血清抗子宫内膜抗体水平对PCOS合并不孕的预测价值

陈海娥，张申华，崔云静，李芳芳，许维

(天门市第一人民医院 1. 生殖医学科;2.普外科，天门 431700)

多囊卵巢综合征(PCOS)是女性常见的内分泌疾病之一。调查显示，育龄期妇女发病率在5%～10%[1]，同时亦是导致育龄期妇女无排卵不孕的主要因素。有报道称将近90%的PCOS患者发生不孕[2]，因此探讨PCOS的发病机制，对制定治疗方案、改善患者预后具有重要的临床意义。目前认为自发性免疫反应、激素紊乱与PCOS的病情进展密切相关[3]，其中免疫反应是PCOS引起不孕不育最常见的因素之一[4]。抗子宫内膜抗体(EMAb)是以子宫内膜为靶抗原引起的一系列免疫反应自身抗体。育龄期妇女血清EMAb在子宫内膜异位症、排卵障碍、输卵管阻塞等疾病中异常升高[5]。有研究证实EMAb是引起女性免疫性不孕的重要因素之一[6]。目前关于PCOS合并不孕患者中EMAb的研究甚少，因此，本研究采用酶联免疫吸附(ELISA)试验法检测PCOS合并不孕患者血清中EMAb水平，并进一步分析其对PCOS合并不孕的预测价值，以期为临床上制定合理的治疗方案提供参考，现报道如下。

资料与方法

一、研究对象

本研究经医院伦理委员会审核并批准。收集2018年6月至2019年6月我院生殖医学科收治的112例PCOS合并不孕症患者作为研究对象(PCOS组)，选取同期于我院体检中心进行孕前体检的60例健康妇女作为对照组。

纳入标准：(1)PCOS诊断符合欧洲人类生殖和胚胎医学会与美国生殖医学(ESHRE/ASRM)鹿特丹专家会议推荐的诊断标准[7]，且满足以下3项中2项临床指标：生化检测血清总睾酮(T)水平≥0.51 ng/ml(1.62 nmol/L)；稀发排卵或持续无排卵；超声检查提示卵巢呈多囊样改变，卵泡≥12个，一侧或双侧卵巢卵泡直径2～9 mm，卵巢体积≥10 ml；(2)不孕症符合相关文献诊断标准[8]：有正常性生活、未采取避孕措施1年内未妊娠者；(3)患者及家属同意本次研究，并签署知情同意书。

排除标准：(1)合并肝肾功能异常者；(2)其他疾病导致的雄激素增加者；(3)合并甲状腺功能异常、高泌乳素血症、肾上腺皮质增生等内分泌系统疾病；(4)合并其他妇科疾病、重要脏器功能障碍及恶性肿瘤者；(5)近3个月内应用激素类药物促排卵治疗者。

二、研究方法

1.样本收集：2组受试者于月经周期第3天(月经失调者可于超声检查未见优势卵泡时)，清晨空腹采集肘静脉血5 ml。血液标本静置30 min，以3 000 r/min离心10 min，吸取上层血清，置于-80℃冰箱内保存备用。

2.检测方法：血清EMAb检测采用ELISA，检测仪器为美国Molecular Devices Emax酶标仪，按照试剂盒说明书操作：将20 ml洗涤液加入480 ml蒸馏水配置稀释洗涤液；冷冻血清标本平衡至室温，将标本与稀释后洗涤液按照1∶100稀释，震荡、混匀；分别设置样本孔、标准品孔、空白对照组孔，样本孔中加入待测样本，标准品孔加入不同浓度标准液，空白孔不加任何检测液。向标准品孔和样本孔中加入酶联物，封闭反应板，置于恒温箱内37℃孵育30 min；甩尽反应板液体，用洗涤液清洗，拍干；向各孔中加入底物37℃避光孵育10 min。滴加终止液，450 nm处检测各孔吸光度值，通过吸光度值计算Cutoff值，若样本孔吸光度值大于Cutoff值为阳性，反之则为阴性，并绘制吸光度曲线计算待测样本含量。

采用电化学发光法检测血清SH、睾酮(T)、LH、孕酮、E2等性激素水平，检测仪器为瑞士罗氏E411电化学发光仪。

三、统计学方法

结 果

一、两组受试者一般资料比较

两组受试者的年龄、体重指数(BMI)、FSH等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)；PCOS组的EMAb、T、LH显著高于对照组，而孕酮、E2显著低于对照组(P<0.05)(表1)。

