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化学发光检测系统测定总甲状腺素的正确度研究

2018-07-31卢兴兵杨舒羽王俊卿刘冠财孙可其曾素根

检验医学 2018年7期
关键词:正确度化学发光实验室

石 佳, 卢兴兵, 李 勤, 杨舒羽, 王俊卿, 刘冠财, 孙可其, 曾素根

(1. 四川大学华西医院实验医学科,四川 成都 610041;2. 四川迈克生物股份有限公司参考系统部,四川 成都 611731)

血清甲状腺素(thyroxine,T4)水平的准确测定对甲状腺中毒、T4型甲状腺功能亢进等疾病的诊断和治疗具有重要意义。临床常用的T4测定方法主要有放射免疫分析法和化学发光免疫分析法,目前应用最广泛的是化学发光免疫分析法。由于各厂家的检测系统不完全相同,因此可能会导致检测结果出现不一致。为此,本研究以同位素稀释液相色谱串联质谱法(isotope dilution liquid chromatography tandemmass spectrometry,ID-LC-MS/MS)作为血清T4测定的参考方法,将临床常用的3种化学发光检测系统与参考方法进行方法学比对,评价3种化学发光检测系统的正确度。

1 材料和方法

1.1 样本

收集四川大学华西医院临床新鲜血液样本40例,每例5 mL,浓度范围为29.7~237.8 nmol/L。样本要求无溶血、黄疸及脂血,无任何抗凝剂及分离胶,试管(红头)由美国BD公司提供。T4标准物质(IRMM-468)由欧洲标准物质与测量研究所(the Institute for Reference Materials and Measurements,IRMM)提供。

1.2 仪器与试剂

Xevo TQS超高效液相色谱串联三重四级杆质谱仪由美国Waters公司提供。cobas e601全自动电化学发光免疫分析仪及配套试剂(电化学发光法)由瑞士罗氏公司提供,简称e601;ARCHTECT i2000SR化学发光免疫分析仪及配套试剂(吖啶酯化学发光法)由美国雅培公司提供,简称i2000SR;IS1200全自动化学发光测定仪及配套试剂(化学发光法)由四川迈克生物股份有限公司提供,简称IS1200。

1.3 方法

1.3.1 参考方法正确度验证 严格按照检验医学溯源性联合委员会(the Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine,JCTLM)推荐的T4参考方法制备标准液和内标溶液,筛选色谱和质谱条件,建立检测T4的ID-LC/MS/MS方法,并对其正确度进行验证[1-5]。

1.3.2 方法学比对 参考方法以正确度质控物进行质量控制,要求测定结果与靶值的相对偏移<2%。3种化学发光检测系统(e601、i2000SR、IS1200)分别按照实验室校准和质控规则进行校准和室内质控。参考方法和3种化学发光检测系统满足要求后同时测定40例新鲜临床血清样本,参照美国临床实验室标准化协会(the Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)EP9-A3文件及WS/T 407—2012《医疗机构内定量检验结果的可比性验证指南》对结果进行线性回归和偏移分析。

1.4 统计学方法

参照YY/T 1223—2014《总甲状腺素定量标记免疫分析试剂盒》和美国临床实验室改进修正法规(the Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988,CLIA'88)制定各检测系统测定T4的评价标准,数据采用Excel 2013软件进行统计分析。(1)线性回归分析:以参考方法测定结果为X值,化学发光检测系统的测定结果为Y值,作最小平方和线性回归分析,线性相关系数(r)应≥0.975;(2)偏移分析:以参考方法的测定结果为X值,以化学发光检测系统测定结果与参考方法的相对偏移为Y值,作散点图,以±15%为相对偏移的控制限,95%以上样本的测定结果应满足要求。计算40例样本的测定结果与参考方法测定结果的平均相对偏移并以此评价3种化学发光检测系统的系统偏移。

2 结果

2.1 参考方法的正确度

建立的参考方法(ID-LC-MS/MS)连续3年参加由国际临床化学与检验医学联合会(the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine,IFCC)组织的参考实验室外部质量控制(the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine External Quality Assessment Scheme for Reference Laboratories in Laboratory Medicine,RELA)评价,结果显示该法与主导实验室(德国波恩大学临床生物化学研究所)的测定结果十分接近,相对偏移均<2%。该法还通过了中国合格评定国家认可委员会(China National Accreditation Service for Conformity Assessment,CNAS)ISO15195的认可,并进入了JCTLM的医学参考测量服务实验室列表,由此表明建立的参考方法是正确、可靠的[6-8]。

2.2 方法学比对

2.2.1 e601与参考方法的比对结果 e601与参考方法的线性回归方程为Y=0.958 2X+3.76,r2=0.963 9,结果为可接受,见图1。偏移分析结果显示单个样本的相对偏移仅有1例超出限值,平均相对偏移为-0.83%,结果为可接受,见图2。

