精子DNA碎片指数对体外受精结局的预测价值*

熊 露

(武汉市第一医院生殖医学科，湖北 武汉 430033)

受精失败的现象比较常见，导致受精失败的原因除了卵子的相关因素之外，精子的因素也是其中另一个重要原因。精液常规对精子情况的评估并不完全准确，近年来针对精子DNA碎片的研究受到临床医学界的广泛关注。伴随工业化进程不断加速以及环境污染程度的加深，人体与化学物质的频繁接触可能导致男性精子受到损伤，从而影响受精成功率[1]。本次研究将针对精子DNA指数对于体外受精成功率的预测价值进行探讨。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择我院2016年1月至2018年2月期间行长方案超排卵治疗联合IVF助孕治疗的106对不孕不育夫妻作为本次的研究样本。106对不孕不育夫妇均排除了女方因素，即研究夫妇满足以下条件：(1)女方年龄≤40岁；(2)FSH≤15 mIU/ml；(3)取卵≥5个；(4)内膜厚度≥7 mm。针对106名男方精液实施DFI检测。依据结果将男方分为DFI高组(DFI≥30%)与DFI低组(DFI<30%)。DFI高组：共计32对夫妻，男性年龄24～43岁，平均(31.6±0.3)；女性年龄21～39岁，平均(27.3±0.2)岁；取卵个数5～11个，平均(7.3±1.2)个；内膜厚度7.2～9.3 mm，平均(8.1±0.6)mm。DFI低组：共计74对夫妻，男性年龄23～42岁，平均(30.8±0.4)；女性年龄23～40岁，平均(26.5±0.6)岁；取卵个数6～12个，平均(8.2±1.4)个；内膜厚度7.0～9.36 mm，平均(8.3±0.4)mm。两组夫妻在取卵个数、夫妻年龄以及内膜厚度等一般常规资料的比较中差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2超排方法 受试者均采取常规的长方案，在其月经周期的第20 d开始行肌内注射醋酸曲普瑞林，1.00～1.25 mg/次。于接受注射之后14 d对其血清进行检测，检测指标包括促卵泡激素和黄体生成素水平。当达到降调标准以后，给予药物丽申宝，112～225 U,连续进行肌内注射10 d左右，直至其主卵泡的直径增加至18 mm。之后给予HCG的肌内注射，8000～10000 U，于38 h后进行取卵[2]。

1.3精液的采集与处理 男方需禁欲4～5 d，在女性取卵的当天通过手淫法进行精液采集。采集后立即将其置于37 ℃的平台中，当精液彻底液化之后开始实施分析。应用密度梯度离心法联合上游法针对患者精液实时处理。在处理成功后，将精液的悬液以精子染色质扩散法进行DFI检测。

1.4受精与胚胎移植 在女性取卵的当天实施常规IVf。在受精之后的18 h后开始观察，其中2PN是正常受精的胚胎，而OPN、IPN≥3PN均属于异常受精的胚胎。在成功受精之后的48 h对胚胎的情况进行观察，其中卵裂球数量为7～8个，细胞的大小较为均匀,未出现空泡，碎片率≤20%时，可以判定属于优质胚胎。再依据患者实际情况等适当的选择1～3枚胚胎实施移植，在成功移植之后的14 d对其血清的β-HCG水平实施测定，以此来确定生化妊娠与否，在移植之后的28 d对于宫腔内妊娠囊进行确诊检查。

2 结 果

经实验检测DFI高组中包括17个取卵周期以及15个移植周期，而DFI低组中包括89个取卵周期以及82个移植周期。两组患者的可利用胚胎率、优质胚胎移植率以及优质胚胎形成率等指标相比差异并不显著，并无统计学意义(P>0.05)。其中DFI低组患者的受精率、临床妊娠率以及正常受精率等均显著高于DFI高组患者。两组间的差异显著，具有统计学意义(P<0.05)。

表1 两组男性相关指标对比[n(%)]

