MYPT1通过RLC-NMHCIIA参与乳腺癌转移的调控

潘瑞金，杨 格，林佳慧，张杨贺,孙千惠，王医术，杨晓霞*

(1.沈阳医学院 基础医学院病理教研室，辽宁 沈阳110000；2.吉林大学 病理生物学教育部重点实验室，吉林 长春130021)

乳腺癌是全球范围内严重危害女性健康和生命的一种最常见恶性肿瘤，据统计每年全球约有49万人死于该病[1]，我国乳腺癌的发病率也呈逐年上升趋势。尽管在早期确诊的乳腺癌患者中只有5%-10%出现远距离转移，但原发乳腺癌患者在切除原发肿瘤及辅助放化疗治疗后仍有很高几率发生转移[2]。因此，寻找能够准确预测乳腺癌转移的生物标记物，将可能为临床上乳腺癌患者的治疗提供帮助。

细胞内细胞骨架的重新排列是肿瘤转移的一个关键步骤。非肌细胞肌球蛋白II(NMII)是细胞骨架的重要组成部分并与细胞运动密切相关，其由两个肌球蛋白重链和两对肌球蛋白轻链构成。有研究表明非肌细胞肌球蛋白重链IIA(NMHCIIA )在肿瘤转移中发挥重要作用[3，4]。肌球蛋白调节轻链(RLC)参与调节NMII的结构与功能，RLC可以被肌球蛋白磷酸酶的调控亚基MYPT1(Myosin phosphatase target subunit 1)去磷酸化从而功能受到抑制。因此，MYPT1-RLC-NMHCIIA途径可能在乳腺癌转移中发挥重要作用，探讨此途径与乳腺癌转移的关系将可能为预测乳腺癌转移提供新型生物标记物，为乳腺癌患者的治疗提供新的分子靶标。

1 材料和方法

1.1 标本来源

筛选收集沈阳医学院附属中心医院病理科2006年-2016年100例乳腺病例作为研究对象。年龄30-87之间。其中乳腺增生20例，乳腺纤维瘤20例，乳腺浸润性导管癌60例。

1.2 主要试剂

DAB显色试剂盒(武汉博士德公司)，免疫组化SP试剂盒(北京索莱宝公司)，复合消化酶(南京建成公司)，兔抗人MYPT1多克隆抗体(Abcam公司)，兔抗人RLC多克隆抗体(Abcam公司)，兔抗人NMHCIIA单克隆抗体(Abcam公司)。

1.3 实验方法

免疫组织化学按试剂盒说明书上要求操作，DAB显色，苏木精复染，树胶封片。

1.4 结果判定

组织细胞中出现棕黄色颗粒则判定为阳性表达，根据颜色深浅区分强阳性表达、弱阳性表达及阴性表达。

1.5 统计方法

使用SPSS 18.0 统计软件进行Spearman相关性分析。

2 结果

2.1 MYPT1、RLC及NMHCIIA在乳腺组织中的表达情况

通过免疫组织化学染色的方法分别在乳腺增生组织、乳腺纤维瘤组织及乳腺浸润性导管癌组织中检测MYPT1、RLC及NMHCIIA的表达情况。结果显示，在乳腺增生、乳腺纤维腺瘤内，MYPT1在腺管呈阳性表达，主要位于腺细胞的胞浆和胞膜。随着疾病恶性程度的增高，MYPT1的阳性表达逐渐减弱(图1)。在乳腺增生、乳腺纤维腺瘤内，RLC在腺管呈强弱不等的表达，在乳腺浸润性导管癌中RLC呈阳性表达，主要表达于癌细胞的胞浆中，间质也有表达(图2)。RLC在不同进展乳腺组织中表达情况没有显著趋势。在乳腺增生、乳腺纤维腺瘤内，NMHCIIA主要表达在腺细胞胞浆中；在乳腺浸润性导管癌中NMHCIIA呈阳性表达，主要表达于癌细胞的胞浆中，间质也有表达。随着疾病恶性程度的增高，NMHCIIA的阳性表达逐渐增强(图3)。具体结果见表1。

