天冬氨酸蛋白酶A、甲状腺转录因子-1、核苷酸切除修复交叉互补基因1检测在肺癌患者中的应用价值

杜旭升, 李东繁, 李广顺, 王冠杰, 柴丽丽,范亚莉, 李娜苗,5, 李建英

(西安交通大学医学院附属西安市中心医院, 1. 呼吸与危重症医学科; 2. 胸外科; 3. 肿瘤科; 4. 病理科, 陕西 西安, 710003; 5. 延安大学医学院, 陕西 延安, 716000)

肺癌是临床常见恶性肿瘤，发病机制以癌基因激活、抑癌基因失活为基础，患病率、病死率均较高，需加强早期诊断、治疗[1-2]。但多数肺癌患者早期症状不典型，出现相关症状入院确诊时已处于中晚期，丧失了最佳治疗时机，导致预后较差[3-4]。本研究对肺癌患者天冬氨酸蛋白酶A(NapsinA)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)、核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达进行免疫组织化学检验，探讨其在肺癌诊断中的作用，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月—2020年1月本院40例肺癌患者的肺癌病理标本进行研究。纳入标准: ① 符合《中华医学会肺癌临床诊疗指南》[5]中肺癌诊断标准，经手术病理检查确诊; ② 术前未行化疗、放疗等治疗; ③ 临床资料完整。排除标准: ① 转移性肺癌; ② 合并其他原发性恶性肿瘤、内分泌系统疾病; ③ 妊娠期、哺乳期妇女。40例患者中，男24例，女16例; 年龄45～75岁，平均(61.21±3.54)岁; 腺癌22例，鳞癌18例; 高分化17例，中分化12例，低分化11例; TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期17例, Ⅲ～Ⅳ期23例。以该40例患者癌旁正常组织作为对照，与肺癌组织进行比较。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂: 仪器包括德国徕卡仪器(中国)有限公司RM2025切片机、脱水机、恒温箱等。试剂包括武汉华美生物工程有限公司NapsinA单克隆抗体、福州迈新生物技术有限公司TTF-1单克隆抗体、北京中杉金桥生物技术有限公司ERCC1单克隆抗体等。

1.2.2 实验方法: 标本以10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，厚度4 μm, 进行免疫组化SP法染色。在0.01 mmol/L柠檬酸盐缓冲液(pH值6.0)中置入切片，抗原修复。水浴, 20 min; 取出，冷却; 置入磷酸盐缓冲液(PBS液)冲洗, 3 min/次, 3次; 一抗(NapsinA 1∶100, TTF-1 1∶50, ERCC1 1∶100)加入，静置, 4 ℃, 过夜; PBS液冲洗, 3 min/次, 3次; 二抗(Ea Vision法)试剂加入, 37 ℃, 静置30 min; PBS液冲洗, 3 min/次, 3次; DAN显色, 10 min; 苏木精衬染、分化、蓝化、脱水，树脂封片。

1.2.3 结果判定: 各切片随机选取10个高倍镜视野进行观察，各视野观察细胞数为200个。NapsinA位于细胞质, TTF-1、ERCC1位于细胞核内，以存在棕黄色颗粒沉淀为阳性。阳性细胞占比评分标准[6]: 0分为无阳性细胞, 1分为阳性细胞数占比<10%, 2分为占比10%～50%, 3分为占比>50%。染色强度评分标准[7]: 0分为不着色, 1分为黄色, 2分为棕黄色, 3分为黄褐色。2种评分相加, 0～2分为阴性表达, 3～6分为阳性表达。

1.3 观察指标

① 比较肺癌组织、癌旁正常组织NapsinA、TTF-1、ERCC1表达水平及阳性率; ② 分析肺癌组织NapsinA、TTF-1、ERCC1表达与病理参数关系; ③ 分析NapsinA、TTF-1、ERCC1表达相关性。

1.4 统计学分析

采用SPSS 20.0软件分析数据，计数资料对比行χ2检验，计量资料对比行t检验，相关性采用Pearson相关性分析,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 NapsinA、TTF-1、ERCC1表达水平

肺癌组织中NapsinA、TTF-1、ERCC1表达水平高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P<0.05), 见表1。

