前列泰胶囊质量标准提高研究

倪 琳 ，朱 宇 ，魏学冰 ，张晓萍 ，马 肖

（1.甘肃省药品检验研究院，甘肃 兰州 730000；2.甘肃省食品检验研究院，甘肃 兰州 730030；3.兰州市食品药品检验研究所，甘肃 兰州 730050；4.甘肃省第二人民医院，甘肃 兰州 730070）

前列泰胶囊由益母草、萹蓄、红花、油菜蜂花粉、知母（盐炒）、黄柏（盐炒）6味中药材组成，具有清热利湿、活血散结的功效，用于慢性前列腺炎（湿热挟瘀证）的治疗，现执行国家药品注册标准YBZ15942005，包括显微鉴别、黄柏和知母的薄层色谱鉴别以及采用薄层色谱扫描法测定盐酸水苏碱含量3项。为了更好地控制药品质量，有必要对现行标准进行修订。本研究采用薄层色谱法（TLC）对制剂中黄柏的薄层色谱方法进行修订，增加了萹蓄、红花的薄层色谱鉴别，将盐酸水苏碱的薄层扫描法修订为高效液相色谱法（HPLC）测定益母草中盐酸水苏碱含量，为提高前列泰胶囊质量标准提供科学依据。

1 材料

1.1 仪器

岛津LC-20A高效液相色谱仪系列：在线脱气机，四元泵，Lcsolution工作站，柱温箱，ELSD-Ⅱ蒸发光散射器；KQ3200DB型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，200 W，40 kHz）；Mettler AE240电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

前列泰胶囊（河西制药有限责任公司，批号：20110907、20110908、20110910），盐酸水苏碱对照品（批号：110712-200508），盐酸小檗碱对照品（批号：110713-200609），萹蓄对照品（批号：110861-200808），红花对照品（批号 121051-200503）均购自中国食品药品检定研究院。硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂），乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 黄柏 取本品内容物1 g，加乙醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，加甲醇5 ml溶解，作为供试品溶液。取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。按前列泰胶囊处方和工艺制备黄柏阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按TLC法[1]试验方法，取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯- 乙酸乙酯 - 甲醇 - 异丙醇 - 浓氨水（6∶6∶3∶3∶1，V/V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。结果显示，供试品在与对照品色谱相应的位置显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图1。

图1 黄柏薄层色谱图

2.1.2 萹蓄 取本品内容物2 g，加甲醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20 ml溶解，水液以氯仿提取两次，每次15 ml，氯仿液弃去，水液加浓盐酸1 ml、氯仿25 ml，水浴回流提取1 h，分取氯仿层，水浴蒸干，残渣加甲醇2 ml，作为供试品溶液。取萹蓄对照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。按前列泰胶囊处方和工艺制备萹蓄的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按TLC法[1]试验方法，取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以甲苯 - 醋酸乙酯 - 甲酸（8∶3∶1，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外灯（365 nm）下检视。结果显示，供试品在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图2。

2.1.3 红花 取本品内容物3 g，加甲醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水15 ml溶解，以乙醚提取两次，每次20 ml，弃去乙醚液，水液加水饱和的正丁醇提取两次，每次20 ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1 ml作为供试品溶液。取红花对照药材2 g，加水100 ml煎煮1 h，用脱脂棉趁热过滤，滤液浓缩至约15 ml，加乙醇使含醇量达50%，混合均匀，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 ml使溶解，以水饱和的正丁醇提取两次，每次20 ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，制成对照药材溶液。按前列泰胶囊处方和工艺制备红花阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按TLC法[2]试验方法，取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚（3∶2，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。结果显示，供试品在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，见图3。

图2 萹蓄薄层色谱图

图3 红花薄层色谱图

2.2 益母草中盐酸水苏碱含量测定

2.2.1 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱选用Venusil HILIC柱（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）；流动相：乙腈 -0.2%冰醋酸（80∶20）；ELSD检测器：空气压缩机 350 KPa，雾化室温度：50℃，增益值为 2；柱温 35℃，流速：1.0 ml/min，进样量：10 μl。在上述色谱条件下，理论板数以盐酸水苏碱峰计算，均不低于2 500。供试品中的盐酸水苏碱与其他杂质峰均能很好分离（分离度＞1.5），见图 4～6。

