引种杭白菊有效成分含量的分析比较

王 超，秦子芳，谭晓妍，胡 静，宁慧娟，苗雨欣，张秀清

（1.无限极（中国）有限公司，广东广州 529156；2.中国农业大学，北京 100083）

引种杭白菊有效成分含量的分析比较

王 超1，秦子芳2，谭晓妍2，胡 静2，宁慧娟2，苗雨欣2，*张秀清2

（1.无限极（中国）有限公司，广东广州 529156；2.中国农业大学，北京 100083）

以杭白菊中总糖、黄酮类物质、绿原酸、木犀草苷4种有效成分含量为指标，比较江苏引种杭白菊与原产地浙江桐乡杭白菊的品质差异。采用苯酚硫酸法测定总糖含量，以紫外可见分光光度法测定黄酮类物质的含量，并通过高效液相色谱法测定绿原酸和木犀草苷的含量。结果表明，桐乡杭白菊引种江苏后，4种有效成分的含量均有所增高；与江苏本地杭白菊相比，除总糖含量外，黄酮类物质、绿原酸、木犀草苷的含量较高。由此可知，杭白菊引种江苏有益于杭白菊品质的提高。

杭白菊；引种；总糖；黄酮；绿原酸；木犀草苷

Abstract：Taking the total sugar，flavonoid，chlorogenic acid，luteolin-7-O-glucoside in Chrysanthemum morifolium Ramat as index to compare the quality of species from original habitats Zhejiang Tongxiang.Total sugar content in Chrysanthemum morifolium Ramat is measured by phehol-vitril.The content of flavonoids is analyzed by UV-Vis spectrophotometry.Chlorogenic acid and luteolin-7-O-glucoside is measured by high performance liquid chromatography（HPLC） .The results indicate that the content of four effective components increased after Chrysanthemum morifolium Ramat in Tongxiang introduced to Jiangsu.The content of flavonoids，chlorogenic acid and luteolin-7-O-glucoside are higher in Chrysanthemum morifolium Ramat introduced Jiangsu than Jiangsu native，but the content of total sugar is lower.Therefore，The introduction of Chrysanthemum morifolium Ramat is beneficial to the quality improvement.

Key words：Chrysanthemum morifolium Ramat；introduction；total sugar；flavonoid；chlorogenic acid；luteolin-7-O-glucoside

0 引言

菊花是菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat）的干燥头状花序，具有散风清热、平肝明目、清热解毒的功效，可用于治疗风热感冒、头痛眩晕等症状[1]。杭白菊性辛、甘、苦、微寒，归肺、肝经，具有保肝的功效[2]。杭白菊茶作为一种功能性饮品，以其草本茶的独特性，在许多地方都很受欢迎[3]。杭白菊中含有多糖、黄酮类、绿原酸、木犀草苷等多种有效成分[4]，从菊花中提取出的糖类物质不仅可以提高免疫力[5]，并且能够增加机体的抗氧化能力[6]；杭白菊黄酮类成分具有抗氧化、抗炎、降压、抗病毒等作用[7]，同时能够起到镇静的作用[8]；木犀草苷是黄酮类化合物中的一种，能够起到抗癌[9]和保护心血管[10]等作用；绿原酸作为药典中菊花品质标准中的一项检测内容，具有抗菌、抗肿瘤、降血压、抗癌等多种药理活性[11]。

试验研究的杭白菊样品属于小洋菊品种，小洋菊苗期植株直立，后期自然生长呈半匍匐状，小洋菊叶为绿色、较淡、叶片较小，叶面似有略微的皱折，叶裂多且浅[12]。据付炳华等人[13]的研究，浙江桐乡杭白菊引种昆明后，在植株高度、生长习性、开花等方面均表现出固有特性，而且黄酮含量有显著增加。这表明杭白菊的引种有利于其中有效成分的积累，可以进一步提高杭白菊的品质，旨在研究桐乡杭白菊引种江苏后有效成分含量的变化情况。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

供试样品①为种植于浙江省桐乡市翔厚村种植基地的小洋菊；供试样品②为种植于江苏省宿迁市泗洪县种植基地的小洋菊；供试样品③为浙江桐乡杭白菊品种引种江苏省宿迁市泗洪县基地种植2年的小洋菊。

