高危型HPV感染与宫颈癌前病变及宫颈癌的相关性研究

方 莉,韩 瑜,许 媛，陈 莹，郑 阳

(1.川北医学院附属医院 检验科，四川 南充637000；2.川北医学院 医学检验系，四川 南充637000)

宫颈癌严重威胁人类的健康，至今仍是全球女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，发病率仅次于乳腺癌，全球每年约有9%的女性新发癌症病例为宫颈癌，约有8%的女性癌症患者死于该病[1]。人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种具有高度宿主特异性噬上皮细胞的病毒，人类是其唯一宿主。目前已经发现了100多种HPV基因型，其中至少有40多种基因型主要侵袭生殖道。根据其导致的病变程度，可将其分为高危型(HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，73，82等)和低危型(HPV6，11，42，43，44，53，61等)[2]。据Tommasion M等人研究显示[3]：高危型人乳头瘤病毒持续侵袭宫颈上皮细胞是引起宫颈病变的必要条件，其中HPV16是最常见的型别。本研究通过分析高危型HPV-DNA在宫颈上皮内瘤变(CINI、CINII、CINIII)及宫颈癌中的分布情况，来探讨高危型HPV持续感染与宫颈癌的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集2015年6月至2016年3月来我院妇科就诊的313名宫颈病变患者的标本，患者年龄在22-79岁，平均年龄为40.15±8.95 岁 ，均有性生活史，均无相关手术史。按宫颈病变程度分为4组，其中CINI 66例、CINII 53例、CINIII 76例、宫颈癌118例。

1.2 实验方法

1.2.1宫颈脱落细胞采集 用宫颈取样器刷取宫颈病灶处脱落细胞，置于无菌玻璃管，密封送检。

1.2.2检验方法

检测型别：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82型。

检测仪器：SLAN-96P荧光定量PCR检测系统。

核酸提取：按高危型人乳头瘤病毒分型核酸测定试剂盒(上海之江生物科技股份有限公司)说明书操作要求进行HPV-DNA提取。

PCR反应体系见表1。

表1 PCR反应体系

PCR反应条件：94 ℃×2 min；93 ℃×10 sec→62 ℃×31 sec,循环40次；单点荧光检测在62 ℃。

结果判断：若待检样本Ct≤38,且扩增曲线呈典型的S型，则结果判断为阳性；若为非典型S型曲线，则判为阴性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行分析，数值变量资料使用“均数±标准差”来表示，采用单因素方差分析进行假设检验，检验水准P<0.05时，差异有统计学意义。

分类变量资料使用“率，构成比”来表示，采用卡方检验进行假设检验，检验水准P<0.05时，差异有统计学意义。

2 结果

2.1 高危型HPV的感染情况

将受检标本按宫颈病变程度分为4组，其中CINI组66例，CINⅡ组53例，CINⅢ组76例，宫颈癌组118例。各组阳性感染情况见表2。

表2 高危型HPV感染情况

由表2可知CINI组、CINⅡ组、CINⅢ组、宫颈癌组阳性感染率分别为16.67%，60.38%，69.74%，75.42%，χ2=65.77，P<0.01，差异有统计学意义。

2.2 宫颈病变程度与年龄的关系

按年龄区间将受检者分为21-40岁，41-60岁，61-80岁3组，各年龄组宫颈病变的阳性感染率情况见表3。

表3 宫颈病变的年龄分布情况

由表3可知 CINII,CINIII和宫颈癌组的感染高峰年龄均为41-60岁。根据统计学方法可知:CIN I组P>0.05，差异无统计学意义。CINII、CINIII和宫颈癌组P<0.01，差异有统计学意义。

2.3 宫颈病变患者高危型HPV亚型分布

由表4可知，CINI组共检出7种HPV高危型，分别为HPV16、18、35、39、52、56、58；癌前病变组(CINII-CINIII)和宫颈癌组共检出了12种HPV高危型别，分别为HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59；CINI组感染率较高的亚型为HPV16(4.55%)、HPV35(3.03%)、HPV58(3.03%),χ2=0.3,P>0.05，差异无统计学意义；癌前病变组感染率较高的亚型为HPV16(31.01%)、HPV58(14.73%)、HPV52(10.85%)，χ2=7.62，P<0.05，差异有统计学意义；宫颈癌组感染率高的亚型为HPV16(47.46%)、HPV18(16.95%)、HPV58(11.86%)、HPV52(5.93%)，χ2=74.16，P<0.05，差异有统计学意义。

表4 宫颈病变高危型HPV分布情况

3 讨论

3.1 HPV高危型别在宫颈病变中的感染情况

目前已有足够研究表明，高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)的持续性感染，是导致宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的主要因素[4]。

女性感染HPV 后，绝大多数(80%以上)靠机体免疫力在1-2 年内可自动清除， 只有极少数妇女最终会发展为子宫颈癌。由感染HR-HPV 发展到子宫颈浸润癌，通常需要8-15 年时间，期间要经过漫长的癌前病变过程[5]，完全可以通过筛查来早期发现和诊治宫颈癌。本实验主要通过分析宫颈病变各阶段高危型HPV感染率的情况，来探讨高危型HPV与宫颈病变的相关性。由上述结果可知宫颈癌的阳性感染率最高，达到75.42%。从CINI、癌前病变(CINⅡ、CINⅢ)到宫颈癌，随着宫颈病变的加重，阳性率依次递增。据刘金凤等人的调查发现[6]，中国相关文献Meta分析中调整后宫颈癌HPV感染率82.7%，相比本研究宫颈癌感染率较高。 HPV是最常见的宫颈癌致病因子，大多数的宫颈癌由其造成，其致病力的高低将宫颈癌划分为高危型和低危型两大类[7]。而本研究只讨论HPV高危型的阳性率，未涉及HPV低危型别的讨论。这可能是与相关文献数据存在出入的原因。

3.2 宫颈病变的年龄分布情况

近年宫颈癌的发病率呈上升且年轻化的趋势[8]本实验主要分析年龄因素对宫颈病变的阳性率的影响。由上述结果可知CINI组的检验水准P>0.05,差异无统计学意义，即年龄并不是CINI阳性率的影响因素。CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌的检验水准P<0.01,差异有统计学意义，感染阳性率与年龄有关，感染高峰年龄为41-60岁。分析原因，可能与该年龄段妇女性行为习惯和机体免疫功能等因素有关[9]。

3.3 宫颈病变患者HPV高危型的亚型分布情况

分析表4结果可知：CINI组数据差异无统计学意义，癌前病变组主要感染亚型为HPV16、58、52；宫颈癌组主要感染亚型为HPV16、18、58、52。范洁琳通过研究发现[10]：CINⅡ-CINⅢ患者高危型HPV感染率前三位依次是HPV16(50.94%),HPV58(18.87%),HPV52(13.21%)。与本研究结果基本相符。据乌恩奇等人研究显示[11]：2013年在我国四川地区的调查显示，宫颈癌患者中最主要的感染亚型为HPV16 (34.9%),HPV58 (8.3%),HPV 18(4.9%),HPV 52(2.8%)。与本实验研究结果基本符合，只是58型和18型的比例差别明显，可能与本实验中样本量数据过少有关。

通过研究分析可知：宫颈病变的发生与高危型HPV病毒的感染存在相关性。因此，高危型HPV病毒的筛查对于早期宫颈癌的防治具有重要的意义。