吉林省2008-2015年风疹流行年暴发风疹病毒抗原位点变异特征分析

王 爽，郭淑英，边 疆，单元春，李宏宇，战 英，田 鑫，魏雷雷，程 涛，付思美

(1.吉林省疾病预防控制中心、吉林省卫生计生委病毒重点实验室，吉林 长春130062；2.吉林医药学院；3.吉林省肿瘤医院)

风疹是急性呼吸道传染病的一种，由风疹病毒引起。世界卫生组织基于风疹病毒E1蛋白的739个核苷酸(8731-9469nt)作为标准靶核苷酸进行基因分型划分和常规分子流行病学研究，将风疹病毒分为2个进化枝(Clade 1和Clade 2)。Clade 1包括6个基因型(1B、1C、1D、1E、1F和1G)和4个临时基因型(1a、1h、1i和1j)，Clade 2包括3个基因型(2A、2B和2C)[1]。针对风疹暴发病例，及时进行检测，分析风疹病毒基因型及核苷酸、氨基酸位点变异，不仅有利于从分子流行病学追踪病例来源，而且为风疹的防控提供参考依据。

1 材料与方法

1.1全国传染病监测信息系统获取吉林省风疹发病率数据。

1.2获取毒株选取2008至2016年风疹暴发病例咽试子。盲传三代，进行病毒分离[2]。

1.3病毒核酸鉴定使用QIAGEN公司(德国)RNA核酸提取试剂盒提取病毒培养物的风疹病毒核酸，用RT-PCR扩增E1蛋白的目的片段，扩增产物送上海生工有限公司进行序列测定，详见参考文献[2-4]。

1.4氨基酸、核苷酸同源性分析及氨基酸抗原位点变异分析用Mega 5.0和Bioedit 7.0进行序列分析，构建基因树，分析核苷酸、氨基酸及重要的抗原位点变异情况。

2 结果

2.1风疹发病率吉林省分别于2004年、2008年及2012年出现暴发流行年，且发病率在全国名列前茅。吉林省2008年风疹发病率高达36.66/100,000，位居全国第三[4](见图1，图2)。

2.2风疹病毒基因分型结果在Genbank下载世界卫生组织推荐的风疹病毒参考株序列，选取获得的12个风疹病毒基因序列与之进行基因树构建，结果显示，除Rvi/Changchun.Jilin.CHN/15.15/1和Rvi/Changchun.Jilin.CHN/16.15/1与2B基因型同属一簇，其余均为1E基因型(见图3)。

图1 吉林省风疹流行年发病率与全国风疹发病率比较

图2 吉林省2004-2016风疹发病率(1/100,000)

图3 吉林省2008-2015年风疹暴发风疹病毒基于E1蛋白(nt8731-nt9469)构建的遗传进化树

2.3氨基酸位点变异分析

Genbank下载我国现行使用的风疹病毒疫苗株，基于E1蛋白选定的739个核苷酸编码的氨基酸序列，进行氨基酸位点比较，结果显示除2015年的两株风疹病毒在第333位氨基酸发生突变[(丙氨酸 Alanine，A333)→(缬氨酸 Valine，V333)]，其余均在第338位氨基酸发生突变[(亮氨酸 Leucine，Leu338)→(苯丙氨酸 Phenylalanine,Phe338)](图4)。与我国疫苗株比较，氨基酸同源性99.1%-100%。12株代表株之间核苷酸同源性89.4%-100%。

图4 吉林省12株风疹暴发代表株与我国风疹病毒疫苗株基于E1蛋白739个核苷酸编码的氨基酸序列比较

3 讨论

风疹病毒E1蛋白是风疹病毒分型的靶基因区域，也是重要的血凝抑制位点、N-型糖基化位点、抗原表位位点和中和位点所在区域[5]。本文选取风疹病毒株来源于吉林省风疹流行年暴发病例，尽管2015年首次出现2B基因型风疹病毒[6]，但与我国现行风疹病毒疫苗株比对，氨基酸同源性99.1%-100%，关键的抗原位点均未见变异，现行风疹疫苗仍是控制风疹疫情的首选措施。

风疹流行季节出现在每年春季，吉林省3-5月出现发病高峰。风疹于2004年纳入我国疾病监测系统，按丙类传染病管理。2008年全国风疹疫情严重，列入突发公共卫生事件。吉林省自有监测数据以来。经历了2008年大暴发，当年报告发病率居全国第三，报告病例数全国第二[4]。截止2016年，吉林省风疹流行约3-4年出现一个流行高峰，随着风疹疫苗的使用及普及，未来有可能会打破这个流行规律。随着世界卫生组织新的《麻疹和风疹消除行动计划》的出台[7],风疹将携手麻疹被列为第三个要消除的疾病。参考吉林省近十年麻疹发病率，一度达到消除状态之后于2014年反弹。目前，在风疹下一个流行年到来之前，及时采集风疹暴发及散发病例病原学标本，加强风疹病毒分子流行病学研究，及时比对风疹病毒疫苗株，了解抗原位点变异，为吉林省风疹防控提供科学依据。

[1]朱 贞，许文波.风疹病毒的分子流行病学[J].中国计划免疫，200713(4)：399.

[2]王 爽，周剑惠，王 吉，等.致细胞病变的风疹病毒鉴定分析[J].中国疫苗和免疫，2010,16(5)：435.

[3]王 爽， 周剑惠，侯 祥，等.应用简便的逆转录环介导等温扩增方法检测风疹病毒核酸[J].中国疫苗和免疫，2009,15(6)：518.

[4]王 爽，周剑惠，王 吉，等.吉林省两起风疹暴发分离的风疹野病毒的基因型分析[J].中国疫苗与免疫，2012,18(4)：351.

[5]FREY TK.Molecular biology of rubella virus [J].Adv Virus Res,1994,44(1):69.

[6]王 爽，单元春，杨 尧，等.吉林省首次分离的2B基因型风疹病毒株的基因特征分析[J].中国生物制品学杂志，2016，29(1):28.

[7]http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/44855/1/9789241503396_eng.pdf