姜侧柏叶炮制工艺的实验研究

南敏伦 王 雪 赵昱玮 司学玲 宿艳霞 赫玉芳*

（1 吉林省中医药科学院，吉林 长春 130012；2 吉林农业大学，吉林 长春 130118；3 修正药业集团长春高新制药有限公司，吉林 长春 130012）

侧柏叶为柏科植物侧柏Platycladus orientalis（L.）Frcnco的干燥枝梢和叶[1]。收载于《中国药典》、《吉林省中药材炮制标准》，具有止血、化痰止咳，生发乌发的功效，侧柏叶苦寒，多服、久服后出现头晕、恶心、胃部不适、食欲减退等反应，并且少数人出现浮肿、皮疹等过敏性反应，适用人群有限[2]。为解决此问题，取侧柏叶之清降，折其上逆之势，用干姜的温守中阳，使脾能统血，气能摄血。炮制后清降温中并行，寒热同用，相行而不悖，属温阳摄血。所以，侧柏叶（姜炙）较生侧柏叶具有更广泛的适用范围。为了保证炮制工艺的稳定性、可行性，本研究以芸香苷、槲皮苷及杨梅素含量为指标，以饮片的外观、芸香苷、槲皮苷及杨梅素含量为依据进行姜侧柏叶的炮制工艺研究。

1 材 料

1.1 仪器：Agilent 1220高效液相色谱仪（紫外检测器）；KQ-250B超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Sartorius BS 124S（赛多利斯）；ST60红外测温仪（美国雷泰RAYTEK）。

1.2 试药：侧柏叶购于吉林宏检大药房，产地吉林；生姜购于长春，产地山东；经吉林省中医药科学院赵全成研究员鉴定侧柏为柏科植物侧柏Platycladus orientalis（L.）Frcnco的干燥枝梢及叶；生姜为姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的新鲜根茎；对照品槲皮苷（111538-201606）、芸香苷（100080-201610），为含量测定用，购自中国食品药品检定研究院。杨梅素为自制对照品，含量为99.5%。甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 姜侧柏叶的制备

2.1.1 姜汁的制备：取生姜，清洗干净，切碎，加适量水，压榨取汁，重复2次，合并汁液，得每1 mL含生姜药材1 g的生姜汁。

2.1.2 姜侧柏叶的制备：取侧柏叶9份，每份100 g，按照正交试验设计加姜汁拌匀，炒制。选择炮制温度（A）、炮制时间（B）、和生姜用量（C）3个因素[3]，每个因素取3个水平，采用L9（34）正交表安排试验（因素水平见表1）。

2.2 姜侧柏叶中芸香苷、槲皮苷、杨梅素的含量测定

2.2.1 色谱条件。色谱柱：ACE C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.2% 磷酸水（B）不同梯度洗脱，0～8 min，90%～85% B，8～45 min，85%～60% B，45～50 min，60%～80%B，50～55 min，80%～90% B；检测波长265nm；流速1.0 mL/min；柱温25 ℃；进样量10 μL[4-6]。在此条件下侧柏叶样品中芸香苷、槲皮苷及杨梅素3个对照品与其他成分均达到基线分离。

2.2.2 对照品溶液的制备：精密称取芸香苷、槲皮苷、杨梅素对照品各适量，置于同一100 mL量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，分别制成0.048、0.075、0.015 g/L的对照品溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备：取正交试验提取的9份姜侧柏叶炮制品，研细，各取约0.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇20 mL，超声处理30 min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 样品测定：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪分析测定。

2.3 姜侧柏叶炮制工艺考察：本试验选择芸香苷、槲皮苷、杨梅素的含量作为评价指标，采用综合评定法，将3个指标最高含量定为100，其他各组数据与100相比，得到3个指标的评分，再将3个指标评分加权（按照等比例），得到综合评分。由综合评分优选姜侧柏叶最佳炮制工艺，试验分析结果见表2，方差分析见表3。

根据正交试验直观分析及方差分析结果，确定姜侧柏叶最佳炮制工艺为A2B2C2，即侧柏叶与姜汁的比例为10∶1，拌匀，置120 ℃炒制15 min，取出，自然放凉。影响因素大小依次为烘制温度（A）＞烘制时间（B）＞生姜用量（C）。方差分析结果显示，炮制温度对试验结果有显著性影响。

表 2 正交试验分析结果

表 3 正交实验方差分析结果

2.4 姜侧柏叶最佳炮制工艺验证试验：按最佳炮制工艺A2B2C2制备3批姜侧柏叶样品，每批100 g，测定其中的槲皮苷、芸香苷和杨梅素的含量。实验结果表明，按照本实验条件进行炮制，可以较好的炮制侧柏叶药材，工艺稳定、可行。

3 讨 论

现代研究表明，侧柏叶中的有效成分主要有三类：一类是黄酮类，主要包括槲皮苷、芸香苷、杨梅素等，为主要的活性成分，具有降尿酸、抗氧化、保肝、利胆、降血糖等作用[7]；一类是挥发油类，具有抗菌的作用，另一类是鞣质，具有抗氧化及抗肿瘤的作用[8]。因此，本试验建立了以槲皮苷、芸香苷及杨梅素的HPLC含量测定方法，并以这3个成分含量为指标进行姜侧柏叶炮制工艺研究，并结合了饮片的外观性状，优选出最佳的姜侧柏叶的炮制工艺，可以全面的反应姜侧柏叶的质量。

按照《全国中药炮制规范》和各地方的炮制规范对药材炮制影响因素，选择烘制温度、生姜用量和烘制时间3个因素，采用L9（34）正交试验法对姜侧柏叶的炮制工艺优选，结果表明炮制温度对姜侧柏叶炮制有显著性影响。实验结果表明，炮制温度为120 ℃时效果最好，当温度达到140 ℃时，芸香苷、槲皮苷、杨梅素的含量均有降低的趋势。但炮制过程对姜侧柏叶中主要化学成分的影响不完全一致，需要结合药效实验深入探讨。本研究曾以槲皮苷、槲皮素的含量作为评价炮制效果的考察指标，但是经过实验证明，侧柏叶中没有槲皮素，经过不同条件炮制后的姜侧柏叶含有槲皮素的量也很少，说明在炮制过程中槲皮素的产生量很小。故此没有以槲皮素的量作为评价指标。