清热祛浊胶囊的质量标准研究

杨美娜 王世信

【摘 要】目的：完善清热祛浊胶囊的质量控制标准。方法：用薄层色谱法对处方中的黄连、大黄、枳实进行定性鉴别；用高效液相法对盐酸小檗碱进行含量测定。结果：薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰；含量测定线性良好，回收率试验符合《中国药典》2015版四部规定。结论：定性、定量测定方法准确度高、专属性强、重现性好，可对制剂质量进行有效控制。

【关键词】清热祛浊胶囊；盐酸小檗碱；高效液相；质量标准

清热祛浊胶囊是由我院经典验方发展而来的中药复方制剂，在临床上用于肥胖型2型糖尿病疗效确切，但由于目前缺乏全面的质量控制方法。为了确保制剂安全有效，稳定可控，本试验利用高效液相色谱法对该制剂进行含量测定以及质量标准的研究。

1 薄层色谱鉴别

1.1 黄连的薄层色谱鉴别

取清热祛浊胶囊及阴性对照品内容物各4g，精密称定，加甲醇40ml，80℃水浴回流提取15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，制成0.5mg/1ml的甲醇溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述五种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液（12：6：3：3：1）为展开剂，置氨蒸气中饱和15分钟，展开，展距15cm，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。经过薄层色谱鉴别，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。重现性良好，阴性无干扰。

1.2大黄的薄层色谱鉴别

取清热祛浊胶囊及阴性对照品内容物2g，加甲醇40ml，超声提取20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液10ml、氯仿10ml加热回流提取30分钟，放冷，滤过，滤液用氯仿萃取2次（10、10ml），合并氯仿液，挥干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液及阴性对照品溶液。另取大黄酚、大黄素对照品，加氯仿制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述各供试品溶液及阴性对照品溶液各5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纖维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，预饱和30分钟，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂[1]，展开，展距9cm，取出，晾干，氨熏后日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。重现性良好，阴性无干扰。

1.3枳实的薄层色谱鉴别

取清热祛浊胶囊及阴性对照品内容物各4g，加石油醚（30～60℃）20ml，超声处理15分钟，静置后弃去醚层，同法再提取一次，药渣挥干，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液加0.3g活性炭水浴回流10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇4ml使溶解，作为供试品溶液及阴性对照品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇适量制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述供试品溶液及阴性对照品溶液各5μl、橙皮苷对照品溶液25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，预饱和30分钟，以乙酸乙酯-甲醇-水（100：17：13）为展开剂[2]，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，放置2小时后，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。重现性良好，阴性无干扰。

2 高效液相法测定盐酸小檗碱的含量

2.1 供试品溶液及对照品溶液的制备

按照1.1项下做成供试品溶液及对照品溶液。

2.2色谱条件

色谱柱：依利特Hypersil ODS2 C18（250mm×4.6mm，5um）

流动相：乙腈：0.05mol/L磷酸二氢钾（磷酸调pH=3）=30：70

柱温：25℃，流速：1ml/min，波长345nm

2.3线性关系考察

分别取对照品溶液1 mL，2 mL，3 mL，4 mL，5 mL，6 mL，置1OmL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀配制成浓度分别为30μg/mL、60μg/mL、90μg/mL、120μg/mL、150μg/mL、180μg/mL的溶液，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，测定其峰面积，以对照品进样量（μg）（x）为横坐标，峰面积积分值（y）为纵坐标，求得回归方程为：Y=71249X+84810，r=0.9995在2.5-50μg范围内线性关系良好。

2.4精密度试验

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，测定6次，记录峰面积，计算相对标准偏差。结果显示盐酸小檗碱对照品峰面积平均值为1595571.443，RSD为0.16%。表明仪器精密度良好。

2.5稳定性试验

精密吸取对照品溶液10μL和供试品溶液各10μL，于Oh、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，记录峰面积，计算相对标准偏差。结果显示，盐酸小檗碱对照品在24 h内峰面积稳定，RSD为0.16%。

2.6重现性实验

精密称取清热祛浊胶囊内容物，按1.1项下操作制备六份样品供试品溶液，分别进行测定。测得其浓度的RSD值为0.10%（n=6），结果表明，该方法的重现性良好。

2.7加样回收试验

精密称取清热祛浊胶囊内容物6份，精密加入一定量的盐酸小檗碱标准品溶液，按1.1项下操作制成供试品溶液，在上述色谱条件下进行HPLC分析。采用加样回收率试验，取同一批样品设高、中、低三个浓度，每个浓度平行3份，各浓度水平加入对照品的量与所取供试品含量之比分别为1：1.5、1：1、1：0.5。按“1.1”项下方法制备，测定峰面积，计算得平均回收率为99.58%，RSD为1.17%，表明该方法准确可靠。

清热祛浊胶囊主要用于肥胖型2型糖尿病，“胖人多湿，湿则有瘀，瘀而化热”。中医用药治病采用辨证论治，因此清热去浊类的药物被常用于糖尿病的治疗。该药中黄连作为君药主清热燥湿之功，且通过现代研究得到业界的广泛认可[3]。

通过薄层色谱法对方中药材定性，用高效液相色谱法对清热祛浊胶囊中盐酸小檗碱的含量的测定，制订出本制剂的质量标准，方法稳定，精密度高，重现性好，可作为该制剂质量控制方法。

参考文献

[1]张守尧，周本杰，汪艳.补阳还五丹的薄层色谱鉴别，时珍国医国药，2001，12（2），128

[2]贺江萍，杨天坤.薄层扫描法测定保和散中橙皮苷的含量，中成药，1999，21（6），290

[3]李涛. 中药治疗2型糖尿病效果的临床观察[J].中国医药指南. 1671-8194（2013）02-0275-02

作者简介

杨美娜，女，1984年生，主管中药师，执业中药师， 2008年毕业于河北医科大学中医学院（现河北中医学院）。现工作于河北省沧州中西医结合医院中药药学部，从事中药调剂和中药鉴别工作。