血管软化丸调控微小RNA-21及抗动脉粥样硬化的作用机制研究

张晓慧，秦合伟，刘建东

动脉粥样硬化是缺血性心脑血管疾病的主要病理基础，研究发现微小RNA(miRNA)在动脉粥样硬化发病机制中起着重要作用[1]，miRNA-21可调控白细胞及核转录因子-κB(NF-κB)表达，影响机体炎症反应及动脉粥样硬化形成，血清miRNA-21和血细胞比容与动脉粥样硬化程度密切相关[2]。本研究旨在观察血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制是否与调控miRNA-21和炎性因子血清白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平等有关。

1 资料与方法

1.1 病例资料 选取2015年1月—2018年1月收治的颈动脉粥样硬化斑块病人60例。按照随机数字表法分为观察组和对照组，各30例。观察组男15例，女15例；年龄46～71(52.06±11.13)岁。对照组男16例，女14例；年龄45～70(51.98±15.13)岁。两组年龄、性别等基本资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 诊断与纳入标准 诊断标准：符合《血管超声检查指南》[3]、《超声医学》[4]中周围血管疾病关于颈动脉粥样硬化的诊断标准；经颈部彩色多普勒超声检查，颈动脉内膜中层厚度(MIT)≥1.2 mm。

纳入标准：符合上述诊断标准；年龄45～80岁，未曾服用动脉粥样硬化相关治疗药物，或已经停药4周以上者；病人签署知情同意书，并经医院伦理委员会审查通过。

1.3 治疗方法 对照组根据《颅外颈动脉和椎动脉疾病管理指南》[5]，采用辛伐他汀(默沙东制药公司生产，批准文号：H19990366)20 mg，每晚1次，口服。观察组采用血管软化丸干预，血管软化丸组方：山楂30 g，神曲30 g，莱菔子15 g，陈皮12 g，清半夏9 g，茯苓15 g，连翘12 g，郁金12 g，枸杞子15 g，三七12 g，赤芍12 g，丹参12 g，甘草3 g。由医院煎药房熬制成汤剂，每日1付，每付煎成2包，每包150 mL，早晚分服。治疗2个月后进行疗效评价。

1.4 观察指标 采用荧光RT-PCR法检测血清miRNA-21水平；采用温氏法(Wintrobe)检测血细胞比容；采用ELISA法检测血清IL-10、TNF-α、IL-6等炎性因子水平[5]。

血管内皮功能检测：采用化学发光法检测血清一氧化氮(NO)水平，采用放射免疫法检测血清内皮素-1(ET-1)水平，采用改良八木国夫法检测血清丙二醛(MDA)水平，采用ELISA双抗体夹心法检测血清von Willebrand因子(vWF)水平[2]。颈动脉粥样硬化斑块检测指标：采用HP SONOS3500型彩色超声多普勒仪，检查动脉内膜-中层厚度、内径、收缩期峰值流速、舒张末期流速、Crouse 斑块积分(即各个斑块最大厚度之和)[6]。

2 结 果

2.1 两组血细胞比容和miRNA-21表达比较 治疗前，两组血细胞比容、miRNA-21表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，观察组血细胞比容和miRNA-21表达水平较治疗前明显降低(P<0.05)，且降低程度明显大于对照组(P<0.05)。详见表1。

表1 两组血细胞比容和miRNA-21表达比较(±s)

2.2 两组血清炎性因子水平比较 治疗前，两组血清IL-10、TNF-α、IL-6水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，观察组血清IL-10、TNF-α、IL-6水平较治疗前明显降低(P<0.05)，且降低程度明显大于对照组(P<0.05)。详见表2。

表2 两组血清炎性因子水平比较(±s) 单位： pg /mL

2.3 两组血管内皮功能指标比较 治疗前，两组各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，观察组血清NO水平较治疗前明显升高(P<0.05)，血清ET-1、MDA和vWF水平较治疗前明显降低(P<0.05)，观察组所有指标改善程度均优于对照组(P<0.05)。详见表3。

表3 两组血管内皮功能指标比较(±s)

