探讨国内抗酿酒酵母抗体（ASCA）鉴别诊断克罗恩病的截断点（cutoff值）的相关研究

姚芳 桑怡 范一宏

[摘要] 目的 检测抗酿酒酵母抗体IgG、IgA在克罗恩病患者中的表达水平，探讨其鉴别诊断克罗恩病的cutoff值。方法 纳入2018年10月～2019年4月期间诊断为克罗恩病的患者109例，溃疡性结肠炎30例，内镜检查无异常者25例。间接酶联免疫检测法测定患者血清中抗酿酒酵母抗体IgG、IgA表达水平，计算其cutoff值、灵敏度、特异度等指标。 结果 抗酿酒酵母抗体的阳性率为47.71%，抗酿酒酵母抗体IgG的cutoff值为10.5，灵敏度为71.56%，特异度为61.82%;抗酿酒酵母抗体IgA的cutoff值为0.415，灵敏度为66.06%，特异度为78.18%;两者任一阳性的灵敏度为85.32%，两者均阳性的特异度为80.00%。 结论 抗酿酒酵母抗体IgG、IgA在中国人群克罗恩病患者中的表达水平不高，需制定相应的cutoff值，两者联合检测可提高克罗恩病患者检出率。

[关键词] 克罗恩病;抗酿酒酵母抗体;ROC曲线;灵敏度;特异度

[中图分类号] R574.62          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2019）30-0010-04

Study on the investigation on the cutoff value of domestic anti-Saccharomyces cerevisiae antibody（ASCA） for differential diagnosis of Crohn's disease

YAO Fang1   SANG Yi1   FAN Yihong2

1.Department of Gastroenterology， Hangzhou Hospital of TCM， Hangzhou 310007， China;2.Department of Gastroenterology， the First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medicine University， Hangzhou   310006， China

[Abstract] Objective To detect the expression level of anti-Saccharomyces cerevisiae antibody IgG and IgA in the patients with Crohn's disease， and to explore the cutoff value of differential diagnosis of Crohn's disease. Methods A total of 109 patients with Crohn's disease， 30 patients with ulcerative colitis and 25 patients with no abnormalities by endoscopy were enrolled from October 2018 to April 2019. Indirect enzyme-linked immunosorbent assay was used for the determination of ASCA IgG and IgA expression levels in patients' serum， and the indicators such as cutoff value， sensitivity， and specificity were calculated. Results The positive rate of ASCA was 47.71%， the cutoff value of ASCA IgG was 10.5， the sensitivity was 71.56% and the specificity was 61.82%; the cutoff value of ASCA IgA was 0.415， the sensitivity was 66.06%， and the specificity was 78.18%; the sensitivity of either positive was 85.32%， and the specificity of both positive was 80.00%. Conclusion The expression levels of ASCA IgG and IgA are not high in the patients with Crohn's disease in China. A corresponding cutoff value needs to be established， and the combined detection of the two can improve the detection rate of patients with Crohn's disease.

[Key words] Crohn's disease; Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody （ASCA）; ROC curve; Sensitivity; Specificity

克羅恩病（Crohn's disease，CD）是一种多种因素导致的可累及全消化道的慢性炎性肉芽肿性疾病，不同因素所导致的不同疾病亚型的混杂，导致了CD临床谱的异质性，临床表型纷繁多样[1]，仅靠内镜、影像等检查常不能确诊，且病理往往不典型，长期随访过程中常导致疾病的进展，因此，临床特别是基层临床非常需要一些明确的客观性检测指标，而抗酿酒酵母抗体（Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody，ASCA）是国内外研究较深入的用来辅助诊断CD的特异性血清学标记物，但国内外研究数据差距较大，其具体应用价值在国内存在较大争议。本研究旨在根据我国CD患者ASCA表达水平制定相应的cutoff值，使其更好地应用于临床。

1 资料与方法

1.1一般资料

纳入2018年10月～2019年4月期间就诊于浙江省中医院、浙江大学附属邵逸夫医院、浙江大学附属第一医院、浙江大学附属第二医院、苏州大学附属第三医院、杭州市中医院等6家医院并根据《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2018年·北京）》被确诊[2]为CD的患者109例，并选取同期溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）患者30例，健康者25例作为正常组，各组在年龄、性别构成比、病程方面比较均无统计学差异（P>0.05），见表1。

1.2 方法

1.2.1 标本采集  清晨空腹抽取静脉血5 mL，离心抽取上方血清1 mL置于2 mL EP管中，放入-80℃冰箱保存，集中检测各项指标。血清学检测采用单盲法进行。

1.2.2 抗体测定  各指标采用ELISA法检测，试剂盒购自苏州和锐医药科技有限公司。检测步骤严格按照说明书进行。将所有检验试剂在18℃～25℃条件下平衡0.5 h，然后按1：20去蒸馏水进行稀释。样本1：101进行稀释，取100 μL稀释后样本和阴性质控（蒸馏水）加入酶标板微孔中，覆上板贴33℃摇床200 r温育120 min。弃去液体，洗涤液洗板3次，250 μL/孔，每次浸泡3 min，甩干。每孔加酶标二抗100 μL，覆上板贴，33℃～35℃摇床200 r温育120 min。弃去孔内液体，甩干，洗板5次，250 μL/孔，每次浸泡3 min，甩干。将底物溶液A和B 1：1混合，依序每孔加底物溶液100 μL，37℃避光显色15 min。依次每孔加终止液50 μL，终止反应。反应终止后5 min内用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度（OD）值。

