自建检测系统性能验证方法初探

李学会 张望明 弋志巍 李程程

【摘要】目的：探讨自建检测系统分析性能的确认方法。方法：本研究参照美国国家临床实验室标准化委员会（CLSI）颁布的多个EP文件、NCCLS C28-A2和我国《医疗机构临床实验室管理办法》制定验证方案，对某国产β2-微球蛋白试剂和西门子ADVIA1800全自动生化分析仪组成的检测系统的最低检测限（空白限）、精密度（重复性精密度和期间精密度）、正确度（正确度相对偏差、比对试验）、线性范围进行性能验证。结果：最低检测限为0.0156≤2.000，批内精密度为0.92%、0.67%，批间精密度为0.49%，线性范围为0～15mg/L，正确度相对偏差均小于8%，与西门子原装配套试剂进行比对试验得到回归方程为：y=0.884x+0.3202，相关系数R=0.9624。结论：该检测系统性能指标均满足相关法规和试剂说明书要求，验证结论为合格。本研究提供的验证方案方便实用，较适合于临床实验室的性能评价。

【关键词】检测系统；正确度；精密度；性能验证

我国临床实验室管理办法和ISO15189：2012均要求实验室应对检验程序的性能进行确认，证实其满足预期用途后方可用于临床检测。但对临床化学自建检测系统性能验证的具体实验方法国内尚未达成共识，本研究参照美国国家临床实验室标准化委员会（CLSI）颁布的EP17-A2、EP5-A2、EP15-A3、EP9-A3、EP-6A和我国《医疗机构临床实验室管理办法》制定实验方案，对某国产β2-微球蛋白试剂和西门子ADVIA1800全自动生化分析仪组成的检测系统的最低检测限、精密度、正确度、线性范围进行性能验证，旨在验证该检测系统的性能状况和探讨方便实用的性能验证方案。

1 材料与方法

1.1 判断标准制定

由于β2-微球蛋白精密度和正确度尚无国家或行业标准，根据2016年卫生部PT结果β2-微球蛋白的允许范围反推其为TEA=25%，本次判断标准按照行业推荐要求，重复性精密度<1/4TEA，批内精密度<1/3TEA，偏倚<1/3TEA为判断标准，当试剂说明书要求较以上要求高时按试剂说明要求。其它验证试验的判断标准均按文件要求或试剂说明书规定取其要求高者。

1.2 试剂与仪器

西门子ADVIA1800全自动生化分析仪、某国产β2-微球蛋白测定试剂盒（免疫比浊发）、西门子原装配套脂蛋白（a）试剂盒。

1.3 方法

1.3.1 最低检测限

参照EP17-A2文件要求，采用同一批号试剂，重复测定零浓度校准品20次，计算测定结果的均值x及标准差（s），（x+2s）以作为试剂的最低检测限，以不高于产品说明书标称的≤2.0000为判断标准。

1.3.2 精密度

参考CLSI EP5-A2文件要求，重复性精密度通过测定两个浓度水平的质控样本，每个样本重复测定20次，计算变异系数（CV），以精密度不高于6.0%作为判断标准。期间精密度通过测定两个浓度水平的质控样本，每个样本重复测定3次（x1、x2、x3），连续测定20天，计算批间变异系数（CV），以精密度不高于8%作为判断标准。

1.3.3 正确度相对偏差

参考CLSIEP15-A3文件要求，取厂商不同批的校准品和厂商质控物，每份样本重复测定3次，计算均值（x）与参考值（M）的相对偏差（T%），以不高于8%作为判断标准。

1.3.4 比对试验

依据CLSI EP9-A3文件，用40个在测定浓度范围内不同浓度的人源样本，以西门子原装配套产品测定结果为x，以验证试剂测定结果为y，用线性回归方法计算两组结果的相关系数（r）及在参考值上限处的预期偏差（Be），其公为：Bc=a+（b-1）Xc，预期偏差Bc的95%可信区间公式为：

