加味大柴胡汤对急性胰腺炎大鼠的炎症抑制作用*

王志祥 黄 杨 陶相宜 唐 彬

（云南省中医医院，云南 昆明 650021）

急性胰腺炎（AP）是胰腺的急性炎症和细胞损害过程，在不同程度上波及邻近组织和其他脏器系统［1］。AP多以腹满痛、恶心呕吐、发热、大便异常等症状为主要临床表现，当属中医学“脾心痛”“结胸”等范畴。对于非手术必要的AP的治疗，目前所提倡中西医结合的方法应用较为广泛。陈乔林教授是第2批、第6批全国老中医药专家学术经验继承工作指导老师，云南省首届国医名师，云南省名中医。陈老根据多年的临证经验，认为AP的病位病机特点仍不离少阳阳明，治疗上以疏泄少阳、清泄阳明为主，方药选用以大柴胡汤为基础方，自创加味大柴胡汤治疗AP。笔者作为陈老“师带徒”的弟子，在应用中亦发现本方临床疗效确切。本研究即是通过动物实验来验证本方对AP病理组织和炎症因子的影响，从而探索本方的现代药理作用机制。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级健康雄性SD大鼠90只，体质量200～250 g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2014-0004，由云南省中医医院实验中心SPF实验室饲养。

1.2 仪器与试剂 包括牛磺胆酸钠和白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）检测试剂盒，其中牛磺胆酸钠购自Sigma公司；IL-6、IL-8和TNF-α检测试剂盒购自武汉博士德生物有限公司。实验药物加味大柴胡汤组成：柴胡25 g，黄芩15 g，法半夏15 g，赤芍60 g，枳实15 g，大黄15 g（后下），莪术 15 g，蒲公英 30 g，金银花 20 g，天台乌药15 g，莱菔子15 g，牡蛎30 g。药材采购于云南省中医医院中药房，按原方比例水煎后加热浓缩成含生药3 g/mL，并放置于4℃冰箱保存备用，动物给药前以蒸馏水倍比稀释使用。

1.3 分组与造模 采用随机数字表法将90只实验大鼠分为3组，即假手术组、AP组和治疗组各30只；保证各组大鼠年龄、体质量及饲养条件组间差异无统计学意义（P＞0.05）。90只大鼠适应性喂养1周。1周后除正常喂养外，按以下方法开始试验：治疗组给予加味大柴胡汤灌胃，每12小时1次；AP组和假手术组予等量0.9%氯化钠注射液灌胃，每12小时1次。1周后开始造模。大鼠造模前禁食12 h，各组大鼠采用1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，取正中切口入腹，找到十二指肠以及十二指肠系膜内的胰胆管，AP模型组及中药治疗组夹闭肝胆管之后逆行穿刺胰胆管，注入5%牛磺胆酸钠液，注射量为0.1 mL/100 g体质量，持续时间为50 s，观察胰腺组织变化情况，约5 min后胰腺出现充血、水肿以及片状出血，表明造模成功，然后关腹。假手术组仅开腹、翻动肠管，不行其他操作。在3组模型制备完成后，治疗组每12小时给予加味大柴胡汤灌胃；AP组和假手术组予等量0.9%氯化钠注射液灌胃。

1.4 标本采集与检测 经过以上造模处理并继续喂养24 h后，处死所有实验大鼠，进行病理切片和血清样本采集。1）病理切片采集：快速切取实验大鼠胰腺组织，进行固定、包埋及HE染色制片，每张切片取10个高倍视野镜下观察并照片。采用Kusske法进行病理评分，对水肿、炎症和出血以及坏死的程度按0～4分进行评估，计算总分。病理组织由云南省中医医院病理医师读片。2）血清样本采集和炎症指标检测方法：从心脏取血4～6 mL，以 1 200 r/min离心7 min，离心取血清1～1.5 mL，采取ELISA法进行检测IL-6、IL-8和TNF-α水平，严格按照试剂盒说明进行操作。

1.5 统计学处理 计量资料以（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组腺组织切片比较 见图1。组织病理切片显示，假手术组大鼠胰腺病理切片组织胰腺腺泡结构正常，排列紧密，无间质水肿、出血和炎性细胞浸润等病理改变；AP组及治疗组出现不同程度间质水肿，胰腺细胞的出血坏死，并伴有炎性细胞浸润，造模成功。比较AP组、治疗组的胰腺组织，可见治疗组胰腺炎症程度较AP组明显减轻，出血坏死组织明显减少，间质水肿明显减轻。假手术组胰腺组织病理评分为0分，AP组（11.35±2.23）分，治疗组（7.42±1.71）分，各组胰腺组织病理评分差异具有统计学意义（P＜0.05）。

图1 各组腺组织切片比较（HE染色，200倍）

2.2 各组大鼠IL-6、IL-8和TNF-α水平比较 见表2。炎症因子水平比较，实验后可见AP组和治疗组的炎症因子水平均明显高于假手术组（P＜0.05），但治疗后的治疗组的炎症因子水平较AP组均有明显下降（P＜0.05）。

