。另选取同期良性结直肠肿瘤患者75例作为B组，患者年龄31～68岁，平均(41.90±0.42)岁。2组患者一般资料比较无显著差异(P>0.05), 具有可比性。

纳入标准: ① 所有标本均经病理证实为肿瘤或非肿瘤组织; ② 符合《中国结直肠癌诊疗规范(2017年版)》[5]相关规定，且未接受过放化疗。③ 经患者本人及家属同意签字确认。排除标准: ① 接受过放化疗的患者[6]; ② 未经病理证实的患者标本; ③ 合并其他类型疾病患者。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂和仪器: 柠檬酸组织抗原修复液、PBS、DAB均购自福州迈新生物技术开发有限公司, Systems cxcr4抗体购自美国Labvision/Neomarkers公司，免疫组化试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司(货号KS018), Trizol、DEPC、K1622、EP0404、R0191均购自德国(美国Gibco BRL公司，货号WE3091)。

1.2.2 CXCR4引物序列与标本收集: 上游序列为5′-ACAGCAGGCACAGACAGGCAGU-3′(表达方式1), 下游序列为5′-UAGCAGCGGGAACAGU

UCUGTGG-3′(表达方式2)。引物序列由北京佳诚有限公司合成。采用凝胶成像系统与凝胶电脉仪。手术过程中取结直肠癌组织，并置入液氮中冷存。

1.2.3 测定方法: 采用免疫组化二步法进行免疫组化染色，主要操作包括组织片脱蜡，水化阻断(s2001)→TBs冲洗(s1968)a抗HRP→TBs冲洗(s1968)显色剂DAB或AEc(K3467或K0697)水漂洗苏木精复染(s3309), 即用型二频法中包括孵育一抗，孵二抗试剂137 ℃ 20 min, DAB显色复染、脱水、透明、封片。

1.3 评价指标

① 比较2组趋化因子受体CCR4在结直肠癌组织与良性结直肠肿瘤组织中的阳性检测率，主要评价内容包括免疫组化法阳性例数、RT-PCR法阳性例数、PCR条带灰度比值[7]。② 分析相关临床病理因素与趋化因子受体CCR4阳性检测结果的关系[8]。

1.4 统计学处理

2 结 果

2.1 2组趋化因子受体CCR4阳性检测率比较

A组免疫组化法检测阳性例数、RT-PCR法检测阳性例数、PCR条带灰度比值均多于、高于B组，差异有统计学意义(P<0.05), 见表1。

表1 趋化因子受体CCR4在2组中的阳性检测率比较

与A组比较, *P<0.05。

2.2 临床病理因素与结直肠癌趋化因子受体CCR4阳性检测结果的关系

在结直肠癌组织(A组)中, CCR4阳性检测结果在性别、年龄、淋巴结转移、肝转移、分化程度、部位等临床病理因素中无显著差异(P>0.05), 在Duke分期中有显著差异(P<0.05)。见表2。

表2 结直肠癌临床病理因素与趋化因子受体CCR4阳性检测结果的关系

与同一病理因素另一亚项比较, *P<0.05。

3 讨 论

趋化因子在某些肿瘤细胞中高表达，已成为早期肿瘤检测的重要标志物。目前，已有30多种人类趋化因子被发现[9]。这些趋化因子通常在炎症中上调，主要作用于白细胞，诱导迁移和释放反应[10]。研究[11]表明，大多数趋化因子形成二聚体。然而，二聚体在稀释后分解，单体构成生物活性形式。所有趋化因子的主要受体结合域都在NH2末端附近，拮抗剂可在该区域通过截断或替换获得[12]。趋化因子对血管生成和肿瘤生长的影响已被报道，但其机制尚不清楚。最近研究[13]发现，一些趋化因子通过与趋化因子受体相互作用发挥HIV抑制因子的作用，这些受体与CD4一起被认为是HIV-1的结合位点，成为了相关领域的研究热点。

本研究结果显示, A组免疫组化法阳性例数31例(38.75%), RT-PCR法阳性例数34例(42.50%), PCR 条带灰度比值(0.507±0.053); B组免疫组化法阳性例数10例(13.33%), RT-PCR法阳性例数8例(10.67%), PCR 条带灰度比值(0.339±0.094), 2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。有研究[14]探讨趋化因子受体CCR4在结直肠癌中的表达及功能。通过二步免疫组织化学法或RT-PCR法检测，比较趋化因子受体CCR4与临床病理因素的关系。结果显示，结直肠癌组织Duke分期对CCR4阳性表达具有显著影响。CCR4在结直肠癌中可能具有免疫调节作用。趋化因子受体CCR4优先表达于某些免疫细胞和一些血液肿瘤细胞中，在抑制宿主免疫反应中起关键作用。马琪等[14]研究还发现，在富含淋巴细胞的癌细胞中，CCR4的阳性表达频率显著高于传统癌细胞(P=0.04), 且与肿瘤坏死因子-α表达呈正相关(P=0.012)。采用多种细胞因子刺激结肠癌细胞系的结果表明，肿瘤坏死因子-α通过激活核因子-κB来上调CCR4的表达。癌细胞共培养的CD56(+)自然杀伤细胞中的Granzyme A产生显著下调。采用化合物39的CCR4抑制剂抑制癌细胞中过度表达的CCR4，证明部分恢复了抗肿瘤免疫功能。

本研究结果显示，在结直肠癌组织(A组)中, CCR4阳性检测结果在性别、年龄、淋巴结转移、肝转移、分化程度、部位等临床病理因素中无显著差异(P>0.05), 在Duke分期、PCR条带灰度比值中有显著差异(P<0.05)。