免疫组织化学和聚合酶链反应检测乳腺癌易患基因研究

高洪丽　张蓓　任永强

[摘要] 目的 研究免疫组织化学和聚合酶链反应检测乳腺癌易患基因。方法 方便选取该院2015年4月—2017年4月收治的40例乳腺癌患者的临床资料进行统计分析。结果 乳腺癌组患者的乳腺癌易患基因1表达显著低于良性乳腺疾病组、健康对照组（F=31.027，P<0.05），Her2（F=27.012）、CK5/6（F=150.452）、EGFR（F=188.347）表达均显著高于良性乳腺疾病组、健康对照组（P<0.05）；聚合酶链反应检测乳腺癌组患者乳腺癌易患基因1、CK5/6、EGFR阳性表达率87.5%（35/40）、42.5%（17/40）、45.0%（18/40）均显著高于免疫组织化学检测57.5%（23/40）、17.5%（7/40）、22.5%（9/40）（χ2=5.02，7.38，9.35，P<0.05），灵敏度、特异度、准确度均显著高于免疫组织化学检测（P<0.05）。结论 聚合酶链反应检测乳腺癌易患基因的效果较免疫组织化学好。

[关键词] 免疫组织化学；聚合酶链反应；乳腺癌易患基因

[中图分类号] R737 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）08（a）-0012-03

[Abstracts] Objective This paper tries to study the immunohistochemistry and polymerase chain reaction in the detection of breast cancer susceptibility genes. Methods Convenient selection the clinical data of 40 cases of patients with breast cancer treated in this hospital from April 2015 to April 2017 were analyzed statistically. Results The breast cancer susceptibility gene 1 expression of the breast cancer group was significantly lower than the benign breast cancer group and healthy control group （F=31.027，P<0.05）； the Her2（F=27.012），CK5/6（F=150.452）， EGFR（F=188.347）expressions were significantly higher than the benign breast disease group and healthy control group （P<0.05）； The positive expression rates of breast cancer susceptibility gene 1， CK5/6， EGFR was 87.5% （35/40）， 42.5% （17/40）， 45.0% （18/40） respectively of the breast cancer group of the polymerase chain reaction detection， significantly higher than the immunohistochemistry detection of 57.5% （23/40）， 17.5% （7/40）， 22.5% （9/40） （χ2=5.02，7.38，9.35，P<0.05）， the sensitivity， specificity， accuracy were significantly higher than the immunohistochemistry detection （P<0.05）. Conclusion The effect of polymerase chain reaction in the detection of breast cancer susceptibility genes is better than immunohistochemistry.

[Key words] Immunohistochemistry； Polymerase chain reaction； Breast cancer susceptibility genes

乳腺癌屬于一种女性恶性肿瘤，在临床极为常见，发病率较高，对患者的预后状况造成了直接的影响。近年来，临床日益关注和重视了乳腺癌易患基因1、人表皮生长因子受体2 （Her2）、细胞角蛋白5 /6（CK5/6）、表皮生长因子受体（EGFR），其将重要的科学依据提供给了临床治疗乳腺癌患者及判断其预后的工作。现阶段，临床采用了很多方法对乳腺癌易患基因进行检测，其中较为常用的为聚合酶链反应（PCR）和免疫组织化学检测。为了将科学依据提供给乳腺癌患者的治疗及预后，该研究对该院2015年4月—2017年4月收治的40例乳腺癌患者的临床资料进行了统计分析，比较了免疫组织化学和聚合酶链反应检测乳腺癌易患基因的效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取该院收治的40例乳腺癌患者，纳入标准：所有患者均经临床表现、病理组织学检查等确诊为乳腺癌，均符合《中国常见恶性肿瘤诊治规范》中乳腺癌的诊断标准[1]；排除标准：将有精神疾病、免疫性疾病、器质性疾病等患者排除在外。患者年龄27～62岁，平均（41.5±5.0）岁；体质量39～72 kg，平均（49.1±3.8）kg。将这些患者作为乳腺癌组，另选取该院同期收治的40例良性乳腺疾病患者作为良性乳腺疾病组，患者年龄25～63岁，平均（40.8±5.4）岁；体质量38～74 kg，平均（49.0±3.3）kg。另选取该院同期接收的40名健康体检人员为健康对照组，年龄24～65岁，平均（41.1±5.5）岁；体质量40～71 kg，平均（49.0±3.5）kg。3组人员的一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。endprint