3 讨 论

有调查结果显示在全世界的育龄夫妇当中约有15%的夫妇存在不孕不育的问题，而其中大约8～20%的原因来自于男性，而有25%左右的原因来自于夫妻双方[3]。男性精子DNA的完整性将对精子的有效受精能力产生影响。当精子DNA完整性较差时将影响受精之后原核形成能力。同时这也是引起女性妊娠后流产、子女出现先天性畸形以及遗传性疾病等不良结局的重要原因。而采取辅助生殖技术帮助患者受孕时，男性精子DFI案是影响其助孕成功率的主要因素之一。通过实施精子DNA完整性测试可对不孕不育患者的精子质量实施有效的评估。有研究结果显示精子DNA碎片可在辅助生殖领域当中发挥良好的预测价值。而精液的质量直接影响着女性受孕成功率和胎儿的质量等结局。而不孕症患者其精子的DNA损伤程度则明显的高于生育男子[4]。

有临床研究者认为男性精子DNA的损伤程度同体外受精的受孕率以及胚胎质量等均呈现明显的负相关关系[5]。通过应用精子DNA碎片能够有效预测IVF成功率。也有学者发现了男性精子DNA的断裂率同受精率之间呈显著的负相关关系，并且胚胎的质量同精子的DNA损伤程度之间密切相关，但是认为临床妊娠率和分娩率等均与精子DNA的损伤程度之间无明显关联性[6]。有研究结果显示男性精子遗传物质遭受损伤之后，可能对蛋白转入及合成等产生一定影响，因而会影响到顶体酶原生成的过程，因此也将影响顶体酶原生成[7]。由于某类酶原激活物质受到精子遗传物质破坏的影响，顶体酶并未被有效激活，活性降低对受精率产生影响。因此推断精子DNA的损伤是引发受精失败的主要原因。在本次研究结果中，研究对象的优质胚胎形成率优质胚胎移植率以及可用胚胎率等比较中，两组之间的差异并不显著(P>0.05)。分析其中原因可能是受助者在前阶段的受精过程当中已经自发性的将DNA受损较为严重的精子产生了自然淘汰效应，而受损较为轻的精子在其受精之后，卵母细胞可给予其有效的DNA修复，因此两组患者的临床妊娠率之间差异较大(P<0.05)。

现阶段在临床当中，针对精子的DNA是否发生损伤进行检测的方式主要包括两种，分别是直接检测法和间接检测法。其中直接检测法是将探针同男性精子DNA出现损伤的部位直接进行结合之后，并针对精子DNA出现断裂处实施的直接检测。而间接检测法则是利用了碎片DNA具有易变性的特点，基于该特点的、基础上对男性精子DNA变形易感性进行的检测。在精子染色质结构分析检测法(SCSA)中是将流式细胞技术作为检测基础实施的检测，该检测方式中能够测定的样本量相对较大，因此其测结果也相对比较稳定，也使得此测定结果也更加可靠，然而该检测方式的成本相对更高，限制了该检测方式的临床运用，因此临床普及度相对较低。因而本次研究中采取了精子染色质扩散实验检测法(SCD)，此检测方式的结果与SCSA检测法具有较强的相关性，并且其检测的成本较低，检测耗时也相对较短，该检测方式更具优势。本次研究结果也提示男性精子的DFI检测结果可以作为胚胎移植妊娠结局的预测标准。通过本次研究结果可分析得知，精子的DNA受损将对IVF过程中的受精率以及正常受精率等产生一定影响。精子的DNA受损同胚胎质量之间并无显著关系，但其作为预测IVF胚胎移植妊娠结局的指标时，精子DNA碎片可以作为评估男性生育能力的普补充指标且具有重要的临床应用价值。

综上所述，精子的DFI同胚胎的质量并无显著关系，但可IVF受精率以及临床妊娠率产生影响，通过开展精子DFI检测能够分析精液质量，同时可以对体外受精的结局实施有效的预测。