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免疫层析法快速定量检测辣椒中罗丹明B

2017-11-13刘春森王彦斐

农产品加工 2017年20期
关键词:罗丹明层析胶体金

刘春森,罗 爽,王彦斐,彭 强,王 雄

免疫层析法快速定量检测辣椒中罗丹明B

刘春森1,罗 爽2,王彦斐3,彭 强3,*王 雄3

(1.四川省南充市产品质量监督检验所,四川南充 637000;2.四川省泸州市产品质量监督检验所,四川,泸州 646000;3.北京中检维康生物技术有限公司,北京 100004)

建立了免疫层析法快速定量检测辣椒中罗丹明B的分析方法,该方法的检出限为500 μg/kg,相对标准偏差低于10%,回收率为70%~110%,具有简便快速、灵敏准确、重现性好等优点,可以用于对辣椒中罗丹明B进行快速定量筛查检测。

快速定量检测;辣椒;罗丹明B;免疫层析

0 引言

罗丹明B(Rhodamine B) 又称玫瑰红B、蕊香红B、若丹明B或碱性玫瑰精,俗称花粉红,是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料,曾经用作食品添加剂,但后来试验证明罗丹明B会致癌,在合成过程中会产生有毒的杂质,如苯酚、苯胺、醚等,已证明罗丹明B对动物具有致癌性,且可透过人体皮肤,引起头痛、呕吐、四肢酸痛等症状,现在已不允许用于食品染色[1-2]。罗丹明B是一种碱性工业染料,因其具有色泽鲜艳、着色稳定、价格低廉等特点,常被一些不法商家非法用作食品着色剂(以辣椒制品为主),严重危害了消费者的健康[3]。因此,建立快速可靠的检测方法非常重要。

目前,多数实验室仍采用非极性有机溶剂的方法将罗丹明B从食品中溶解并萃取出,再将萃取液过中性氧化铝固相萃取小柱吸,以达到吸附罗丹明B的效果,但非极性有机溶剂在洗脱油脂样品或食品内源性干扰物,然后再用极性溶剂将其从固相萃取柱上洗脱并收集,然后用仪器进行定性定量检测。此方法不仅需要精密昂贵的仪器,且操作过程复杂、时间较长,无法实现在小型实验室及现场检测。试验建立并验证了免疫层析法快速定量检测辣椒中罗丹明B的分析方法。

1 试剂仪器与检测方法

1.1 试剂

iCheck罗丹明B定量快检卡,研发组成由包被有胶体金偶联的罗丹明B抗体的微孔、喷涂有罗丹明B抗原检测线和羊抗鼠二抗的质控线和稀释缓冲液组成;乙醇(色谱纯),美国JT BEKER公司提供;玻璃纤维滤纸,美国VICAM公司提供;罗丹明B标准溶液:准确称取0.1 mg固体罗丹明B固体标准品溶液,于10 mL容量瓶中,加入少量色谱级甲醇溶液后,用甲醇定容至10 mL。除特别注明外,以上试剂均为分析级试剂,实验室用水均为纯净水。

辣椒样品,不同地区采购的不同种类的辣椒,分别收集四川、湖南、新疆、北京4个地区的红辣椒。

1.2 仪器

iCheckⅢ型食品安全定量快检仪,北京中检维康生物技术有限公司产品。

1.3 检测方法

1.3.1 样品的提取

提取1.0 g粉碎后辣椒样品于50 mL离心管中,加入10mL提取液乙醇,用多功能旋转混合器提取10 min(或者人工用手剧烈振荡3 min),用中速定性滤纸过滤,收集滤液即为待检样品。

1.3.2 快速定量检测步骤

吸取120 μL稀释缓冲液加入金标抗体微孔中,再加入30 μL滤液样品,用移液器吸打5次混匀,取100 μL加入到快检卡样品孔中。于37±2℃下温育反应10 min后,立即将快检卡放入定量快检仪中读数,结果即为样品的实际浓度。该方法的检出限为 500 μg/kg,检测范围为 500~5 000 μg/kg。注意:若读值为5 000 μg/kg或大于5 000 μg/kg时,需要将样品滤液用样品提取液乙醇进行一定比例的稀释,此结果需要乘以稀释因子。

2 结果与讨论

在不同种类的空白样品中添加罗丹明B的含量为 500,1 000,2 000,5 000 μg/kg质量浓度水平,然后按照胶体金法快速定量检测。

胶体金法快速定量法准确性和重复性的四川辣椒试验结果见表1,胶体金法快速定量法准确性和重复性的湖南辣椒试验结果见表2,胶体金法快速定量法准确性和重复性的新疆辣椒试验结果见表3,胶体金法快速定量法准确性和重复性的北京辣椒试验结果见表4。

表1 胶体金法快速定量法准确性和重复性的四川辣椒试验结果

从表1~表4中回收率和精密度数据可以看出,该方法检测罗丹明B的回收率均在70%~120%,室内4水平加标和5个平行性试验变异系数在20%以内。

3 结论

免疫层析法快速定量检测辣椒中罗丹明B,检出限为10 μg/kg,相对标准偏差低于10%,回收率为

表2 胶体金法快速定量法准确性和重复性的湖南辣椒试验结果

表3 胶体金法快速定量法准确性和重复性的新疆辣椒试验结果

表4 胶体金法快速定量法准确性和重复性的北京辣椒试验结果

70%~110%,变异系数小于10%,分析一个样品的时间为20 min内。该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好的优点,可以用于对辣椒中罗丹明B进行快速定量筛查检测。

[1]卢士英,邹明强.食品中常见的非食用色素的危害与检测 [J].中国仪器仪表,2009(8):45-50.

[2]中华人民共和国卫生部.食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单(第一批) [S].2008:12.

[3]林长虹,胡书玉,黄达锴,等.辣椒及其制品中罗丹明B的超高效液相色谱荧光检测 [J].广东化工,2011(4):140-141.◇

Rapid Detemination of Rhodamine B in Chili by Immunchlomatography

LIU Chunsen1,LUO Shuang2,WANG Yanfei3,PENG Qiang3,*WANG Xiong3
(1.Sichuan Nanchong Quality and Technical Supervision,Nanchong,Sichuan 637000,China;2.Sichuan Luzhou Quality and Technical Supervision,Luzhou,Sichuan 646000,China;3.Beijing Clovertech Co.,Ltd.,Beijing 100004,China)

Rapid determination Rhodamine B in chili by immunochromatography was developed.The limit of determination was 500 μg/kg,the relative standard deviations was below 10%.Recoveries of Rhodamine B spiked to samples were between 70%~110%.This method wassimple and rapid,sensitive and accurate,and reproducible.It could be uced to peper the Rhodamen B for rapid quantitative scueening tests.

Rhodamine B;rapid detemination;chili;immunochlomatography

TS207.3

A

10.16693/j.cnki.1671-9646(X).2017.10.045

1671-9646(2017) 10b-0056-02

2017-08-01

刘春森(1982— ),男,大专,助理工程师,研究方向为食品安全检测技术。

*通讯作者:王 雄(1963— ),男,博士,高级工程师,研究方向为食品安全检测与超微量分析化学。

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