固定电泳法检测尿本-周蛋白的应用分析

谭鸿霞

（中山市小榄人民医院检验科 广东 中山 528415）

临床医师多应用血清蛋白电泳、免疫球蛋白定量方法监测M蛋白，但在多种因素的作用下，其特异性与灵敏度相对较低，本文探讨免疫固定电泳法在尿BJP中的应用价值，本文做出如下详细论述。

1.材料与方法

1.1 试剂和仪器

乙酸缓冲液、磺基水杨酸、十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶电泳（SDS-AGE）电泳试剂盒、免疫固定电泳试剂盒，仪器以Sebia全自动电泳仪、罗氏Cobas8000全自动生化分析仪等为主。

1.2 样本

取2017年3月—2018年5月在我院进行住院治疗的125例患者晨尿样本，在3～8℃环境下保存，7d内统一先行检测十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶（SDS-AGE）电泳，收集其中有异常区带的尿标本。

1.3 检测方法

（1）固定电泳法的应用流程：取适量缓冲液，将蛋白质溶入其中，实现电泳分离处理。取等量晨尿样本分别行免疫固定电泳于热沉淀反应试验。对轻链2种血清进行免疫固定之前实施有效的分离处理干预，借用固定的条带将电泳后蛋白质的整个面貌呈现处理，并把其设为参考泳道。沉淀后的蛋白质染色环节应用的染色剂为结晶紫后，利用酸性溶液把多余的染料冲洗掉，对最后获得的监测结果仅扫描处理。将酸性介质冲洗多余染料。对检测结果行扫描分析。（2）热沉淀反应法参照相关实验规程进行操作行。

2.结果

2.1 BJP免疫固定电泳

在对参与本次研究125例患者晨尿样本监测后，发现63例患者有异常区，异常区段的相对分子质量为25000～50000。将以上63例患者进行BJP免疫固定电泳，结果提示有35例样本尿中BJP为阳性，其中IgG 型21例，IgG 型14例。热沉淀反应法检测结果表明有19例患者尿样中BJP阳性。

2.2 免疫固定电泳检测的灵敏度

免疫固定电泳法检测出尿BJP阳性的尿蛋白浓度是20mg/L，当浓度上升至2000mg/L时，没有发现干扰；但是热沉淀反应法检测出尿BJP阳性的尿蛋白浓度达到310mg/L，但浓度上升至1270mg/L时，就有干扰出现。

2.3 尿蛋白电泳、热沉淀反应法和BJP检出情况统计

对63例尿蛋自SDS-ACE存在异常区带的样木行BJ P免疫固定电泳。结果提示，尿蛋白电泳出现异常BJP区带的阳性率为55.56%（35/63）。蛋白异常的样本经免疫固定电泳的BJP检出率为54.28%，热沉淀反应法的检出率为30.16%。见表1、表2。

表1 非浓缩尿蛋白电泳的效率[n，(%)]

表2 BJP免疫固定电泳与热沉淀反应法检测的效率[n，(%)]

3.讨论

因为身体中某一克隆出现病理性改变而分泌大量单一化、质地均匀的单克隆蛋白，又被叫做M蛋白。多发性骨髓瘤、白血病和淋巴细胞瘤等疾病均会伴有单克隆B细胞增殖，蛋白轻链通过肾小球滤过作用后在肾小管分解代谢。伴随着肿瘤细胞的增殖，自由轻链的合成量增多，远远大于肾小管的重吸收能力，以致BJP在肾小管内和游离钙结合、沉淀，破坏肾单位，促使肾功能减退，产生蛋白尿、管型尿，甚至是血尿。尿本-周蛋白为游离单克隆免疫球蛋白轻链，相对分子量为22500，是由具有213～216个氨基酸构成，轻分子链为 。现代临床医学研究发现，尿本周蛋白阳性和多发性骨髓瘤的发病存在相关性，其可以被视为诊断多发性骨髓瘤的标记性蛋白，他类疾病患者也可检出本周蛋白为阳性[2]。热沉淀法、免疫比浊法为临床检测尿中 BJP的常用方法，但受多种因素的干扰，其灵敏度与特异性普遍偏低，检出率较低。在本次研究中，应用热沉淀法尿 BJP的检出率仅为30.16%，并且该检测方法灵敏度偏低（尿BJP阳性的尿蛋白浓度达到310mg/L，但浓度上升至1270mg/L时，就有干扰出现），由此可间接的推测，如果把热沉淀法运用在BJP阳性的筛选时间中，可能对检测结果的正确率造成负面影响。而免疫固定电泳法是以琼脂糖凝胶为媒介，对蛋白质进行电泳分离以后，将蛋白质固定剂、各类免疫球蛋白等众多物质溶入其中，如果血清内有与之相对应的抗原，那么就会在相应部位产生抗原—体复合物，同时在凝胶介质底部有沉淀物生成，经过染色处理以后，沉淀区段就会外显颜色，结合显色条带的位移情况辨识相关单克隆组分，进而实现精确对各类免疫球蛋白及轻链类型的划分[3～4]。

在本次研究中，出现异常区带的样本中BJP检出率为55.56%，有28例为假阳性，笔者认为这可能和某些小分子蛋白出现在该区带中相关。总之，免疫固定电泳检测尿BJP，具有较高灵敏度与特异性，值得在疾病诊断领域推广。