2.4 两组动脉粥样硬化程度和斑块对比 治疗前，两组颈动脉粥样硬化指标比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组颈动脉粥样硬化指标均较治疗前明显改善(P<0.05)，观察组各项指标改善程度均优于对照组(P<0.05)。详见表4。

表4 两组颈动脉粥样硬化程度和斑块比较(±s)

3 讨 论

动脉粥样硬化形成机制与脂质浸润、氧化应激、慢性炎症反应、血小板聚集以及血栓形成等密切相关，此外，内皮功能损伤也是动脉粥样硬化的主要病理特征，内皮结构的完整性遭到破坏会导致内皮微粒大量释放入血，促进动脉粥样硬化的发生发展[7]。研究发现，当血管内皮受损或内皮细胞功能发生障碍时，内皮细胞渗透性增加，血管收缩和舒张平衡状态被打破，ET-1合成增加，而NO合成降低，诱发血管收缩痉挛，导致心肌缺血缺氧，miRNA在血管内皮损伤中调节血管活性物质和细胞因子水平，如TNF-α、白介素(IL)等，进而调控炎症反应的程度及损伤程度[8]，miRNA-21表达上调可导致白细胞增加及NF-κB表达上调，促使IL-10、TNF-α、IL-6等炎性因子释放，从而影响机体炎症反应致动脉粥样硬化形成[2，9]。研究发现，反映血液黏稠度的血细胞比容与动脉粥样硬化程度呈正相关，而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平则与动脉粥样硬化程度呈负相关，因此，血清miRNA-21和血细胞比容可作为判断动脉粥样硬化程度的一种血液标志物，同时能反映动脉粥样硬化治疗效果[2]。

中医学无“动脉粥样硬化”这一病名，主要根据其常见临床症状将其归为“胸痹”“中风”“眩晕”等病，研究发现，中医药抗动脉粥样硬化注重调控血脂，抑制血小板活化[10]，调控SDF-1/CXCR4生物轴失衡[11]，通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路进而调控巨噬细胞自噬，延缓动脉粥样硬化的发生发展[12]。本研究所用中药复方血管软化丸方中山楂能消食积滞，为君药；神曲消食健胃，长于化酒食陈腐之积；莱菔子下气消食除胀，长于消谷物面食之积；半夏、茯苓健脾燥湿化痰；郁金、三七、赤芍、丹参行气散结，活血化瘀，共为臣药；陈皮理气和中，取其“治痰先理气，气顺则痰消”之意，为佐药；甘草健脾和中，调和诸药为使，诸药合用，共奏消积化痰、活血化瘀、平肝潜阳之功，使痰瘀同治，血行痰清、气血流通[13]。既往临床研究表明，血管软化丸能够降低血清炎性因子，调节血脂，抑制颈动脉粥样硬化斑块发展，血管软化丸能够促进神经功能恢复，抑制颈动脉斑块的发生发展，避免脑梗死的进一步发生[14]，血管软化丸可通过调控TLR9介导巨噬细胞极化效应，抑制颈动脉斑块的发生发展[13]。

本研究结果显示，经血管软化丸治疗后，观察组病人miRNA-21表达水平及血细胞比容和IL-10、TNF-α、IL-6等炎性因子水平较治疗前和对照组治疗后明显降低；观察组血管内皮功能损伤指标均较治疗前明显改善；观察组颈动脉粥样硬化程度和斑块检测指标较治疗前明显改善。表明血管软化丸治疗动脉粥样硬化可能与调控miRNA-21，进而调控血细胞比容，降低IL-10、TNF-α、IL-6等炎性因子水平，改善血管内皮功能密切相关。

本研究存在不足：本研究为单中心、小样本观察性研究，病例样本量较少，观察时间短，只观察了60 d，对于长期治疗安全性以及病人受益需进一步观察。因此，有待更多大规模、多中心、随机对照、双盲的临床试验观察血管软化丸治疗动脉粥样硬化的疗效，深入研究血管软化丸治疗缺血性心脑血管疾病的作用机制，为临床治疗提供试验依据。