益母草药材中盐酸水苏碱的含量测定

陈 茜

（锦州市妇婴医院中药局，辽宁 锦州 121000）

益母草（Leonurus heterophyllus[1]），是一年或者两年生草本唇形科植物。味辛苦、性凉。作用活血祛瘀、利尿消肿，用于调节女性的月经和缓解痛经，还可治疗胎漏难产、产后恶露不止、尿血以及便血等症。益母草有多种化学成分，包括生物碱类、黄酮类、挥发油类等。其中主要的有效成分为生物碱，即为益母草碱 （leonurine，leo）、水苏碱 (Stachydrine，sta)、益母草啶和益母草宁等。其中盐酸水苏碱为益母草药材中的主要活性生物碱，本文主要采用了薄层层析法来对益母草药材中盐酸水苏碱的含量进行测定。

1 材料与方法

1.1 仪器 双波长薄层色谱扫描仪CS-930(日本岛津)[2]；卧式层析槽；恒温水浴锅；喷雾器；微量定量毛细管；平整干净的玻璃板；烘箱；研钵；量筒。

1.2 材料和试剂 益母草药材；羧甲基纤维素钠 (CMC）的水溶液；由海洋化工厂提供的硅胶G(青岛)；来源于中国药品生物制品检定所的盐酸水苏碱（产品批号：110713-203116）；其他的试剂都是AR级的分析纯。

1.3 薄层色谱法的层析条件与显示剂 展开剂的配制是将正丁醇-盐酸-醋酸乙酯按4∶1.5∶0.5的比例配好，且先倒入卧式层析槽中，盖上表面皿，以待之后实验使用。显色剂则选用稀碘化铋钾试液。

1.4 研究方法

1.4.1 薄层色谱的制备 将羧甲基纤维素钠 (CMC）的水溶液与硅胶G混合于研钵中，缓慢加入适量的水研磨，直至成糊状后取出，并均匀地平铺在玻璃板上，铺板时可轻敲玻璃板以使其涂布均匀，整个平铺面要求无气泡，无疙瘩，特别是边角的部分必须涂布均匀。完成铺板后，在干净平整的阴凉处晾干，再放入烘箱烘干，约30 min后拿出，备用。

1.4.2 益母草供试品溶液和盐酸水苏碱对照品溶液的制备 取出益母草药材适量，研磨一定时间，使其成粉末状，再精密称定该细粉大约1 g并通过二号筛。将筛选后的粉末放置于锥形瓶中，向瓶中加入50 mL的99.7%乙醇试剂，然后将其加热回流1.5 h，再放冷、滤过。滤过后的滤渣及容器需用50 mL的EtOH分3次洗涤，之后滤过、再合并滤液，再放到恒温水浴锅中蒸干。蒸干后的残渣加入使其溶解的EtOH适量，再转移到10 mL的量瓶中，然后同样用EtOH稀释至刻度并摇匀，放于离心机中以5000 r/min的速度离心5 min，最后取其上清液作为实验所需的供试品溶液。精密吸取2 μL（1）与4 μL（2） 的供试品溶液。

精密称取出适量的盐酸水苏碱对照品，再加入E－tOH制备成每1 mL中含有2 mg的盐酸水苏碱的溶液作为实验用的对照品溶液[4]。(对照品溶液实际的浓度为 (C=2.04 mg/mL)。精密吸取对照品溶液1 μL(a)、2 μL(b)、4 μL(c)、6 μL(d)、8 μL(e)。

用微量定量毛细管分别蘸取益母草供试品溶液和盐酸水苏碱对照品溶液，于不同硅胶G薄层板的原点（距层析板下端2.0 cm处，斑点间距为1 cm） 上点样，并作好供试品与对照品的标记。点样完毕再放入卧式层析槽中层析，直至展开剂上升到距上边沿0.5～1 cm时，立即取出硅胶G板，此时若斑点较为模糊，可用稀碘化铋钾试液喷湿以显色，用薄层色谱仪CS-930扫描测定[4]。

2 结果

2.1 标准曲线的制备 对照品溶液1 μL(a)、2 μL(b)、4 μL(c)、6 μL(d)、8 μL(e) ，所得峰面积值如表1所示。建立坐标曲线，对照品溶液的点样量设置为横坐标，峰面积设置为纵坐标。所得的线性回归方程为：y=22389.1x+8129.8，r=0.9994。结果表明该药材的盐酸水苏碱在2.3～16.4 μg范围内的浓度与峰面积拥有良好的线性关系[5]。

