实时荧光定量PCR在儿童肺炎支原体感染中的临床价值分析

范 新

（辽宁省丹东市第一医院检验科，辽宁 丹东118000）

儿童肺炎是儿科常见的疾病，是导致3岁以内婴幼儿死亡的常见原因[1]，支原体感染肺炎是肺炎的常见类型，占全部肺炎的20%[2]。本研究采用实时荧光定量PCR检测儿童肺炎支原体DNA，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2013年4月至2016年6月期间我院收治的382例肺炎患儿，按《诸福棠实用儿科学进行诊断，其中男201例，女181例；0～4岁77例，4～7岁121例，7～10岁占107例，10～13岁占77例；血清标本144份，支气管灌洗液标本95份，痰液标本74份，胸腔积液标本69份。

1.2 方法：采用实时荧光定量PCR检测肺炎支原体DNA，仪器为BI-7500型全自动荧光定量PCR仪及配套试剂。向DNA扩增反应管中加入样本上清液2 μL，离心处理后置于样品槽中进行扩增，扩增条件：50℃预热2 min，94℃ 12 s预变性 1个循环，将此作为荧光本底信号，然后94℃ 5 s变性，60℃ 30 s退火及延伸，40个循环后，于55℃采集荧光。PCR的结果用Ct值表示，绘制曲线图，当Ct值＜30，且增长曲线呈S型判为阳性，否则为阴性。

1.3 统计学方法：采用SPSS19.0统计学软件进行统计分析，进行t或卡方检验，检验水准α=0.05，P＜0.05具有统计学差异。

2 结 果

382例患儿肺炎支原体DNA阳性为179例（46.9%），其中男患儿占96例（53.6%），女患儿占83例（46.4%），差异无显著性（P＞0.05）；0～4岁占28例（15.6%），4～7岁占58例（32.4%），7～10岁占57例（31.8%），10～13岁占66例（36.9%），差异具有显著性（P＜0.05）。

血清标本肺炎支原体DNA阳性21份（14.6%），支气管灌洗液标本肺炎支原体DNA阳性90份（94.7%），痰液标本肺炎支原体DNA阳性51份（68.9%），胸腔积液标本肺炎支原体DNA阳性17份（24.6%），差异具有显著性（P＜0.05）。

3 讨 论

肺炎是儿科常见呼吸道疾病，尤以2岁以下的婴幼儿最为多见，该病易反复发作以及引起一些并发症，严重影响小儿的身体健康及生长发育，据了解，小儿肺炎是导致3岁以内小儿死亡的重要原因。肺炎支原体感染是肺炎的常见病因，资料显示，在全部儿童社区获得性肺炎中，由肺炎支原体感染导致的肺炎超过40%[3]。多见于儿童和青少年，除了会引起发热、咳嗽、气喘等症状，还可能引起肺坏死及一系列肺外并发症，如心肌炎、脑膜炎等。

肺炎支原体是一种无细胞壁的超滤过性病原微生物，属于原核细胞中最小的微生物，常常引起性呼吸道感染和原发性非典型肺炎。资料显示，每隔3～5年，在儿童和青少年中就会流行一次肺炎支原体感染[4]。本研究结果显示，382例患儿中有179例检出肺炎支原体DNA阳性，占到46.9%，其中男患儿占53.6%，女患儿46.4%，男女无明显差异，这与其他报道相符[5]。肺炎支原体感染可发生各个年龄阶段的儿童，本研究结果显示，0～4岁的阳性率为5.6%，4～7岁的阳性率为32.4%，7～10岁的阳性率为31.8%，10～13岁的阳性率为36.9%，发现4岁及以上的儿童阳性率明显高于4岁内的儿童，可能与4岁以上的儿童开始进行学校学习，社交活动增加，易感染性增加，加之身体素质低下，所以容易发生肺炎支原体感染。在所有标本中，血清标本肺炎支原体DNA阳性率最低，为14.6%，支气管灌洗液标本的阳性率最高，为94.7%，而痰液标本的阳性率为68.9%，胸腔积液标本的阳性率为24.6%。提示用支气管灌洗液标本进行肺炎支原体的检测最为可靠。

综上所述，采用实时荧光定量PCR检测儿童肺炎支原体感染实用、可行，其中4岁及以上患儿肺炎支原体DNA阳性的检出率较高，采用支气管灌洗液标本最为可靠，血清标本的检出率最低。