1.3 观察指标

ASCA IgG、ASCA IgA在各组中的阳性率，诊断CD的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。

1.4统计学分析

采用SPSS19.0统计学软件，受试者一般临床资料采用独立样本t检验，指标阳性率采用χ2检验，并采用ROC曲线寻找ASCA IgG、ASCA IgA的cutoff值，根据cutoff值计算其灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。

2 结果

2.1 ASCA IgG、IgA在各组患者中的阳性率

ASCA IgG、IgA在CD患者中的阳性率分别为16.51%、40.37%，均高于UC组、正常组，两者联合检测阳性率达47.71%，与其他两组比较差异均有统计学意义（P=0.001），见表2。

2.2 ASCA IgG、IgA鉴别诊断CD的价值

ASCAIgG、ASCAIgA在CD患者中高表达，因此，我们以CD组为实验组，以UC及正常组为对照组，计算两指标的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及ROC曲线下面积，以此分析其鉴别诊断CD的价值。

ASCA IgG诊断CD的特异度较高，达96.36%，但灵敏度严重不足;ASCA IgG、ASCA IgA两者联合检测可提高灵敏度至46.79%，但在筛查疾病方面仍存在不足;两者特异度均较高，联合检测时更高达100%，鉴别诊断CD价值高，见表3、4;ROC曲线分析得出ASCA IgG、ASCA IgA曲线下面积分别为0.671、0.760，从而得出最佳灵敏度和特异度及曲线下面积的截断点（cutoff值）分别为10.5、0.415（图1、2）。根据新的截断点重新计算，ASCA IgG、IgA灵敏度均有不同程度提高，但特异度有所下降;但两者联合检测时任一阳性的灵敏度高达85.32%，均阳性的特异度高达80.00%，见表5、6。

3 讨论

克罗恩病的发病与肠道微生物及免疫反应失调存在显著相关性，这些不平衡反应也包括体液免疫，如ASCA的产生。ASCA是针对酿酒酵母细胞壁上寡甘露糖苷抗原表位的血清标志物，ASCA阳性提示患者对酵母菌抗原耐受性缺失。1988年研究[3]发现CD患者血清ASCA IgA和IgG滴度高于对照组，随着研究深入，ASCA以37%～72%的灵敏度及82%～100%的特异度[4]被广泛应用于辅助诊断CD，鉴别肠结核、溃疡性结肠炎、肠道白塞等疾病[4-11]。

来自欧洲的研究报道显示CD患者ASCA的阳性率可达60%～70%，美国一项研究[12]亦显示ASCA阳性率达62%，而本研究中ASCA阳性率仅为47.71%，与日本的调查结果（45.6%）[13]及既往国内研究结果[14]相一致，均远低于欧洲人群。

ASCA有IgA和IgG两个亚型[15]。有研究认为，ASCA IgA对CD更具有特异性，分泌型IgA参与了CD疾病发病过程中的肠道免疫机制，更有研究表明ASCA IgA 对CD有100%的特异性[16]，但大宗人群研究不能重复这一结果，本研究结果亦显示ASCA IgA单独检测特异度及阳性预测值高达83.64%、82.69%，但灵敏度及阴性预测值则明显不足，仅39.45%、41.07%，而ASCAIgG也显示出相同结果，两者联合检测时同樣显示出灵敏度的严重不足，使之无法很好地用于临床筛查。

导致这一研究结果的原因可能与疾病严重度、活动度、病变累及范围不同等有关：国外炎症性肠病患者均较严重，CDAI评分在中、重度者居多，肠瘘、梗阻等并发症导致需要外科手术的几率高，而我国该病患者则多以轻、中度为主，并发症较少见，极少发展到需要外科手术[17]。同时，国外CD患者多累及小肠，以上消化道病变为主者多见，我国则以结肠型CD多见，一项回顾性研究显示，ASCA鉴别结肠型CD灵敏度和特异度分别下降至25%～44%、86%～95%[18]。同时，ASCA的表达为一种家族性免疫学性状[19-20]，其在有家族史克罗恩病患者中的检出率明显高于无家族史的所谓散发病例，而本研究入组的多为无家族史的散发CD患者;同时，CD患者中也有相当一部分病例为ASCA血清学阴性者，而人种的差异，亚洲人群中ASCA血清学阴性者占多数也可能导致这一研究结果。

因此，本研究以ASCA IgG、ASCA IgA在CD患者及对照组（UC患者及健康者）中的表达水平，采用ROC曲线重新寻找cutoff值，根据cutoff值重新计算两者的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值，结果显示，矫正截断点后ASCA IgG及ASCA IgA灵敏度及阴性预测值均有不同程度提高，分别为71.56%、78.79%及66.06%、85.71%，可作为筛查指标，即阳性可高度怀疑CD，但特异度及阳性预测值不足，不能用于鉴别诊断CD，将两者联合检测，结果显示：任意一个阳性时，灵敏度高达85.32%，两者均阳性时，特异度高达80%，提示ASCA对协助诊断CD有其临床意义，且不同亚型需同时检测。

但此研究尚有不足之处，该指标与CD疾病位置、活动度、药物治疗前后等方面的关系均未纳入研究，且病例集中在南方，仅有单一试剂盒，不排除不同试剂盒导致的不同研究结果，故需进一步在全国范围内进行多中心研究，纳入不同疾病分期患者，且需多种试剂盒同时检测，以便寻找适合中国CD患者的检测试剂盒及最佳截断值，以期更好地应用于临床。

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（收稿日期：2019-04-28）