免疫组化在肺小细胞癌活检诊断中的作用

（辽宁省辽阳市中心医院，辽宁 辽阳 111000）

现阶段，肺癌病发率呈现出逐渐增长的趋势，为患者身心带来极大折磨，严重影响了患者生活质量。肺癌作为恶性肿瘤，在免疫表型、分子遗传学水平、细胞学以及组织学等方面有着异质性，通常分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌。结合肺癌患者总数进行分析，75%以上患者属于非小细胞肺癌，仅有25%左右的患者是小细胞肺癌类型[1]。基于此，本文随机抽取我院2016年～2017年收治的50例肺穿刺与支气管镜活检患者作为本次报道的研究对象，分析免疫组化在肺小细胞癌活检诊断中的作用，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：随机抽取我院2016年～2017年收治的50例肺穿刺与支气管镜活检患者作为本次报道的研究对象，其中，男性患者29例、女性患者21例，患者年龄35～73周岁、平均年龄是（56.37±5.63）周岁。结合病理组织形态学进行分析，全体患者均确诊肺癌，倾向肺小细胞癌，50例患者进行Syn、ki67、CgA、34βE12、P63、CK5/6、LCA免疫组化诊断。

1.2 方法：病理组织学检查，标本是10%中性福尔马林固定，通过常规脱水、切片、石蜡包埋、HE染色，采取显微镜观察，按照形态学特征完成诊断。免疫组化检测，认真遵循试剂盒的操作要求、规范说明展开具体工作，使用PBS缓冲液、正常性肺组织切片当做阴性组以及阳性组，主要检测项目为p63、TTF-1、p40，记录相关信息[2]。

1.3 评价标准：检验判定的方式[3]：若p63、TTF-1、p40染色呈棕黄色、棕褐色，判定阳性。根据阳性细胞占比（%）将结果细分成以下情况：第一，阴性（无阳性细胞）；第二，+（阳性细胞≤10%）；第三，++（阳性细胞维持于11%-50%）；第四，+++（阳性细胞维持于51%～75%）；第五，++++（阳性细胞≥76%）。

1.4 统计学方法：采用统计学软件SPSS2.0对50例肺癌患者的数据进行统计和分析，计数资料（例数比率），当P＜0.05时差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 病理组织学结果：50例确诊为肺癌的患者中3例非何杰金氏淋巴瘤、9例低分化鳞癌、38例小细胞肺癌。小细胞肺癌的镜下状态为：癌细胞呈现巢状、小梁状、片状分布，其细胞核为卵圆形、梭形、圆形，核染色质呈微细颗粒状且染色相对较深，核仁不明显或严重缺乏，细胞分界模糊以及胞质稀少。低分化鳞癌的镜下状态为：癌细胞呈现出巢状、片状分布，其细胞核为卵圆形，泡状核或染色质过粗，核仁相对明显但是胞质过少；非何杰金氏淋巴瘤的镜下状态为：肿瘤细胞整体排列过于分散，细胞核为卵圆形、圆形，染色质过粗。

2.2 免疫组化结果：50例确诊为肺癌的患者中小细胞肺癌表达率高达100%（50/50）、CgA表达率64%（32/50）、CK5/6表达率6%（3/50）、TTF-1表达率74%（37/50）、Syn表达率86%（43/50），LCA、34βE12、p63均是阴性表达。2例非何杰金氏淋巴瘤中Syn灶状区阳性表达、LCA阳性表达，Sclc、TTF-1、CgA、34βE12、p63阴性表达；3例低分化鳞癌中CK5/6、34βE12、p63阳性表达，1例Syn灶状区阳性表达，TTF-1、LCA、CgA、Sclc阴性表达。

3 讨 论

近年来，医学技术日渐成熟，肿瘤学、分子生物学等研究获得极大进步，针对不同组织学类型和肿瘤分子改变出现差异化病理类型、治疗。结合临床实际情况进行分析，小细胞肺癌诊断相对复杂，非常容易被误诊成非小细胞肺癌。所以，我们必须最大程度上提高病理准确性，现行诊断方法为活检检测技术，可是正式检测环节使用的样本量过少并且会受到人工挤压，造成细胞变性，降低镜下组织结构分辨清晰程度，最终出现误诊[4]。

通过免疫组化方式进行肺小细胞癌鉴别，相较于其他的检测方式有着更明显的优势。借助于不同酶系统来催化差异化显色底物，进而呈现出对应的颜色，完成同张组织切片中不同抗原的表达。免疫组化有着实用性强、操作便捷、特异性高以及灵敏度高等特征，通常情况下，使用这一方式需要注意以下两个问题：一是，为防止出现交叉反应，应该正确筛选不同酶；二是，尽量选择色彩对比更加明显的色组当做显色底物[5]。此外，实际操作阶段需要严谨把控具体环节，多角度规避影响最终检测结果的因素，辅助医师、患者做出正确的治疗判断。免疫组化双染时需要遵循相关操作原则：阳性表达部位可以是细胞核、细胞质，根据抗体、细胞膜表达的不同阳性部位，若同步执行2～3种抗体（有着直标或者间标），率先进行间标抗体，然后才是直标抗体，重视抗原性强弱程度，根据顺序从弱至强展开标记。