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学检测 取病理标本将其固定下来，在此过程中将4%甲醛充分利用起来，组织脱水，石蜡包埋，染色过程中将苏木精及弹力纤维充分利用起来，最后进行免疫组织化学染色。光学显微镜下观察乳腺癌易患基因1、人表皮因子受体2（Her2）、细胞角蛋白5/6（CK5/6）、表皮生长因子受体（EGFR）等标志物，抗体在细胞膜、细胞核、细胞质表达，阳性细胞评定标准为有黄色或棕黄色颗粒出现[2]，结果阳性的评定标准为同一切片内阳性细胞数/同类细胞数×100%>10%[3]。

1.2.2 聚合酶链反应（PCR）检测 将组织RNA提取出来，在液氮中放置组织，研磨成粉后在1 mL Trizol中放置50 g组织裂解，室温下进行5 min的静置，将200 μL氯仿加入，进行15 s的剧烈震荡，充分混合，室温下进行5 min的静置，4℃下以12 cm的半径、12 000 r/min的转速进行15 min的离心，分离心后混合物为3组，向1.5 mL离心管中移动上层水相，将异丙酚加入，其和Trizol的比例为0.5 mL：1 mL，充分混匀，室温下进行10 min的静置，4℃下以12 000 r/min的转速进行10 min的离心。在离心管侧面及底部，RNA会有白色沉淀形成，将上清弃去，将75%乙醇加入其中，比例为1：1，成分混匀，4℃下以10 600 r/min的转速进行5 min的离心，将上清弃去，室温下进行10 min的静置，干燥RNA沉淀，将焦炭酸二乙酯加入水溶解，在波长为260 nm处对核酸浓度进行测定，在波长为280 nm处对蛋白质浓度进行测定，RNA提取成功的标准为核酸/蛋白质在1.8～2.1之间，逆转录其为单链DNA。

1.3 统计方法

统计分析所得数据时采用SPSS 16.0统计学软件，用（x±s）表示计量资料，用单因素方差分析多组计量资料，用SNK-q检验两两组间比较，用χ2检验计数资料比较，检验水准α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组人员的乳腺癌易患基因1、Her2、CK5/6、EGFR表达比较

乳腺癌组患者的乳腺癌易患基因1表达显著低于良性乳腺疾病组、健康对照组（P<0.05），Her2、CK5/6、EGFR表达均显著高于良性乳腺疾病组、健康对照组（P<0.05），但良性乳腺疾病组和健康对照组人员的乳腺癌易患基因1、Her2、CK5/6、EGFR表达之间的差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.2 两种方法检测乳腺癌组患者乳腺癌易患基因的阳性表达比较

聚合酶链反应检测乳腺癌组患者乳腺癌易患基因1、CK5/6、EGFR陽性表达率87.5%（35/40）、42.5%（17/40）、45.0%（18/40）均显著高于免疫组织化学检测57.5%（23/40）、17.5%（7/40）、22.5%（9/40）（P<0.05），但两种方法检测Her2阳性表达率52.5%（21/40）、47.5%（19/40）之间的差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.3 两种方法检测乳腺癌组患者乳腺癌易患基因灵敏度、特异度、准确度比较

聚合酶链反应检测乳腺癌组患者乳腺癌易患基因1、CK5/6、EGFR的灵敏度、特异度、准确度均显著高于免疫组织化学检测（P<0.05），但两种方法检测Her2的灵敏度、特异度、准确度之间的差异无统计学意义（P>0.05），见表3。

