香芪生乳合剂质量标准研究

2017-01-07黄懿潘涛田霞

中国当代医药 2016年30期

黄懿++++++潘涛+++++++田霞++++++肖作奇

[摘要]目的建立香芪生乳合剂的质量标准。方法采用薄层色谱法（TLC）对香芪生乳合剂中主要药味进行薄层色谱定性鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）测定制剂中芍药苷的含量。结果 TLC可对制剂中当归、川芎、白芍、木香、黄芪等药材进行鉴别，斑点清晰，方法简单易行，专属性好。HPLC检测结果显示，芍药苷最佳检测波长为231 nm，21.1～421.5 μg/ml范围内线性关系良好，平均回收率为98.6%，RSD为1.7%。结论该研究方法简单、准确、重复性好、专属性强，可用于香芪生乳合剂的质量控制。

[关键词]香芪生乳合剂；芍药苷；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法

[中图分类号] R943 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）10（c）-0008-05

[Abstract]Objective To establish the quality standard of Xiangqi Shengru Mixture.Methods Identification of main herbal medicines in Xiangqi Shengru Mixture were performed by TLC.The main effective component of paeoniflorin was determined by HPLC.Results Identification of Angelicae Sinensis Radix，Chuanxiong Rhizoma， Radix Paeoniae Alba，Aucklandiae Radix and Astragali Radix and so on was established by TLC.The method was simple，the spots were clear with highly specific attribute.HPLC detection results showed that the best detection wavelength was 231 nm，the linear range of the paeoniflorin was 21.1～421.5 μg/ml，the range of the spotting recovery rate was 98.6%，and RSD was 1.7%.Conclusion The method can be used for the quality control of Xiangqi Shengru Mixture，and it is simple，accurate with good repeatability and specificity.

[Key words]Xiangqi Shengru Mixture；Paeoniflorin；Quality standard；TLC；HPLC

香芪生乳合剂是由白芍、当归、通草、川芎、木香、黄芪等12味药材制成的中药复方制剂，有益气养血、通经下乳的作用，用于产后气血亏损，乳汁不足。方中白芍、当归养血调经、补血和血；川芎、木香行气、止痛，黄芪益气、固脱，诸药合用起到益气养血、通经下乳的作用。该制剂为湖南省妇幼保健院医院制剂，年产值200余万元，临床疗效确切。为更好地控制该制剂质量，参照文献报道相关研究方法[1-7]，本研究采用薄层色谱法（TLC）建立当归、川芎、白芍、木香、黄芪等药材的定性鉴别方法；采用高效液相色谱法（HPLC）建立处方中主要有效成分芍药苷的含量测定方法。

1材料与方法

1.1仪器与试药

电子分析天平（德国，Mettler Toledo XS205型，精度为0.1 mg），超声清洗器（上海科导，HS-2060），高效液相色谱仪（日本岛津，LC-20A型），二极管阵列检测器（日本岛津，SPD-M20A），柱温箱（日本岛津，CTO-10AS）。

0.22 μm微孔滤膜（美国，密理博），薄层层析硅胶（中国青岛海洋化工集团公司），水（娃哈哈纯净水），乙腈（美国，Tedia，色谱纯），其他常用试剂均为分析纯。对照品及对照药材均由中国药品生物制品检定所提供，详细情况如下：当归对照药材（批号：120927～201014，供鉴别用），川芎对照药材（批号：120918～200809，供鉴别用），芍药苷对照品（批号：110736～200833，供含量测定用），木香对照药材（批号：120921～200607，供鉴别用），去氢木香内酯对照品（批号：111525～201008，供含量测定用），黄芪甲苷对照品（批号：110781～200613，供含量测定用）。香芪生乳合剂由湖南省妇幼保健院药学部制剂室提供样品（批号：150828， 151210）。

1.2当归、川芎的鉴别

取香芪生乳合剂（批号：150828，151210）20 ml，每次用乙酸乙酯20 ml振摇提取2次，过滤，取滤液蒸干，加乙酸乙酯1.0 ml溶解，即得供试品溶液。另分取当归对照药材0.5 g和川芎对照药材0.5 g，分别加20 ml乙酸乙酯，超声20 min，过滤，取滤液蒸干，加乙酸乙酯1.0 ml溶解，即得对照药材溶液。阴性对照溶液的制备：按处方称取除当归和川芎的其他药材，制成阴性对照样品。按《中国药典》2015年版TLC试验[8]，取上述四种溶液各10 μl，点于薄层板上，展开剂：环己烷∶乙酸乙酯（9∶1），展开10 cm，取出，晾干，置365 nm紫外光灯下检视，拍照记录。