表1 对照品溶液峰面积值

2.2 精密度试验结果 分别吸取6份对照品溶液2 μL，其次在同样的硅胶G薄层板上点6个点，按上述方法测定，其峰面积积分值相对标准偏差RSD为1.8% (n=6)，证明此方法精密度较为良好。

2.3 稳定性试验结果 对实验中所用的同一块硅胶G薄层板上的同一斑点进行扫描测定，每小时1次，共测定5次计算的峰面积值的相对标准差RSD=1.58%，（n=5），结果表明斑点稳定性较好。

2.4 重现性性试验结果 取同一样品，按照上述供试品溶液的制备方法制成5份，按上述测定方法分别依法测定，所得的结果RSD=1.93%，结果表明该方法的重现性好。

2.5 样品含量测定结果 先精密吸取4 μL的供试品溶液，2 μL与4 μL的对照品溶液按上述方法测定，用薄层扫描法来对其进行扫描，在波长为λs=510 nm时，可测量供试品吸光度积分值和对照品吸光度积分值[6]，再用两点法计算，即得供试品的含量。结果见表2。

表2 供试品溶液含量测定结果

2.6 回收率试验及结果 在此采用加样回收法进行回收率试验，首先在已知含量的益母草药材中加入盐酸水苏碱的对照品适量，即加入对照品贮备液1 mL，再按含量测定的方法进行测定，结果见表3。

表3 益母草药材的加样回收率实验

3 讨论

《中华人民共和国药典》2005年版的益母草含量测定法是以比例为1∶8∶3的乙酸乙酯-正丁醇-盐酸的混合液为展开剂，再以稀碘化铋钾试液与三氯化铁乙醇溶液 (10∶1)的混合溶液作为显色剂[7]，应用该方法在此药材上实验后，所表现出来的分离效果较差。再用双波长扫描法来替代《药典》的单波长扫描法后，明显提高了结果的精确性。2010版的《中华人民共和国药典》测定益母草中盐酸水苏碱含量是采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测的方法[8-9]。该方法需采用氨基色谱柱，流动性则选用比例为90∶10的乙腈-水的混合液，此外还需采用硅藻土拌样甲醇回流提取法提取，并制备成供试品溶液，该法操作上相对简捷。但蒸发光散射检测器有着较大的局限性——为避免不挥发物沉积在加热室及光学检测池体中，它的流动相要求全部蒸发。所以，只能使用挥发性的化合物来调节流动相的pH值，例如氨、醋酸和三氟乙酸等。

实验结果表明，此次实验选用的展开系统有较好的分离度，且所得斑点较为清晰；此方法简便易行，测定的含量结果比较稳定。且实验过程中所用仪器试剂及操作步骤相对简便易行，可用该方法快速检测该药材。

[1]Zhi-Ke Liu，Da-Rong Wu，Yi-Ming Shi，et al.Three new diterpenoids from Leonurus japonicus[J].Chinese Chemical Letters，2014，25（5）:677-679.

[2]汪爱霞，张惠萍，安双生，等.前列泰片盐酸水苏碱定量测定方法改进[J].中成药，2012，34(6):1188-1190.

[3]周洁菁，许钒，王欲斌，等.脑脉利颗粒中盐酸水苏碱的含量测定[J].医学信息，2015(10):313-313.

[4]李向军，王超，王永，等.中药薄层色谱影响因素分析及应用[J].中国药业，2011，20（14）:13-15.

[5]邢庆芳.益母康颗粒中盐酸水苏碱快速鉴别的方法研究[J].按摩与康复医学，2012，3(4):26-26.

[6]高英，陈静才，张在国，等.益母草颗粒的质量研究[J].黑龙江科技信息，2015(17):21.

[7]邓仙梅，赵斌，贾天柱，等.对《中国药典》2010年版茺蔚子薄层鉴别方法的改进[J].时珍国医国药，2015，26（4）:893-894.

[8]张玉萌，项菲菲.益母草饮片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱含量测定[J].辽宁中医药大学学报，2013，15（2）:73-74.

[9]南小航，宋婷，彭菲，等.不同产地益母草饮片中盐酸水苏碱含量差异分析[J].湖南中医药大学学报，2012，32(1):40-42.