图1 e601与参考方法的线性回归分析

图2 e601的相对偏移

2.2.2 i2000SR与参考方法比对结果 i2000SR与参考方法的线性回归方程为Y=0.747 7X+11.21,r2=0.967 1,结果为可接受,见图3。偏移分析结果显示单个样本的相对偏移有27例超出限值,平均相对偏移为-15.24%,结果为不可接受,见图4。

2.2.3 IS1200与参考方法的比对结果 IS1200与参考方法的线性回归方程为Y=0.992 5X+10.59,r2=0.969 0,结果为可接受,见图5。偏移分析结果显示单个样本的相对偏移有2例超出限值,平均相对偏移为5.83%,结果为可接受,见图6。

图3 i2000SR与参考方法的线性回归分析

图4 i2000SR的相对偏移

图5 IS1200与参考方法的线性回归分析

图6 IS1200的相对偏移

3 讨论

近年来,随着社会的不断发展,人们生活及工作的压力越来越大,导致甲状腺疾病的发病率持续上升。另外,随着国家二胎政策的放开,孕妇人群数量陡增,甲状腺功能也成为了孕检必查的项目。因此,总T4、促甲状腺素和游离甲状腺激素等5项甲状腺功能指标对基层保健医生和内分泌科医生尤为重要。目前,临床实验室已经认识到甲状腺功能检测标准化的重要性。为此,IFCC在2015年开展了甲状腺功能检查标准化的合作组项目,旨在解决甲状腺功能检查的标准化和一致性。

本研究采用方法学比对的方式对3种临床实验室常用的化学发光检测系统(e601、i2000SR、IS1200)测定T4的正确度进行了初步评价。评价结果显示e601和IS1200的正确度良好,而i2000SR虽然与参考方法相关性较好,但是出现较明显的系统偏移,需对检测系统进行偏移校正。虽然本研究参考了CLSI EP9-A3等文件的评价方法,但由于实验条件的限制,考虑到采用的参考方法和3种化学发光检测系统分别来自2个不同的实验室、参考方法样本测定时间较长、临床实验室很难收集到高浓度样本等因素,因此本研究并未严格按照CLSI EP9-A3文件的要求,对40例样本分5 d进行双份重复测定,而是对CLSI EP9-A3文件规定的评价方式进行了一定的简化。这样虽然在一定程度上影响了本研究评价结果的精确度,但由于采用了线性回归分析和偏移分析这2种直观、简便的分析方法,还是具有一定的客观性和合理性。

建立检验结果的量值溯源是保证各实验室检测结果准确、可比的有效手段,也是促进行业技术交流的基础,更是评价体外诊断产品质量和临床实验室检测质量的重要指标。开展量值溯源工作的基础是建立检验医学参考系统,包括参考方法、参考物质、参考实验室。2005年,在国家卫生计生委临床检验中心的倡导和组织下,国内开始建立临床酶学参考方法,经过10余年的发展,现已从最初的临床酶学、小分子代谢物等采用紫外分光光度法测定原理的二级参考方法扩展到甾体激素、25-羟基维生素D、糖化血红蛋白等采用液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem-mass spectrometry,LC-MS/MS)测定原理的一级参考方法。目前,国内已经有7家医学参考实验室进入了JCTLM的参考测量服务实验室列表,意味着国内完全有条件将部分检测项目进行标准化,但是检测标准化通常应具有完整的溯源链,而处在溯源链中间层次的生产厂商是关键的一环,起到承上启下、量值传递的作用。检验医学的检测系统包括仪器、试剂、校准品等,通常都是由生产厂商提供,也就是说检验医学产品的提供者能在很大程度上左右最终检验结果的准确性,这就需要生产厂商建立检测系统的溯源性,保证其提供的仪器和/或试剂所给出的检测结果的准确性。本研究评价的e601和IS1200的T4项目均具有量值溯源性描述,分别溯源至同位素稀释气相质谱和ID-LC-MS/MS参考方法,而i2000SR的T4项目无溯源性描述。本研究结果显示,具有溯源性的检测系统的正确度明显好于未溯源的检测系统。由此可见,量值溯源是保证检测系统正确度的重要前提,也是保证患者样本检测结果准确性的重要条件[9-10]。

综上所述,检测系统是否具有量值溯源是临床实验室选择检验产品和服务的重要依据,临床实验室需了解检测系统的测量不确定度是否能够满足实验室质量控制的预期要求。据统计,医生诊断结论80%的信息来自于临床检验结果,如果检验结果的偏差降低10%,假阴性率将降低10%~50%[11]。通过量值溯源可大幅提高检验结果的正确度,也势必能大幅提高临床诊断的可靠性。

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