酶联免疫试验两步法检测乙型肝炎病毒表面抗原的影响因素研究

孙四力

(驻马店市中心血站，河南 驻马店 463000)

血筛两步法从2010年10月1日开始，所有的试剂全都采用两步法，停止使用其它方式[1，2]。本文通过驻马店市中心血站于2016年8月～2018年12月期间的献血员乙肝标本300例，分析酶联免疫试验两步法在乙型肝炎病毒表面抗原的检测中的效果。

1 资料和方法

1.1 一般资料

将驻马店市中心血站于2016年8月～2018年12月期间的献血人员乙肝标本300例作为本次研究对象，利用酶联免疫吸附实验将乙肝表面抗原大于10的阳性标本进行分离，将血清进行混合，作为阳性参照血清；乙肝表面抗原小于1的阴性标本进行分离，将血清进行混合，作为阴性参照血清，将生物科技公司提供的乙肝表面抗原的标准物质作为弱阳性参照血清。

1.2 方法

a)仪器和试剂：全自动酶标仪器和乙型肝炎病毒表面抗原诊断的试剂盒[3]。b)分别在阳性、弱阳性、阴性血清中按照以下的方法进行，每种血清重复加入不少于10次，与标本的S/CO平均值进行对比[4]：按照说明书进行，加入20 μL的稀释液进行稀释，再将其加入阳性、弱阳性、阴性的参照血清100 μL，混合均匀，进行温育，并且封板后放置，温度为(37±1.1)℃，温育时间为(60±1.3) min[5]；进行加酶，除空白孔之外每个孔中加入酶标准试剂50 μL，也需要混合均匀；温育—封板后放置，温度为(37±1.1)℃，温育时间为(30±1.4) min[3]；洗板—利用洗板机进行洗涤，不少于5遍，并将其扣干；颜色显露时间的变化—在每个孔中加入显色剂A、B液为50 μL，混合均匀，温度为(37±1.1)℃，颜色显露的时间为(30±1.4) min；进行最终的测定—在孔中加入50 μL的终止液，均匀混合，10 min内进行结果的测定。

加入1滴稀释液，除将第一步的稀释变成为用滴瓶进行滴加1滴之外，其余的方式和标准法一致；没稀释液即第一步不加入任何稀释液，其余和标准法的一致；加入血清之后温育时间的变化，将标准方法里温育的时间调整为45 min，其余方法一致；洗板，除先加入血清孵育之后再洗板，其余也与标准法一致；加入酶之后孵育时间的变化，将标准方法里温育的时间变为15 min，其余方法一致；颜色显露时间的变化，将标准方法里颜色显露时间变为15 min，其余一致。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 加入1滴稀释液

观察标本加入1滴稀释液的效果对比见表1。

表1 为加入1滴稀释液的效果数据

2.2 没有使用稀释液

未使稀释液的观察标本见表2。

表2 为未使稀释液的观察标本

2.3 加入血清之后温育时间的变化

当标本加入血清之后温育时间的变化观察研究见表3。

表3 为加入血清之后温育时间的变化

2.4 加入血清进行孵育之后洗板

当标本加入血清进行孵育之后洗板数据见表4。

表4 为加入血清进行孵育之后洗板

2.5 加入酶之后孵育时间的变化

当指标加入酶之后孵育时间的变化数据见表5。

表5 为加入酶之后孵育时间的变化

2.6 颜色显露时间的变化

观察指标颜色显露时间的变化数据见表6。

表6 为颜色显露时间的变化

3 讨论

酶联免疫试验的准确率高达99.99%，常在筛选血清标本的标志物，随着技术的成熟，对于乙型肝炎病毒表面抗原诊断的试剂盒进行升级，使得灵敏度和特异性得到了提高[4]。酶联免疫能够进一步将血清和酶标志物一同加入，温育的时间为30 min，在此之后两步法中加入血清之后温育的时间也能得到延长。酶联免疫试验将颜色显露的时间从15 min也延长为30 min，该显露的时间对阳性和阴性标本来说，影响并不大，但对弱性标本的影响就比较大[3,4]。

综上所述，酶联免疫的实验对阳性标本没有什么影响，因为其含有大量的抗原，抗原抗体会有特异性反应。但是弱阳性标本的结果会被影响，特别是处于灰区的标本影响更为严重，因此在日常生活中，必须要按照试剂盒的说明书进行，这样才能对结果有促进作用，减少误差误判。