表1 NapsinA、TTF-1、ERCC1表达水平分析

NapsinA: 天冬氨酸蛋白酶A; TTF-1: 甲状腺转录因子-1;

ERCC1: 核苷酸切除修复交叉互补基因1。

与肺癌组织比较, *P<0.05。

2.2 NapsinA、TTF-1、ERCC1表达阳性率

肺癌组织中NapsinA、TTF-1、ERCC1表达阳性率高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P<0.05), 见表2。

2.3 NapsinA、TTF-1、ERCC1表达与病理参数关系

不同病理类型、分化程度者NapsinA表达阳性率比较，差异有统计学意义(P<0.05); 不同病理类型、TNM分期者TTF-1表达阳性率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表2 NapsinA、TTF-1、ERCC1表达阳性率分析[n(%)]

与肺癌组织比较, *P<0.05。

表3 肺癌组织NapsinA、TTF-1、ERCC1表达与病理参数关系分析[n(%)]

与同一病理参数另一亚项比较, *P<0.05。

2.4 NapsinA、TTF-1、ERCC1表达之间相关性

NapsinA、TTF-1、ERCC1表达之间无显著相关性(P>0.05), 见表4。

表4 NapsinA、TTF-1、ERCC1表达之间相关性分析(r值)

3 讨 论

现阶段，肺癌已逐渐发展成为严重威胁人们生命健康的重要疾病之一，病死率较高[8-9]。临床提升肺癌患者治疗效果、改善患者预后的关键是尽早采取积极措施进行诊断、治疗。肺癌各肿瘤组织学特征存在差异，病理诊断中支气管镜检、肺穿刺标本中组织较少，且较难单纯依靠肺组织学形态对肺原发腺癌、转移腺癌进行判断，诊断难度大[10]。近年来，随着临床研究的不断深入，人们开始越来越多地期望探寻到一种能早期诊断、识别肺癌的特异性较高的标志物，而这已成为未来的一个肺癌研究热点。

NapsinA是一种新型天门冬氨酸蛋白酶，存在一定蛋白水解酶活性，可参与肺部正常功能维持。研究[11-12]发现，一旦机体出现肺组织病变，可导致NapsinA表达异常升高，且表达水平与原发性肺腺癌分化程度呈正相关。本研究中，肺癌组织NapsinA表达水平及阳性率均较癌旁正常组织高，且不同病理类型、分化程度者表达阳性率差异显著，提示肺癌患者中存在NapsinA高表达，且表达率与病理类型、分化程度密切相关，随着NapsinA表达提升，细胞分化越差，病情越严重。TTF-1属于肺组织发育过程中所表达的组织特异性转录因子[13]。

TTF-1蛋白阳性颗粒主要定位于细胞核，且多在肺腺癌中表达，少在鳞癌中表达，具有较高敏感度、特异度[14]。本研究发现，肺癌组织中TTF-1表达水平及阳性率均较癌旁正常组织高，且不同病理类型、TNM分期者表达阳性率差异显著，佐证了上述分析。同时，肺癌组织TTF-1表达可能与肿瘤生长浸润相关，但其作用机制仍需进一步明确。ERCC1属于核苷酸切除修复家族重要成员之一, DNA损伤修复中核苷酸切除修复为重要途径，而ERCC1在核苷酸切除修复途径中发挥重要作用[15]。郑瑞锋等[16]提出，在肺癌发生、发展与铂类耐药等方面, ERCC1发挥着重要作用。

本研究中，与癌旁正常组织相比，肺癌组织中ERCC1表达水平、阳性率均较高，但ERCC1表达与年龄、性别、病理类型、分化程度、TNM分期等无相关性，与陈晓露等[17]结果相符。目前，临床就ERCC1表达与肺癌生存期关系的研究多为负相关，如孙江涛等[18]发现晚期非小细胞肺癌ERCC1高表达者生存率较低表达者低。分析ERCC1表达影响肿瘤生物学行为的可能机制为可编码DNA修复酶，但今后仍需进一步研究。本研究还发现，肺癌患者NapsinA、TTF-1、ERCC1表达之间无显著相关性，说明临床可经检测NapsinA、TTF-1、ERCC1表达，为肺癌诊断提供依据。

综上所述，临床加强NapsinA、TTF-1、ERCC1表达检测，可为肺癌诊断提供参考依据，值得进行深入研究。