1.3白芍的鉴别

取香芪生乳合剂（批号：150828，151210）50 ml，用30 ml水饱和的正丁醇振摇提取2次，过滤，取滤液，用15 ml氨试液洗涤2次，弃去洗液，再用以20 ml正丁醇饱和的水洗涤2次，弃去洗液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1.0 ml溶解，即得供试品溶液。另取称取芍药苷对照品0.5 mg，加甲醇1.0 ml溶解，即得对照品溶液。阴性对照溶液的制备：按处方取除白芍的其他药材，制成缺白芍的阴性。按《中国药典》2015年版TLC试验[8]，吸取上述三种溶液各10 μl，点于薄层板上，展开剂：三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸（40∶5∶10∶0.2），展开10 cm，取出晾干，喷5%香草醛硫酸溶液显色，105℃加热至斑点清晰，拍照记录。

1.4木香的鉴别

取香芪生乳合剂（批号：150828，151210）50 ml，30 ml乙酸乙酯振摇提取2次，过滤取乙酸乙酯液，水浴挥干，残渣加乙酸乙酯1.0 ml 溶解，即得供试品溶液。另称取木香对照药材0.5 g，加20 ml乙酸乙酯，超声20 min，滤过取滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1.0 ml 溶解，即得对照药材溶液。另取去氢木香内酯对照品，加乙酸乙酯制成每毫升含0.5 mg的溶液，即得对照品溶液。阴性对照溶液的制备：按处方称取除木香的其他药材，制成缺木香的阴性。按《中国药典》2015年版TLC试验[8]，吸取上述三种溶液各10 μl，点于薄层板上，展开剂：环己烷∶丙酮（10∶3），展开10 cm，取出晾干，喷5%香草醛硫酸溶液显色，105℃加热至斑点显色清晰，拍照记录。

1.5黄芪的鉴别

称取黄芪甲苷对照品0.5 mg，加甲醇1.0 ml溶解，即得对照品溶液。阴性对照溶液的制备：按处方称取除黄芪的其他药材，制成缺黄芪的阴性对照。按《中国药典》2015年版TLC试验[8]，取上述对照和阴性及“1.3”项下的供试品溶液各10 μl，点于同一薄层板上，展开剂：三氯甲烷∶甲醇∶水（65∶35∶10）的下层溶液，展开10 cm，取出晾干，喷10%硫酸乙醇溶液显色，在105℃加热至斑点显色清晰，置365 nm紫外光灯观察，拍照记录。

1.6芍药苷的含量测定方法

1.6.1色谱条件色谱柱：色谱柱（Agilent TC-C18，4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（15∶85）；流速： 1.0 ml/min；检测波长：231 nm；柱温：25℃；进样量为10 μl。

1.6.2样品液制备对照品溶液制备：精密称取经过减压干燥后的芍药苷对照品8.43 mg，放置于20 ml容量瓶中，适量甲醇溶解，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含芍药苷421.5 μg）。

供试品溶液制备：取香芪生乳合剂5 ml于10 ml容量瓶中，用色谱甲醇定容，摇匀，取上清液，0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。

阴性对照溶液制备：按香芪生乳合剂的处方称取除白芍外的其他药材，按制剂生产工艺制备，取样品溶液5 ml于10 ml容量瓶中，用色谱甲醇定容，摇匀，取上清液，0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得阴性对照溶液。

1.6.3专属性试验精密吸取“1.6.2”项下各溶液，按“1.6.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。

1.6.4线性关系考察分别精密吸取“1.6.2”项下对照品溶液0.5、1、2、4、8、10 ml，分别置于10 ml的容量瓶中，加水定容，摇匀，即为不同浓度的对照品溶液，分别取对照品溶液，按“1.6.1”项下色谱条件进行HPLC分析。

1.6.5精密度试验精密吸取芍药苷对照品溶液，按“1.6.1”项下色谱条件进样，重复6 次，记录芍药苷峰面积。

1.6.6重复性试验采用同一批次制剂样品（20160130），按“1.6.2”项下方法平行制备6批供试品溶液，分别按“1.6.1”项下色谱条件测定，记录芍药苷峰面积。

1.6.7稳定性试验称供试品溶液，按“1.6.1”项下的色谱条件，分别在0、1、2、4、12、24 h 进样测定，记录芍药苷峰面积。

1.6.8加样回收率试验精密量取已知含量的香芪生乳合剂9份于10 ml容量瓶中，每份2.5 ml，分别按含量80%、100%、120%精密加入一定量的对照品，加水2.5 ml，加甲醇定容，每个浓度平行制备3份，取适量溶液过0.22 μm微孔滤膜，即得。按“1.6.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，计算加样回收率。

1.6.9样品的测定按“1.6.2”中方法制备得到供试品溶液（批号为150828、151210、160130），按“1.6.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，计算样品中芍药苷含量。

