基于AngⅡ、ApoE表达探讨补肾中药复方首参颗粒对颈动脉粥样硬化患者的影响

申定珠++陈川++邢三丽++楼丹飞++沈睿++吴蓓玲++迟惠英++陈久林

[摘要] 目的 基于AngⅡ、ApoE的表达观察补肾中药复方首参颗粒对颈动脉粥样硬化患者的影响。 方法 选取2011年6月～2012年1月上海中医药大学附属市中医医院老年病科颈动脉粥样硬化患者80例为研究对象，采用区组随机化方法将其分为观察组（40例）和对照组（40例）。两组分别予以首参颗粒、普伐他汀口服治疗，疗程6个月。于治疗前、治疗后分别采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测患者血清AngⅡ、ApoE表达。 结果 治疗后6个月，观察组AngⅡ表达较治疗前显著降低（P < 0.01），与对照组同期比较差异无统计学意义（P > 0.05）；观察组ApoE表达较治疗前明显上升（P < 0.01），與对照组同期比较差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 首参颗粒可能通过调控AngⅡ、ApoE的表达进而实现对动脉粥样硬化的多靶点干预。

[关键词] 颈动脉粥样硬化；首参颗粒；AngⅡ；ApoE

[中图分类号] R743 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）04（a）-0096-05

[Abstract] Objective To observe the effect of Chinese herbal formula for reinforcing kidney Shoushen Granules for the patients with carotid atherosclerosis based on the expression of AngⅡ and ApoE. Methods Eighty cases of patients with carotid atherosclerosis admitted to Department of Geriatrics， Shanghai Municipal Hospital of Traditional Chinese Medicine， Shanghai University of Traditional Chinese Medicine from June 2011 to January 2012 were selected as research objects， and they were divided into observation group （40 cases） and control group （40 cases） by method of block randomization. They were treated with Shoushen Granules or Pravastatin orally respectively for 6 months. Before and after treatment， the expression of AngⅡ and ApoE in serum was detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） method respectively. Results Compared with before treatment， the expression of AngⅡ in the observation group after treatment was significantly decreased （P < 0.01）， which had no statistically significant differences compared with those of control group at the same time （P > 0.05）. While the expression of ApoE in the observation group after treatment was significantly improved （P < 0.01）， which had no statistically significant differences compared with those of control group at the same time （P > 0.05）. Conclusion Shoushen Granules achieve multiple target intervention of atherosclerosis may be through regulating the expression of AngⅡ and ApoE.

[Key words] Carotid atherosclerosis； Shoushen Granules； AngⅡ； ApoE

动脉粥样硬化（AS）相关心脑血管疾病严重危害人类健康。补肾法是临床论治AS行之有效的中医治则[1]。课题组前期研究证实，补肾中药复方首参颗粒对颈动脉粥样硬化（CAS）患者可有效干预治疗[2-4]。基于此，本研究拟采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法进一步观察CAS患者形成过程中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、载脂蛋白E（ApoE）的变化以及首参颗粒的干预效果，以期为从补肾论治AS相关疾病提供深层次的临床依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年6月～2012年1月于上海中医药大学附属市中医医院老年病科AS专科门诊收治的CAS患者，分别采用动脉硬化仪、彩色多普勒超声检测，其中80例肱踝脉搏波传导速度（baPWV）>1400 mm/s、颈动脉内中膜厚度（CIMT）≥0.9 mm的CAS患者被随机分为观察组和对照组，各40例。两组患者一般资料比较差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。见表1。

1.2 纳入标准

①年龄45～65岁；②符合CAS临床诊断（baPWV>1400 mm/s，CIMT≥0.9 mm）[5]；③近3个月内未服用中药制剂或西药降脂、抗AS药物；④治疗期间只接受本研究给予药物治疗者（基础治疗药物除外）；⑤自愿签署知情同意书并积极配合治疗者。

1.3 排除标准

①肝肾功能损伤者；②急性心梗、脑血管意外或严重意外伤害后手术12个月以内者；③外周动脉疾病（PAD）；④肿瘤、全身免疫性疾病、血液病或有出血倾向者；⑤精神障碍者；⑥妊娠或哺乳期患者。