1.3.5 线性范围

参考CLSIEP6一文件，取一份接近线性低限样本（低值样本）和一份接近线性高限样本（高值样本）将低浓度与高浓度血清标本按比例配制成5个系列浓度样本（1：0、3：1、1：1、1：3，0：1），各个浓度梯度样本重复检测3次，计算均值。其预期浓度按公式x=（CL×VL+CH×VH）/（VL+VH）计算，以理论值（xi）作为自变量，以测定值（yi）作为因变量，求出线性回归方程，计算相关系数r。用稀释浓度的理论值（xi）代入线性回归方程，计算出yi的估計值（yi），及yi与yi的偏差，相对偏差（%）=（yi-yi）/yi×100%，绝对偏差=（yi-yi），以说明书规定的相关系数r≥0.990，β2-MG浓度≤5mg/L，线性绝对偏差≤0.5mg/L；β-MG浓度>5mg/L，线性相对偏差≤8.0%作为判断标准。

2 结果

2.1 最低检测限结果

20次检测结果x=0.021、s=0.0183，x+2s=0.0156≤2.000，符合说明书规定，验证通过。

2.2 精密度

两个浓度水平质控样本重复测定20次的均值分别为4.22、14.98，标准差分别为0.039、0.100，批内CV值为0.92%和0.67%都小于6.0%；批间精密度样本均值分别为4.41、15.70，标准差分别为0.12、0.45批间CV值为2.7%和0.49%都小于2.9%，符合说明书规定，验证通过。

2.3 正确度相对偏差

校准品五个浓度相对偏差分别为2.50%、1.25%、-0.50%、0.44%、-0.09%，质控品相对偏差分别为-1.88%、-3.55%，偏差均小于8%，验证通过。

2.4 比对试验

经统计分析，回归方程为：y=0.884x+0.3202，相关系数R2-0.9624。在参考值上限（3.0mg /L）时的预期偏差（及预期偏差95%的可信区间）为0.028（-0.012～0.051）mg几验证通过，结果如图1所示。

3.5 线性实验

线性回归方程y =1.002x-0.135，相关系数r=0.9997>0.990；xi=0mg/L时，线性绝对偏差为-0.135mg/L小于0.5mg/L；xi=3.75、7.5、11.25、15mg/L时，线性相对偏差分别为-2.97、-0.34、-0.79、0.70均小于10.0%.相关系数和线性偏差均符合说明书规定，验证通过，结果如图2所示。

精密度是检验程序最主要的分析性能。评价精密度的方案有多种，主要有CLSIEP-5A、CLSI EP15-A、CLSI EP5-A。本研究参考EP5-A2文件建立验证方案，批内和日间（两水平）各重复测定20次，分别计算均值、标准差和CV，结果显示批内CV和日间CV均远低于判断标准，表面精密度性能达到了最佳的质量要求。

正确度的评价方法也有多种，主要有正确度相对偏差的计算、回收试验和比对试验。本研究参考CLSI EP15-α3和行业标准，我们分别使用了不同批号的校准品和定值质控品进行正确度相对偏差的计算结果显示偏差均远小于判断标准。除此之外我们还按CLSI发布的EP9-A3方案与原装配套试剂进行样本比对，经统计分析，回归方程为：y=0.884x+0.3202，相关系数R2=0.9624。在参考值上限（3.Omg/L）时的预期偏差（及预期偏差95%的可信区间）为0.028（-0.012～0.051）mg/L，以上两种评价方法结果均表明该检测系统具有较好正确度。

CLSI EP17-A2推荐用空白限、检出限和定量检出限表示检验程序的检出能力。本研究通过重复测定零浓度校准品20次，以（x+2s）作为试剂的最低检测限，结果为0.0156远低于试剂说明书宣称的2.000，表面该检测系统具有较好的检出能力。

线性范围指测量结果与预期的分析物浓度呈线性的范围，是质量控制的主要性能评价指标之一。参考CLSI EP6-A文件，建立测定此次线性验证方案，结果表明相关系数和线性偏差均符合说明书规定。

综上所述，某国产β2-微球蛋白试剂和西门子ADVIA1800全自动生化分析仪组成的检测系统，具有较好的性能状态。本研究提供的性能评价方案，具有方便实用，操作简单的优点，较适合于临床实验室的性能评价。