表2 各组大鼠 IL-6、IL-8和TNF-α 水平比较（pg/mL，x±s）

3 讨 论

AP是由于胰酶的原位激活导致胰腺及周围组织急性化学性反应。现代医学认为，作为一个多系统，甚至可累及多个远处器官损害的疾病，其发病机制是复杂的。虽然目前对于AP发生的确切机制尚不明确，但作为可以引起全身炎症反应和炎症-抗炎症因子失衡的疾病，炎症因子水平及表达无疑在疾病的发生和进展过程中起到了极其重要的作用。有报道称，AP早期时，TNF-α、IL-6的水平就可以明显升高，而且与胰腺炎严重性有相关性［2-3］，所以TNF-α和IL-6的含量变化可作为AP早期诊断指标及预后评估指标。TNF-α是AP的起动因子，在发病过程中起到“扳机”样作用［4］。在AP中，TNF-α升高的程度与胰腺损伤及炎症程度呈正相关，并在AP发病及全身并发症发生过程中起着重要作用［5］，TNF-α能够诱发和调控多种炎性细胞因子如IL-1、IL-6、IL-8等的释放，引起炎症瀑布样级联反应，加重对机体的损伤［6-7］。 有研究还发现［8］，IL-6抗体可诱导AP小鼠胰腺腺泡凋亡，减轻胰腺炎的严重程度。IL-8可促使AP早期中性粒细胞活化及其弹性蛋白酶的释放，加重炎症反应［1］。 TNF-α、IL-6、IL-8亦与AP的肠黏膜屏障功能的衰减有直接相关性［9］。

目前中医对本病病机的认识主要是实邪阻滞，胃肠功能紊乱，升降失调；治疗多采用泻下、清热、理气、活血等治法为主。治法当中以通里攻下法的研究最多，研究表明，通里攻下法可使胃肠动力恢复，降低肠腔内压，增加胃肠道供血，改善组织微循环，保护肠屏障和氧自由基的损伤，同时还可抑制菌群失调，保持循环，增强肠黏膜免疫力，防止菌群和毒素的移位［10］。

陈乔林教授对于AP的发病机制有独到见解，根据该病的主要症状来看，其腹痛，胸胁疼痛，呕而发热，大便不通的常见临床表现符合中医“少阳阳明合病”的病位特征；由于本病多由饮食不节，嗜酒好饮引起，且多见于体型肥胖，痰湿壅盛之人，故其病机多为湿热之邪壅塞少阳，相火妄行，木胜乘土，邪热互结胃肠，阳明热盛，从而出现腑实便秘，腹痛呕吐，发热等临床表现；病至后期，甚至出现邪热迫血妄行，邪实积聚的表现。在治疗上陈教授主张以疏泄少阳、清泄阳明为主，并辅以燥湿解毒、活血软坚，在此理论基础上自创加味大柴胡汤。

大柴胡汤出自《伤寒论》，为治疗少阳阳明合病的主方，研究表明该方能够松弛括约肌张力，利胆，抑制胃酸过多分泌，保护肝细胞，降低血脂水平，还可以降低毛细血管渗透性［11-13］；促进肠蠕动，解除肠麻痹，促进肠功能恢复，抑制炎症因子IL-6、TNF-α的释放和对正常组织的浸润［14］。加味大柴胡汤药味组成是柴胡25 g，黄芩 15 g，法半夏 15 g，赤芍 60 g，枳实 15 g，大黄 15 g（后下），莪术 15 g，蒲公英 30 g，金银花 20 g，天台乌药15 g，莱菔子15 g，牡蛎30 g。此方仍以大柴胡汤为主方，和解少阳，通下里实，正切AP“少阳阳明合病”的病机。陈老在大柴胡汤基础上加用蒲公英、金银花以加强清热解毒的作用，以赤芍、莪术活血通络，天台乌药、莱菔子行气通腑止痛，牡蛎软坚散结。柴胡为少阳病要药，在《伤寒论》中大柴胡汤的用量为“八两”，陈教授认为柴胡的用量亦在25～30 g之间为宜，否则难以起到和解少阳的功效。赤芍具有清热凉血、活血祛瘀的功效，现代药理研究表明其具有抑制血小板聚集，改善红细胞通透性、抗凝、抗血栓等作用［15］，从而起到抗炎抗凝的药理作用。蒲公英具有清热解毒、消痈散结、利尿通淋的功效。现代药理研究证明其不但具有抗病原微生物的作用，而且具有保肝利胆、免疫调节、抗炎等作用［16］。

本实验研究表明，加味大柴胡汤在改善大鼠的胰腺组织炎症程度，抑制胰腺组织水肿，改善胰腺细胞出血，及抑制IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子方面作用确切。