1.4 剔除与脱落标准

①研究过程中出现其他疾病需要专科治疗者；②研究过程中自行服用其他调脂、抗AS的西药或其他中药制剂者；③不能严格按本研究要求治疗或资料不全而影响疗效判断者；④因非疗效性原因主观退出者。

1.5 方法

两组患者均嘱改善饮食习惯、戒烟限酒，并给予控制血压和血糖等常规治疗。治疗期间停服其他降脂及抗AS药物，高血压病、糖尿病等原发病治疗药物除外。

1.5.1 观察组 给予首参颗粒（江苏江阴天江药业有限公司生产，规格6.2 g/袋，批号1012350）口服，每日早晚各1袋。

1.5.2 对照组 给予普法他汀片（中美上海施贵宝制药有限公司生产，规格10 mg/片，批号H10950315）口服，每日晚间睡前1片。

6个月为1个疗程，两组均观察1个疗程。

1.6 观察指标及检测方法

1.6.1 baPWV检测 治疗前、治疗后6个月采用全自动动脉硬化仪（欧姆龙-科林，BP-203RPE，VP-1000）检测。嘱患者仰卧平躺，血压袖带分别缚于上臂、下肢踝部，心电采集电极分置掌心向上之双手腕部，于胸骨左缘第四肋间放置心音采集电极，将患者资料录入系统，分析结果自动输出。

1.6.2 CIMT检测 治疗前、治疗后6个月采用彩色多普勒超声诊断仪（ALOKA-α10，7～15 MHz）于患者颈总动脉分叉近端远侧壁1、2、3 cm处检测CIMT值。

1.6.3 血脂检测 治疗前、治疗后6个月采用全自动生化分析仪（Beakman Coulter DX800）检测患者总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量。

1.6.4 AngⅡ、ApoE检测 治疗前、治疗后6个月采用ELISA法检测患者血清AngⅡ、ApoE水平。AngⅡ ELISA试剂盒系RD公司生产，ApoE ELISA试剂盒由Abcam公司提供，严格按照试剂盒说明书操作。

1.6.5 安全性指标检测 治疗期间记录患者有无不良反应发生。

1.7 统计学方法

统计分析采用SPSS 17.0软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用独立样本t检验分析组间差异，配对t检验分析组内治疗前后差异。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗前后baPWV、CIMT水平比较

观察组治疗后baPWV较治疗前明显降低，差异有高度统计学意义（P < 0.01）；对照组治疗后baPWV较治疗前无明显改变，差异无统计学意义（P > 0.05）；治疗后baPWV组间比较，观察组较对照组显著降低，差异有统计学意义（P < 0.05）。两组治疗后CIMT均较治疗前显著降低，差异有高度统计学意义（P < 0.01）；两组间CIMT同期比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.2 两组治疗前后血脂水平比较

与治疗前比较，观察组治疗后TG显著降低（P < 0.05），HDL-C明显升高（P < 0.01）；对照组治疗后TC、TG、LDL-C显著降低（P < 0.01或P < 0.05），HDL-C明显升高（P < 0.01）。两组间血脂同期比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）。见表3。

2.3 两组治疗前后AngⅡ、ApoE水平比较

两组治疗后AngⅡ较治疗前明显降低，ApoE较治疗前明显升高，差异均有高度统计学意义（P < 0.01）。两组间AngⅡ、ApoE同期比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）。见表4。

2.4 安全性

两组患者均未发现任何可能与药物相关的异常改变，患者亦未诉任何特殊不适。

3 讨论

AS是心、脑血管疾病发生的共同病理基础，与最终的心脑血管事件密切相关。肾素-血管紧张素系统（RAAS）在AS的病理过程中扮演关键角色。作为RAAS系统主要功能性成分的AngⅡ在AS的形成、发展中起重要作用。既往人们多认为AngⅡ所致血管收缩，继發性引起血压升高，亦或AngⅡ促进平滑肌细胞的增殖与血管重构，从而导致AS的产生。随着研究的深入，AngⅡ的致炎作用导致了AS的形成引起业界学者的更多关注。