二、PCOS合并不孕症的多因素Logistic回归分析

Logistic回归分析结果显示，EMAb、LH、孕酮是PCOS合并不孕症的独立危险因素(P均<0.05)(表2)。

三、血清EMAb、LH、孕酮对PCOS合并不孕症的诊断价值

ROC曲线分析显示，血清EMAb鉴别PCOS合并不孕症的AUC为0.959，LH、孕酮的AUC分别为0.771、0.844；血清EMAb检测的诊断价值显著高于LH、孕酮检测(Z分别为4.715和2.798，P<0.05)(表3，图1)。

表1 两组受试者一般资料比较(-±s)

注：与PCOS组比较，*P<0.05

表2 PCOS合并不孕的多因素Logistic回归分析

表3 血清EMAb、LH、孕酮对PCOS合并不孕症诊断价值

图1 血清EMAb、LH、孕酮对PCOS合并不孕症的诊断效能

四、PCOS合并不孕症患者血清EMAb与LH、孕酮激素水平相关性

相关性分析显示，PCOS合并不孕症患者血清EMAb与LH呈正相关，与孕酮呈负相关(P均<0.05)(表4，图2)。

表4 PCOS合并不孕症患者血清EMAb 与LH、孕酮水平相关性

图2 PCOS合并不孕症患者血清EMAb与LH、孕酮水平相关性分析

讨 论

PCOS是临床常见的育龄妇女生殖内分泌失调疾病之一，主要以不孕、无排卵、月经不调、多毛等为临床表现[9]。PCOS的具体发病机制尚未完全清楚，现仍处于探究阶段。有报道称PCOS是导致无排卵性不孕的重要病因，与自身免疫功能失衡、性激素水平异常等相关[10]。PCOS患者体内FSH多数处于正常水平，但雄激素、LH的高水平状态使优势卵泡及正常卵泡发育受阻，产生囊状卵泡，发生排卵障碍。由于患者体内高雄激使免疫功能异常激活，产生自身抗体和大量炎性因子，使机体处于免疫功能紊乱和慢性炎症状态。PCOS患者无排卵使机体黄体酮水平降低，下丘脑-垂体-卵巢轴功能失调，产生多种自身反应抗体。向跃芸等[11]研究发现在PCOS患者卵巢中自身抗体水平显著升高。PCOS患者机体产生的多种自身反应抗体，以及众多免疫分子和免疫细胞的相互作用，共同导致了PCOS发生的病理进程[12]。

EMAb是子宫内膜异位的标志性抗体，主要与子宫内膜异位刺激及体内环境失调有关。EMAb对子宫内膜结构进行破坏，影响子宫内膜发育，使受精卵着床和胚胎发育不良，是导致孕妇流产的重要因素。多篇研究证实，不孕不育患者EMAb、抗精子抗体等检测水平明显高于正常孕妇[13-14]。生殖免疫抗体阳性是育龄妇女不孕的主要原因之一[15]。提示正常机体具有自身免疫调节功能，其产生自身抗体能够清除体内自然衰变成分，但由于其他应激反应导致机体免疫系统活性增加，会造成机体组织的过度免疫应答。由于机体免疫反应活性增强，侵犯免疫细胞，发生免疫复合物沉积，导致免疫功能失衡。EMAb可增强免疫细胞水平，与抗原抗体相结合引发损伤性效应，造成机体组织细胞生理及代谢功能损伤，影响受精卵着床及胚囊发育，导致不孕症发生。本研究结果显示，PCOS合并不孕症患者中EMAb的升高与病情严重程度相关，且PCOS患者血清EMAb水平显著高于对照组，提示PCOS患者存在自身免疫反应和应激氧化损伤；本研究结果还发现，血清EMAb诊断PCOS合并不孕症的AUC为0.959，表明EMAb是一个较为理想的PCOS合并不孕症诊断标志物。进一步研究发现，EMAb与PCOS合并不孕症存在相关性，其作用机制可能如下：(1)EMAb处于高水平状态可引发细胞免疫功能紊乱，增大应激氧化反应，不利于胚胎发育着床，增加母体对胚胎免疫排斥。(2)PCOS合并不孕症患者体内EMAb过度表达，增加卵泡聚集数目，增强对LH的敏感性，雄激素局部的产生导致卵泡发育延迟或停止发育。

综上所述，血清EMAb异常升高可能是导致PCOS患者合并不孕的重要因素，血清EMAb水平监测能够为患者预后的早期预测提供依据。但由于本研究属于单中心、小样本量的研究，研究结论可能存在一定的偏倚，后期尚需要多中心、大样本量的研究加以研究探讨。