2.2 MYPT1-RLC-NMHCIIA信号与乳腺癌恶性程度及转移的关系

在乳腺增生组织、乳腺纤维瘤组织及乳腺浸润性导管癌组织中MYPT1的表达情况随乳腺癌恶性程度的增加逐渐减弱，而NMHCIIA的表达则随乳腺癌恶性程度的增加而逐渐增加。此结果表明MYPT1的表达水平与乳腺癌恶性程度呈负相关；而NMHCIIA的表达水平则与乳腺癌的恶性程度呈正相关。此外，根据我们收集的临床资料显示，具有淋巴结转移的病例(n=27)，其病理切片中MYPT1往往低表达(P<0.05)，而RLC和NMHCIIA则表现为高表达情况(P<0.05)。

图1 免疫组织化学染色观察MYPT1在乳腺组织中的

图2 免疫组织化学染色观察RLC在乳腺组织中的

图3 免疫组织化学染色观察NMHCIIA在乳腺组织中的

病变类型nMYPT1+阳性率(%)RLC+阳性率(%)NMHCIIA+阳性率(%)乳腺腺病171588.2423.5741.1乳腺腺瘤181688.9844.4527.7乳腺腺癌523567.32446.13363.5

3 讨论

我们的研究结果显示，恶性程度越高的乳腺癌样本中MYPT1的表达越低，此结果提示MYPT1在乳腺癌中可能发挥抗肿瘤作用。MYPT1是肌球蛋白磷酸酶的调控亚基，它可以催化肌球蛋白轻链的去磷酸化，进而参与调控细胞运动，如平滑肌的收缩[5-7]。细胞运动是肿瘤细胞侵袭及转移的重要条件，调控细胞运动的信号必然在乳腺癌转移中发挥重要作用。因此，MYPT1可能参与调控乳腺癌的侵袭及转移。但近年来关于MYPT1在肿瘤发生发展中作用的相关研究较少，而关于MYPT1抗肿瘤作用的具体机制尚不清楚。有研究表明，在前列腺癌中MYPT1可以抑制血管生成并可有效改善前列腺病人的不良预后[8]。MYPT1还可通过对RhoA磷酸化的抑制作用抑制胃癌细胞的增殖及转移活性[9]。目前尚未有研究证明MYPT1通过RLC-NMHCIIA途径参与乳腺癌转移的调控。

有研究表明，RLC是重要的肿瘤标记性分子。RLC的磷酸化在多种肿瘤的发生发展中发挥重要作用[10-14]，RLC受多种途径调节参与肿瘤增殖与转移的调控。NMHCIIA在肿瘤发生发展中的作用目前尚不明确，多项研究显示，NMHCIIA的表达及其功能可以促进多种类型肿瘤的进程[15-18]，但也有研究显示，在基因层面对编码NMHCIIA的基因myh9进行处理后，确定myh9可以作为一种抑癌基因发挥作用[19]。

我们的研究结果显示，RLC和NMHCIIA在恶性程度较高的乳腺浸润性导管癌中均呈强阳性表达，表明其与乳腺癌的发展密切相关。此外，MYPT1-RLC-NMHCIIA的表达情况与乳腺癌的淋巴结转移情况呈显著的相关性，据此我们推测MYPT1-RLC-NMHCIIA途径可能通过调节肿瘤细胞的运动参与乳腺癌转移调控，即在具有高转移潜能的乳腺癌组织中，MYPT1表达受到抑制，导致RLC磷酸化增加，促进NMHCIIA的磷酸化，从而加强肿瘤细胞的运动能力，促进转移。综上，MYPT1-RLC-NMHCIIA信号可能是参与乳腺癌转移的重要信号途径，此途径中各信号分子表达水平的变化可能与乳腺癌的转移进程密切相关。

基于上述分析，我们猜测以细胞运动调控信号分子MYPT1-RLC-NMHCIIA为靶点，更为深入的探讨其在乳腺癌转移中的作用将有望为临床上乳腺癌患者的治疗提供帮助。