炎症与AS高度相关，AS斑块中巨噬细胞、内皮细胞、淋巴细胞和平滑肌细胞均具有炎症特性，还可分泌细胞因子、趋化因子、黏附分子等多种炎症因子，这些炎症因子与炎症细胞共同促进了AS的发生、发展。AngⅡ与炎症因子及炎症标志物之间存在复杂的网络联系，AngⅡ所致炎症可直接参与AS的形成，AngⅡ诱导产生的多种炎症因子以及炎症因子进一步诱导产生的炎症标志物均可介导甚至加强AngⅡ本身的致AS作用。有研究揭示，AngⅡ能使ApoE-/-小鼠出现以AS为特征的血管病变，AS斑块中存在高表达的AngⅡ，并且这种作用独立于其对血压的效应[6]。AngⅡ可致血管内皮细胞释放中性粒细胞趋化因子进而造成中性粒细胞的积聚[7]。AngⅡ还可介导单核细胞激活并黏附于血管内皮细胞，从而加重血管内皮细胞的损伤[8]。AngⅡ注入大鼠体内可增强血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达及动脉血管壁、心肌组织中单核细胞的浸润[9]。AngⅡ可刺激白细胞介素-6（IL-6）等炎症因子的表达增强[10]。AngⅡ还可通过下调过氧化物酶体增殖蛋白活化受体（PPAR），激活核转录因子-κB（NF-κB），启动ApoE-/-小鼠MCP-1、VCAM-1等炎症因子的表达[11]。

在AS众多的发病因素中，脂质代谢紊乱与其关系密切。AS斑块中胆固醇主要由血浆脂蛋白构成，ApoE是构成血浆脂蛋白的重要成分，在脂质代谢中发挥重要作用，可作为高脂血症与AS发生、发展的重要分子靶标。应用胚胎干细胞基因敲除技术培育而成的ApoE基因敲除小鼠[12-15]，即使在普通饮食喂养条件下，该模型仍可自发形成高胆固醇血症和AS[14]。有研究认为，ApoE能调控血浆中脂蛋白的清除与氧化，增加外周细胞胆固醇流出，维持血浆胆固醇的总体内稳态；ApoE可抑制血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的血管平滑肌细胞SMC迁移、增殖；ApoE能激活NO合酶，促使血小板产生足够NO，抑制血小板聚集；ApoE还可减少T淋巴细胞活化进而抑制白细胞介素-2（IL-2）的产生及淋巴细胞增殖[16-19]。此外，ApoE还具有明显的基因遗传多态性，常以多态性蛋白形式参与脂蛋白的转化与代谢，与脂代谢紊乱、冠心病和AS的发生发展密切相关[20-22]。

祖国医学在防治AS方面积累了丰富的经验，中医药防治AS的主要治则包括活血化瘀、补肾益精、健脾化痰等。尽管中医界对于AS不同阶段的主要病机、治则治法尚未达成共识，但对于其“本虚标实”的病机认识已趋一致。本课题组自20世纪80年代以来，将AS与衰老及衰老相关退行性疾病的发生发展有机联系，通过对补肾中药干预治疗AS的系列研究发现，补肾为主的中药复方可明显干预衰老进程及AS的发生发展[23-24]。基于此，课题组以制首乌、枸杞子、生山楂、参三七组方而成“首参颗粒”，具有补肾益精、活血通络之功。方中制首乌补肝肾、益精血、强筋骨、乌须发，枸杞子滋补肝肾、益精明目，生山楂消食化积、活血散瘀，参三七止血散瘀、益气生津、消肿定痛。课题组前期研究表明，首参颗粒可显著降低CAS患者炎症因子C反应蛋白（CRP）与IL-6水平，首参颗粒还可明显降低CAS患者TG、LDL-C含量及TC/HDL-C比值[2-3]。本研究结果显示，观察组AngⅡ表达较治疗前显著降低（P < 0.01），ApoE表达较治疗前明显上升（P < 0.01），与对照组同期比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。结合课题组前期研究结果，提示首参颗粒可能通过下调AngⅡ表达进一步抑制炎症因子IL-6的表达，上调ApoE表达进一步调控脂质代谢紊乱，进而从炎症、脂质代谢两个方面实现对AS的多靶点干预。

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（收稿日期：2016-12-26 本文编辑：张瑜杰）