微柱凝胶免疫反应技术在检测IgG抗A(B)效价中的应用

孙长杰,王晓宁,刘 冰,赵 霞，李凌波

(吉林大学第一医院，吉林 长春130021)

ABO新生儿溶血病(HDN)由IgG抗A(B)引起，且母亲为O型的最常见，检测母亲血清中有无IgG性质的抗体并测定其效价，可预测ABO HDN发生的可能性。传统检测方法常用间接抗球蛋白试验(即间接Coombs试验)，是一种可靠的检测IgG抗体的方法，但操作很繁琐且费时。微柱凝胶免疫反应技术是综合了分子筛技术、离心技术和免疫反应技术的一种新的检汕方法，且简便、时间短，结果明显，可较长时间保存。为了更好地研究和应用这一新技术，我们作检测结果准确性的研究。

1 材料和方法

1.1 材料

我院产科及生殖中心门诊怀孕的“O”型孕妇血清标本60份，(其中测IgG抗A 29例，IgG抗B 23例，抗AB 8例)。

(1)DianaGel Coombs 卡：由北京斑珀斯技术有限责任公司提供。(2)Diana稀释液2：含有稳定剂的低离子强度缓冲液，由北京斑珀斯技贸有限责任公司提供。(3)抗人球蛋白试剂(间接抗球蛋白法用)、2-Me(二巯基乙醇)由上海血液生物医药有限责任公司生产。(4)1%“A”型或“B”型红细胞悬液，长春博德生物技术有限责任公司生产的4%标准细胞用9%Nacl注射液稀释成1%的红细胞。(5)仪器：专用的Diana血型检测仪和Diana孵育器北京斑珀斯有限责任公司提供。

1.2 方法

(1)标本处理：破坏血清中IgG球蛋白，受检血清100 ml加2-Me应用液100 ml混匀，将试管口塞紧置37℃水浴1 h后取出。另取6支试管，用pH7.4PBS作倍比稀释，即每份标本血清分别稀释成1∶8，1∶16…1∶2048。(2)微柱凝胶技术方法：取DianaGel Coombs卡一张，加50 μl 1%“A”型或“B”型红细胞悬液于卡上各微孔管中，再加各个倍比稀释浓度的血清50 μl，置Diana孵育器15分钟，后置DianaFuge离心机离心。判读：“-”100%的红血球沉在微管的底部“+”80%人红血球沉在微管上端1/3之内。红细胞凝聚“+”的最高稀释度的例数即为IgG抗A(B)效价。(3)间接抗球蛋白法：按《全国临床检验操作规程》[1]操作。

1.3 统计学处理

所得数据采用χ2检验。

2 结果

60份“O”型孕妇血清标本同时用上述两种方法检测，测得的IgG抗A效价(n=60)、IgG抗B效价(n=60)分布分别见表1和表2。将效价分为正常(4-64)、升高(128-512)和极高(1024-2048)3个效价范围，经χ2检验分析，两种方法检测结果无显著性差异，结果见表3、表4。

表1 两种方法IgG抗A效价分布(n=60)

表2 两种方法IgG抗B效价分布(n=60)

表3 两种方法IgG抗A效价χ2检验分析

表4 两种方法IgG抗B效价χ2检验分析

3 讨论

微柱凝胶技术把免疫反应技术同凝胶技术很好地结合起来，用微粒过滤器来分离游离红细胞和凝聚红细胞。用已知抗原的红细胞与多价抗人球试剂反应来检测血清中的不完全抗体。即IgG致敏红细胞和微柱内的抗人球蛋白结合而使之被凝胶微粒间隙所阻隔，离心后红细胞不能到达微柱底部，而未被IgG所致敏的红细胞不与抗人球蛋白结合而从凝胶微粒间过，最后被离心到柱底。过量抗体如正常的血清免疫球蛋白，因渗透入凝胶的速度太慢而不发挥作用，因此，红细胞无需洗涤[2]。

临床上发生新生儿溶血病(HDN)的病因很多。在我国。ABO血型系统引起的HDN最为常见，但引起中等程度和严重的HDN最常见的原因是Rh血型系统的D、E抗原，其次是A和B抗原，特别是在ABO系统抗原所致HDN中母亲为O型最常见。近年来，母子血型不合引起的HDN已受到临床医师们的重视。

IgG抗A(B)由于分子量小，可由母体经胎盘进入胎儿。因此，ABO HDN的发病程度与母体内IgG抗A(B)的效价有一定的相关性。尤其O型人的IgG抗A(B)效价较A型人的IgG抗B或B型人的IgG抗A效价高[3]。据赵桐茂、张工梁的报导，初步认为当母体IgG抗A(B)效价大于64时，有可能使其ABO不配合的婴儿受害，且以IgG抗A(B)效价以128为引起HDN的最低界限[4]。由于正常的“O”型人的血清IgG抗A(B)也有一定的效价，在16-256之间[5]。连续测定对评价临床效果有重要意义[6]。因此笔者认为对“O”型孕妇只作一次IgG抗A(B)效价测定无临床意义，需作最少两次检测，才有参考价值。如果母体内IgG抗A(B)效价随着孕期增加而增长，则提示胎儿受害的可能性增大。