3 讨论

乳腺癌属于一种女性恶性肿瘤，在临床极为常见，7%～10%的全身各种恶性肿瘤为乳腺癌[4]，在妇女恶性肿瘤中位居第二位，仅次于子宫癌，对妇女健康造成了严重威胁。目前，临床还没有完全弄清楚乳腺癌的病因，但是患者有乳腺癌易患基因1、Her2、CK5 /6、EGFR存在，在疾病的进展过程中发生了变化[4]。现阶段，临床采用了很多方法对乳腺癌易患基因进行检测，其中较为常用的为PCR与免疫组织化学检测。

免疫组织化学将免疫学基本原理抗原抗体反应充分利用了起来，即抗原特异性结合抗体的原理，通过化学反应显色对抗体进行标记的显色剂，如荧光素、金属离子等，来将组织细胞内抗原确定下来，如蛋白质、多肽等，从而对其进行定位、定量、定性，又称免疫细胞化学技术或免疫组织化学技术。免疫组织化学具有较为简便的操作、较高的可行性、较为方便的结果读取、较短的耗时、较低的费用，在临床大批量检测中适用，但是观察者主观判断及组织标本处理极易对其造成影响，从而促进结果偏差的产生[5-8]。PCR是一种体外酶促合成特异DNA片段方法，又称特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术或无细胞分子克隆技术，一个周期的组成成分为高温变性、适温延伸等，循环进行，以较快的速度扩增目的DNA，具有较强的特异性、较高的灵敏度、较为简便的操作、较短的耗时等优势[9-10]。

相关医学对40例乳腺癌患者的临床资料进行了统计分析，结果表明，在乳腺癌易患基因的检测中，免疫组织化学检测的阳性表达率低于聚合酶连反应检测。该研究结果表明，乳腺癌组患者的乳腺癌易患基因1表达显著低于良性乳腺疾病组、健康对照组（F=31.027，P<0.05），Her2（F=27.012）、CK5/6（F=150.452）、EGFR（F=188.347）表达均显著高于良性乳腺疾病组、健康对照组（P<0.05）；聚合酶链反应检测乳腺癌组患者乳腺癌易患基因1、CK5/6、EGFR阳性表达率87.5%（35/40）、42.5%（17/40）、45.0%（18/40）均显著高于免疫组织化学检测57.5%（23/40）、17.5%（7/40）、22.5%（9/40）（χ2=5.02，7.38，9.35，P<0.05），灵敏度、特异度、准确度均显著高于免疫组织化学检测（P<0.05），和上述相关医学研究结果一致。

综上所述，聚合酶链反应检测乳腺癌易患基因的效果较免疫组织化学好，值得推广。

[参考文献]

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[5] 宋小川，谢小军，任宏，等.乳腺癌免疫组化检测在乳腺癌患者诊治中的意义分析[J].现代生物医学进展，2013，13（29）：5694-5696.

[6] 毕晓峰，郝佳洁，徐昕，等.乳腺癌组织CK5/6的表达及与预后关系的研究[J].中华肿瘤防治杂志，2014，21（12）：925-929.

[7] 陈颖，李睿，刘源，等.免疫组化和PCR检测乳腺癌Her-2、EGFRt和CK5/6过表达水平用于乳腺癌疗效的评估[J].哈尔滨医科大学学报，2013，47（1）：56-59.

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[9] 邓君，孙昌瑞，饶绍琴，等.两种方法检测乳腺癌易感基因1表达水平在乳腺癌诊断中的应用[J].实用医院临床杂志，2014，11（6）：102-104.

[10] 程秀茹.乳腺癌术后双管负压引流效果观察及护理[J].国际医药卫生导报，2015，15（55）：122-123.

（收稿日期：2017-05-07）endprint