Agilent 1200型系列高效液相色谱仪、TU-1901型双光束紫外可见分光光度计、TG 16-WS型台式高速离心机、KQ3200DE型数控超声波清洗器。

1.2 试验方法

1.2.1 总糖含量的测定

（1）标准曲线的绘制。精确称取无水葡萄糖对照品1.000 g，用蒸馏水溶解并定容至100 mL，配制成0.1 g/L的葡萄糖溶液；取出1 mL该溶液于100 mL容量瓶定容，配制成0.1 mg/mL的葡萄糖标准液；移取 0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL 葡萄糖标准液，至20 mL具塞试管中，加蒸馏水至2 mL；向各试管中分别加入6%苯酚1 mL和浓硫酸5 mL；静置10 min后，振荡混匀；静置20 min，使反应液完全冷却后，用紫外可见分光光度计于波长490 nm处测吸光度；以葡萄糖含量为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线。

（2） 总糖含量的测定。称取0.5 g粉碎过60目筛的各样品，精确到0.001 g，置于50 mL具塞离心管内。用5 mL水浸润样品，缓慢加入20 mL无水乙醇，同时使用涡旋振荡器振摇，使之混合；将样品置于超声提取器中，在超声功率150 W条件下提取30 min；提取结束后，以转速8 000 r/min离心20 min，弃去上清液，将不溶物用10 mL 80%的乙醇洗涤再次离心，用50 mL蒸馏水将不溶物转移至圆底烧瓶，于沸水浴中提取2 h；冷却至室温，过滤后将上清液移至100 mL容量瓶中；洗涤残渣2～3次，用蒸馏水定容。

1.2.2 黄酮类物质的测定

（1） 标准曲线的绘制。精确称取芦丁标准品10.000 mg，溶解于甲醇中，容量瓶定容至10 mL，得芦丁标准溶液质量浓度为1.0 mg/mL；用微量移液枪吸取芦丁标准品溶液0，50，100，200，300，400 μL于10 mL的具塞试管中，加5%的NaNO20.3 mL摇匀；放置6 min后，加10%的Al（NO3）30.3 mL摇匀；放置6 min，再加4 mL 4%的NaOH摇匀；最后用甲醇定容，放置10 min后，于波长510 nm处测吸光度得到黄酮类物质的标准曲线。

（2）黄酮类物质含量的测定。准确称取各样品粉末0.250 g置于50 mL的离心管中，加入甲醇25 mL，超声处理（150 W）80 min后，进行离心（8 000 r/min，10 min）；将离心之后的液体进行抽滤，取滤液用甲醇定容至50 mL，取上清液0.4 mL于10 mL的具塞试管中；参照1.2.2（1）中绘制标曲的方法，测得样品（每1个样品做3个平行）中黄酮的含量。

1.2.3 绿原酸和木犀草苷含量的测定

（1） 色谱条件。色谱柱：Eclipse XDB-C18型（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：0.1%磷酸溶液-乙腈进行梯度洗脱，乙腈在流动相中的质量分数为0～11 min、10%～18%，11～30 min、18%～20%，30～40 min，20%；流速1.0 mL/min；检测波长328 nm；柱温30℃；进样量20 μL。

（2）标准曲线的绘制。分别称取绿原酸和木犀草苷的标准品5.000 mg，置于25 mL容量瓶中，用色谱级甲醇定容，混匀，即得到200 μg/mL的标准溶液；用针管移取溶液经0.45 μm的有机滤膜过滤，之后上样，进行高效液相色谱分析；再用移液枪移取200 μg/mL的标准溶液1 mL，用1 mL的甲醇稀释至100 μg/mL；按照同样的方法依次进行稀释，得到 50.0，25.0，10.0，5.0，2.5 μg/mL 的标准溶液，对7个梯度的样品依次进行色谱分析，最终得到标准曲线。

（3）绿原酸和木犀草苷含量的测定。准确称取各样品粉末0.250 g置于50 mL离心管中，加入甲醇25 mL，超声处理（150 W） 80 min后，进行离心（8 000 r/min，10 min）；将离心之后的液体进行抽滤，取滤液用甲醇定容至50 mL；取定容后的溶液进行色谱分析，根据标准曲线，得到样品中含量。

2 结果与分析

2.1 江苏引种杭白菊中总糖含量的测定

不同产地杭白菊中总糖类物质含量的比较见图1。

图1 不同产地杭白菊中总糖类物质含量的比较

由图1可知，3个产地杭白菊中总糖含量由高到低依次为江苏本地杭白菊、江苏引种杭白菊、桐乡杭白菊，江苏本地杭白菊与江苏引种杭白菊、桐乡杭白菊中所测定的总糖含量间都存在显著性差异（p＜0.05）。对于杭白菊的总糖含量来说，3个不同产地之间的差别比较明显。张红瑞等人[14]研究了江苏引种杭白菊在多糖含量方面存在的差异，表明了引种后的杭白菊多糖含量有显著增加。因此，从总糖含量分析，杭白菊引种江苏之后总糖的积累有显著增加。