4 免疫组化技术分析

4.1 免疫组化方法：首先，肿瘤组织起源的鉴别诊断。由于免疫组化作为复杂性生物技术，对于组织起源确定等方面的应用有着较大前景[8]。针对各抗体标志物有着对应的染色方式，其目的就是可以明确各类组织的起源以及判断组织内是否存有特异抗原；其次，肿瘤生长的活跃程度、微小转移灶判断。检测激素受体为临床治疗提供参考依据[9]，以乳腺癌细胞为例，雌激素阳性表达，患者需要给予三苯氧胺治疗，发挥出封闭乳腺癌细胞的雌激素受体效能；再次，进行激素类细胞定位、定性的检测，了解内分泌细胞类型与功能状况[9]，如类癌、垂体瘤以及胰岛细胞瘤等；最后，按照阳性标记显色程度划分成棕黑色（强阳性）、棕黄色（中等强度）以及淡黄色（弱阳性）。结果判断环节，前两个有着较强的意义，能够作为检测判读的依据。除却标本处理与方法学等因素，可以和细胞表达轻度异常，以及部分细胞摄取周围组织抗原等原因[10]。结合章俊强等[11]研究厄洛替尼治疗表皮生长因子受体突变型小细胞肺癌1例的报告展开分析，免疫组化标记过程中，阳性标记的细胞学特征是把抗原在细胞内定位情况、分布情况显现出来，拟标记细胞应该将诊断结果的阳性细胞作为前提条件，实现阳性表达需要在细胞特定的抗原部位，反之不可以把阳性表达当做判断的主要依据。

4.2 免疫组化结果判读原则：第一，设置染色对照。每个染色都应该以特定性阳性与阴性对照当做基础，才可以正确判读出染色结果。如果没有相关的阳性对照，则无法做出准确的阴性结果。同样，如果没有相关的阴性对照，也难以判断出准确的阳性结果[12]。所以，免疫组化染色没有对照，即便是做出判断其可靠性也相对较低；第二，抗原表达应该在特定的部位。李彦玮等[13]中国人群肺癌Napsin A蛋白表达的Meta分析提出阳性表达应该在细胞与组织的特定抗原部位才可以视作阳性。如LCA在细胞膜中，而不是在抗原所处部位的阳性表达不能够判断成阳性；第三，阴性结果不可以视作抗原不表达。熊焰等[14]学者在非小细胞肺癌磷脂酰肌醇3激酶p110α蛋白高表达的临床意义及机制的研究报道中提出了阴性结果不可以认为有着否定意义，对于阳性表达可以分为多少或者强弱，即便是少数细胞呈阳性并且在抗原所在部位，也应该视作阳性表达，不可以认为单一细胞的阳性不能够当做阳性；第四，免疫组化和HE切片诊断需要把HE切片诊断当做主要参考。若是发生HE切片、免疫组化的诊断结果不一致问题，医护人员需要综合参考影像学、实验室结果以及患者临床资料，不可以片面采取免疫组化的诊断结果取代HE切片的诊断结果[15]；第五，假阴性结果原因。因为组织自溶和抗原扩散，使得抗原消失，尤其是长期固定标本里因为抗原漏出将会造成假阴性结果，所以应该采用新鲜固定标本[16]。抗体失去活性、抗体自身敏感度不达标或者浓度不足也会引起假阴性，再加上人员操作不当，洗脱不足、温度过高或者反应时间不足更是加重了假阴性结果出现概率。此外，细胞、组织的抗原含量相对较低，如果采取直接检测法将会呈现出阴性，而选择间接检测法则呈现出阳性；第六，假阳性结果原因。采用抗体同其他无关抗原出现交叉反应，其特异性较差，尤其是使用多克隆抗血清后更容易发生。这种情况在范军振等[17]免疫组织化学法在非小细胞肺癌EML4-ALK融合基因检测中的应用中也发生过抗体浓度相对较高、染色环节切片过于干燥，使得抗体同组织出现了非特异性组合。同时，细胞和组织的生物素、内源性过氧物酶以及碱性磷酸酶出现了非特异性的显色操作。

总而言之，肺穿刺与支气管镜活检单纯由形态学角度进行肺小细胞癌的诊断过于片面，风险性过高，其需要同不典型类癌、淋巴瘤以及低分化鳞癌进行鉴别并且上述四种疾病治疗方案不尽相同。所以免疫组化标志物Syn、ki67、CgA、34βE12、P63、CK5/6、LCA在鉴别诊断以及诊断中有着十分重要的作用。