2结果

2.1当归、川芎的鉴别

当归、川芎的鉴别结果见图1。供试品与对照药材相同的位置上显示相同颜色的荧光斑点，阴性在相关位置无斑点。

2.2白芍的鉴别

白芍的鉴别结果见图2。供试品与对照品在相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性在相关位置无斑点。

2.3木香的鉴别

木香的鉴别结果见图3。供试品与对照品相同的位置上显相同颜色的斑点，阴性在相关位置无斑点。

2.4黄芪的鉴别

黄芪的鉴别结果见图4。供试品与对照品相同的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性在相关位置无斑点。

2.5芍药苷的含量测定结果

2.5.1专属性试验专属性试验结果见图5。芍药苷与相邻其他色谱峰的分离度>1.5，拖尾因子符合要求（0.995），按芍药苷计算，理论塔板数>5000。阴性样品在与芍药苷对照品相同保留时间（约17 min）处没有色谱峰。

2.5.2线性关系考察计算得回归方程：y=21 589x-16 790，R2 = 0.9999。结果表明芍药苷在21.1～421.5 μg/ml范围内线性关系良好，横坐标（x）为芍药苷浓度，纵坐标（y）为色谱峰面积。

2.5.3精密度试验计算得到芍药苷峰面积的RSD为0.7%，说明精密度良好。

2.5.4重复性试验计算芍药苷峰面积的RSD是1.3%，证明方法的重复性良好。

2.5.5稳定性试验计算得到芍药苷峰面积RSD是1.4%，证明供试品溶液在24 h稳定性良好。

2.5.6加样回收率试验计算得到平均加样回收率为98.6%，RSD为1.7%。

2.5.7样品的测定计算得到150828、151210、160130三批次香芪生乳合剂中芍药苷的含量分别为0.546、0.591、0.564 mg/ml。

3讨论

TLC利用不同成分对吸附剂吸附能力得不同，在展开剂流吸附剂的过程中，连续的产生吸附、解吸附的循环，达到不同成分分离的目的，是现阶段中药复方制剂中药味鉴别最常用的方法。HPLC是以经典的液相色谱为基础，在高压下的液体为流动相的色谱过程，一般配备高灵敏度的检测器，具有高效的特征，通过与标准物质对照能对复方制剂中的有效成分进行含量测定。香芪生乳合剂中当归、川芎、白芍、黄芪、木香诸药合用起到益气养血、通经下乳的作用[9-13]，基于此，本研究采用TLC法对制剂中的这些药材进行鉴别。当归和川芎有效成分相近，都含稿本内酯、阿魏酸等成分，《中国药典》2015年版中红药贴膏、妇科调经片等多种制剂中当归和川芎都采用TLC同时鉴别，故本研究采用TLC法对当归和川芎同时鉴别。白芍在处方中为君药，且芍药苷为白芍的主要有效成分，含量较高，故选择其作为含量测定的指标。

根据《中国药典》2010年版一部及相关文献报道芍药苷在230 nm 波长处有最大吸收[14-18]，通过在200～400 nm 波长范围内扫描芍药苷对照品溶液和供试品溶液，结果在231 nm波长处有最大吸收，故选择231 nm为检测波长。

从三批次检测结果看，该制剂生产工艺稳定，质量可靠。该研究方法简单易行、可操作性强、准确、稳定、可靠，可作为香芪生乳合剂的质量控制方法，为该制剂的进一步开发提供科学依据。

[参考文献]

[1]马彦江，陈天朝.清热止晕合剂的质量标准研究[J].中医学报，2016，31（3）：408-410.

[2]杨霄，段晓颖，周艳梅.康妇炎滴丸质量标准研究[J].中医学报，2014，29（1）：78-81.

[3]宋青坡，陈宁，韩永成，等.降酶丸的质量标准研究[J].中医学报，2014，29（8）：1175-1177.

[4]李军.气管炎合剂质量标准研究[J].辽宁中医药大学学报，2015，17（3）：43-45.

[5]常昕楠，徐德生，刘力.桑芩合剂质量标准研究[J].中国药业，2014，23（12）：67-68.

[6]隆颖，栗建明，孙丽丽，等.八宝惊风散质量标准研究[J].中国当代医药，2015，22（12）：17-21.

[7]温瑗源，孟令琨，陈宏斌，等.五味降脂胶囊的质量标准研究[J].中国当代医药，2016，23（1）：8-10.

[8]国家药典委员会.中国药典[M].四部.北京：中国医药科技出版社，2015：57-59.

[9]夏泉，张平，李绍平，等.当归的药理作用研究进展[J].时珍国医国药，2004，15（3）：164-166.