慢性乙型肝炎中医证型与患者细胞免疫功能关系研究*

张振宇 黄衍松 李伟冰 程红球

1.深圳市坪山区人民医院中医科 (广东 深圳， 518000) 2.汕头大学医学院第二附属医院

笔者将150例慢性乙型肝炎(CHB)患者辨证分型,并检测其外周血T淋巴细胞亚群(CD4+和CD8+)及Th1细胞分泌的细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2细胞分泌的细胞因子(IL-6、IL-10),对取得的数据进行统计分析,探讨中医辨证分型与细胞免疫功能之间的关系,为指导临床辨证分型提供客观指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 150例CHB患者均为2010年11月-2013年11月在汕头大学医学院第二附属医院门诊或住院就诊的患者，其中男96例，女54例，年龄22～60岁，病程2～15年。其诊断均符合2010年《慢性乙型肝炎防治指南》中的标准[1]。中医辨证分型根据1991年天津会议制定的分型标准[2]，其中湿热中阻型(A型)67例，肝郁脾虚型(B型)45例，肝肾阴虚型(C型)16例，脾肾阳虚型(D型)12例，瘀血阻络型(E型)10例。各证型患者在性别、年龄、DNA水平方面比较，差异无显著性意义，P>0.05，具有可比性。见表1。

表1 150例CHB患者基线特征比较

1.2 检测方法 流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群，在汕头大学医学院第二附属医院医学转化中心实验室完成，操作严格按照试剂盒说明书进行。酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清中IL-2、IFN-γ、IL-6和IL-10的浓度，由汕头大学医学院生物分析实验室完成，操作严格按照试剂盒说明书进行。HBV DNA检测采用荧光定量PCR法。肝功能采用全自动生化分析仪检测，由于本研究着重观察细胞免疫功能的变化，故肝功能结果未列出。

2 结果

2.1 CHB患者中医证型与T 淋巴细胞亚群的关系 见表2。

表2 CHB患者中医证型与T 淋巴细胞亚群的关系比较

与脾肾阳虚型比较，*P<0.01；与湿热中阻型比较，△P<0.05

2.2 CHB患者中医证型与IL-2和IFN-γ的关系 见表3。

表3 CHB患者中医证型与IL-2和IFN-γ关系比较

与脾肾阳虚型比较，*P<0.05，**P<0.01；与肝肾阴虚型比较，△P<0.05；与肝郁脾虚型比较，#P<0.05

2.3 CHB患者中医证型与IL-6和IL-10的关系 见表4。

表4 CHB患者中医证型与IL-6和IL-10关系比较

与湿热中阻型比较，*P<0.05，**P<0.01；与瘀血阻络型比较，☆P<0.05；与湿热中阻型比较，#P<0.05。

3 讨论

国内外多项研究己经证实,HBV本身对肝细胞无明显损害,由于存在特异性细胞毒T淋巴细胞介导的肝细胞损伤和病毒清除是CHB的发病机理。HBV DNA的清除主要通过CTL介导的病毒清除和非细胞溶解机制清除病毒，尤其与T细胞积极的应答关系密切,相反,CHB患者体内的特异性T细胞应答功能明显下降[3～7]。

T淋巴细胞是人体主要的免疫细胞，其T淋巴细胞各亚群数量的变化及所占百分比反映了机体的免疫水平。T淋巴细胞可以分成不同的亚群，亚群的分类主要依其表型及功能的不同，一般将人类外周T淋巴细胞依其不同的表型及功能分为CD4+与CD8+两个亚群，CD4+细胞主要为辅助T细胞，按所分泌的细胞因子又可分为 Th1和 Th2细胞两个亚群。在免疫应答中, 主要由Th1细胞分泌的IL-2、IFN-γ和TNF-α等细胞因子促进细胞免疫, 主要由Th2细胞分泌的IL-6、IL-10和IL-4等细胞因子促进体液免疫，两者的相互协调在免疫应答中起重要作用。CD8+细胞主要为细胞毒性T细胞(CTL)，CTL主要功能就是清除病毒感染，两者相互影响、相互作用，平衡着机体的免疫状态，临床上常将CD4+/CD8+比值作为评估机体免疫状态的一个重要依据[8]。

近10年来，对CHB各中医证型与 T 淋巴细胞免疫功能的研究较多，部分研究结果相似，但也有部分研究结果差异较大，本研究结果显示， CD4+T淋巴细胞水平在湿热中阻型中最高，从高到低次序为：湿热中阻型>瘀血阻络型>肝郁脾虚型>肝肾阴虚型>脾肾阳虚型；而 CD8+T 淋巴细胞水平在脾肾阳虚证中较高，从高到低次序为：脾肾阳虚型>瘀血阻络型>肝肾阴虚型>湿热中阻型>肝郁脾虚型；IL-2的水平在湿热中阻型中最高，从高到低的变化趋势为：湿热中阻型>瘀血阻络型>肝郁脾虚型>肝肾阴虚型>脾肾阳虚型；IFN-γ的水平在湿热中阻型中最高，从高到低的变化趋势为：湿热中阻型>疲血阻络型>肝郁脾虚型>肝肾阴虚型>脾肾阳虚型；IL-6的水平在脾肾阳虚型中最高，变化趋势为：湿热中阻型<瘀血阻络型<肝肾阴虚型<肝郁脾虚型<脾肾阳虚型；IL-10的水平在脾肾阳虚型中最高，变化趋势为：湿热中阻型<瘀血阻络型<肝郁脾虚型<肝肾阴虚型<脾肾阳虚型。这提示外周血T淋巴细胞亚群及Th1、Th2细胞分泌的细胞因子在CHB患者不同证型中是有差异的。笔者分析这些数据得出：CHB患者外周血T淋巴细胞亚群(CD4+和CD8+)的百分比和Th1细胞分泌的细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2细胞分泌的细胞因子(IL-6、IL-10)的水平在不同证型间存在一定的统计学差异，部分指标(CD4+、CD8+、IL-2、IFN-γ、IL-6和IL-10)可以作为临床辨证分型的参考依据。

由于收集样本量不够大，且以住院患者为多，尤其是脾肾阳虚型和瘀血阻络型患者数量太少，以致于各证型间的部分检测结果的统计学差异不能充分体现。总之，通过研究笔者认为CHB患者中医证型与其细胞免疫功能存在一定关系，具有一定的临床应用价值，可为从细胞免疫角度为中医辨证分型提供更多的客观参考指标。

[1] 中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎诊断标准(2010年版)[J]．中西医结合肝病杂志，2011，21(2)：121-122.

[2] 中国中医药学会内科肝病专业委员会 ．病毒性肝炎中医疗效判定标准(试行) [J]．中医杂志，1992，33(6)：53.

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[8] Sun JC，Bevan M J. Defective CD8 T cell memory following acuteinfection without CD4 T cell help [J].Science，2003，300(5617)：339-342．