2.2 江苏引种杭白菊中黄酮含量的测定

不同产地杭白菊中黄酮类物质含量的比较见图2。

图2 不同产地杭白菊中黄酮类物质含量的比较

由图2可知，3个产地杭白菊中黄酮类物质含量由高到低依次为江苏引种杭白菊、江苏本地杭白菊、桐乡杭白菊，江苏引种杭白菊与江苏本地杭白菊、桐乡杭菊中所测定的黄酮类物质含量间有显著性差异（p＜0.05）。即对于杭白菊的黄酮类物质含量来说，3个不同产地之间的差别比较明显。胡碧波等人[15]的研究结果表明，产地对杭白菊中黄酮类物质的积累有很大影响。因此，从黄酮类物质含量分析，杭白菊引种江苏种植后黄酮类物质的积累有显著增加。

2.3 江苏引种杭白菊中绿原酸含量的测定

不同产地杭白菊中绿原酸含量的比较见图3。

图3 不同产地杭白菊中绿原酸含量的比较

由图3可知，3个产地杭白菊中绿原酸含量由高到低依次为江苏引种杭白菊、江苏本地杭白菊、桐乡杭白菊。江苏引种杭白菊与江苏本地杭白菊、桐乡杭菊中所测定的总糖含量间有显著性差异（p＜0.05）；然而，桐乡杭白菊与江苏本地杭白菊之间的绿原酸含量的差异不显著（p＞0.05）。顾瑶华等人[16]的研究结果表明了几个不同产地杭白菊中的绿原酸含量差别较大，说明产地对其含量有一定影响。因此，从绿原酸的含量分析，杭白菊引种江苏后绿原酸的积累有显著增加。

2.4 江苏引种杭白菊中木犀草苷含量的测定

不同产地杭白菊中木犀草苷含量的比较见图4。

图4 不同产地杭白菊中木犀草苷含量的比较

由图4可知，3个产地杭白菊中木犀草苷含量由高到低依次为江苏引种杭白菊、桐乡杭白菊、江苏本地杭白菊。江苏引种杭白菊与桐乡杭白菊中所测定的木犀草苷含量间无显著性差异（p＞0.05），江苏引种杭白菊与江苏本地杭白菊之间的木犀草苷含量存在显著性差异（p＜0.05），桐乡杭白菊与江苏本地杭白菊的木犀草苷含量存在显著性差异（p＜0.05）。结果表明，引种江苏种植有利于杭白菊中木犀草苷的积累。

3 结论

杭白菊作为我国传统的中药材，种植地对药材品质的保证起着重要作用。植物在不同的生长环境中，其有效成分含量不同，了解其在不同的生长环境中，能够为其引种起到指导作用。

分析了桐乡杭白菊、江苏引种杭白菊、江苏本地杭白菊中的4种有效成分含量，结果表明桐乡杭白菊引种江苏后，总糖、黄酮类物质、绿原酸和木犀草苷含量均有明显提高；与江苏本地杭白菊相比，黄酮类物质、绿原酸和木犀草苷含量也有所增高。研究结果表明，引种江苏种植有利于杭白菊中有效成分的积累，为杭白菊的生产提供了理论基础。试验研究的对象仅为引种2年生的杭白菊样品，引种杭白菊的植株形态与其中的有效成分含量是否会受到引种种植时间的影响，还需要进一步的研究。

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Comparative Study on the Content of Effective Components of Chrysanthemum morifolium Ramat Introduced in Jiangsu

WANG Chao1，QIN Zifang2，TAN Xiaoyan2，HU Jing2，NING Huijuan2，MIAO Yuxin2，*ZHANG Xiuqing2
（1.Infinitus（China） Company Ltd，Guangzhou，Guangdong 529156，China；2.China Agricultural University，Beijing 100083，China）

TS20

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.09.035

1671-9646（2017） 09b-0029-03

2017-07-03

国家自然科学基金项目（21576142）；中国农业大学基本科研业务费专项资金项目（2017SP001）。

王 超（1991— ），男，硕士，研究方向为功能性食品及食品生物技术。

*通讯作者：张秀清（1976— ），女，博士，副教授，研究方向为食品生物技术。