图4 盐酸水苏碱对照品高效液相色谱图

图5 供试品高效液相色谱图

图6 阴性对照高效液相色谱图

2.2.2 对照品溶液的制备 取盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含盐酸水苏碱对照品0.5 mg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物约1.5 g，精密称定，精密加 95%乙醇 50 ml，称定重量，超声处理（120 W，40 kHz）40 min，放冷，再称定重量，用95%乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25 ml。加于中性氧化铝-改性活性炭柱上（内径2.5 cm，中性氧化铝，色谱纯 100～200 目，3∶1），用 95%乙醇洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 ml容量瓶，定容至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液（盐酸水苏碱对照品 0.506 1 mg/ml）5、10、15、20、25、30 μl，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，测定峰面积积分值，以对照品质量浓度（x，μg/ml）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标（y），得到回归方程：y=49 323x-76 699（r=0.999 5），盐酸水苏碱在 2.53～15.18 μg 有良好的线性关系。

2.2.5 专属性试验 按处方比例及制备工艺，配制不含益母草的阴性样品，并按“2.2.3”项下方法制备，按“2.2.1”项下色谱条件测定，结果本品在盐酸水苏碱对照品相应位置无色谱峰出现，即本品阴性无干扰，见图4～6。

2.2.6 仪器精密度试验 取前列泰胶囊（批号：20110907），按“2.2.3”项下方法提取，重复进样6次，结果盐酸水苏碱峰面积的RSD为0.62%，表明仪器精密度良好。

2.2.7 重复性试验 取前列泰胶囊（批号：20110907），按“2.2.3”项下方法提取供试品6份，分别测定每份的含量，盐酸水苏碱RSD为0.76%。

2.2.8 加样回收率试验 采用加样回收法，精密称取已知盐酸水苏碱含量的供试品（批号：20110907）6份，每份约1.5 g，精密称定，分别精密加入一定量的对照品溶液（盐酸水苏碱6.219 0 mg/g），用氮吹仪将溶媒吹干，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，测定供试品中盐酸水苏碱含量，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=6）

2.2.9 稳定性试验 取“2.2.7”项下样品，分别在 0、2、4、6、8、10 h测定峰面积，盐酸水苏碱峰面积稳定，RSD为0.37%，表明供试品溶液在室温下放置10 h内性质基本稳定。

2.2.10 样品测定 取前列泰胶囊3批，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，测定盐酸水苏碱含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n=3）

3 讨论

3.1 不同溶媒提取方法的比较

分别以95%乙醇、70%乙醇、甲醇超声处理40 min提取前列泰胶囊（批号：20110907）中盐酸水苏碱。结果显示，95%乙醇提取盐酸水苏碱6.219 0 mg/g，70%乙醇提取盐酸水苏碱5.978 4 mg/g，甲醇提取盐酸水苏碱5.764 3 mg/g，故选95%乙醇作为溶媒提取盐酸水苏碱。

3.2 不同提取时间的比较

分别以95%乙醇作为溶媒超声处理30 min、40 min、1 h提取前列泰胶囊（批号：20110907）中盐酸水苏碱结果为：5.962 3 mg/g、6.219 0 mg/g、6.189 6 mg/g。故选择 95%乙醇超声处理40 min提取盐酸水苏碱。

3.3 流动相的选择

流动相起初使用乙腈 - 水（80∶20）[2]，甲醇 - 水（78∶22）[3]，乙腈 -0.05 mmol/L 磷酸二氢钾溶液 - 磷酸（10∶90∶0.02）[4]，采用乙腈-0.2%冰醋酸（80∶20）洗脱，盐酸水苏碱峰分离度较好、基线噪音小。经方法学验证，该方法线性、精密度、重复性、稳定性、准确度、耐用性均符合要求，可作为前列泰胶囊质量控制的方法。