大容山野生香菇分离培养试验

吴章荣 陈德荣 卢玉文 秦延春 丘献娟 韦锦福

（玉林市微生物研究所，广西玉林53700）

大容山位于广西东南部，是桂东南最高峰，属热带季风气候，山高林密，原始森林面积广阔，具有丰富的野生食用菌资源。研究从大容山采集到香菇（图1）并进行分离驯化试验，希望获得适合当地栽培的优良香菇新品种。试验分别从菌盖处菌柄与菌盖处取组织培养块进行分离培养，对比分离的效果；分别运用5 种不同培养基配方，7 种不同的pH，以及不同温度范围进行培养试验。现将试验结果总结如下。

图1 大容山野生香菇

1 材料和方法

1.1 供试材料从大容山上采得的新鲜野生香菇子实体。经过分离纯化后获得菌株。

1.2 不同部位子实体分离试验选择生长健壮、朵形正常、无病虫、菌膜未破的野生香菇子实体。取材按菌盖、菌柄与菌盖交界处两个部位进行分离，培养基为PDA 加富培养基，常规方法制作，置于生化培养箱25℃培养。

1.3 供试母种培养基配方试验设计五个配方:配方①马铃薯100 g，葡萄糖10 g，琼脂8.3 g；配方②马铃薯100 g，葡萄糖10 g，琼脂8.3 g，硫酸镁2 g，磷酸二氢钾2 g；配方③马铃薯100 g，葡萄糖10 g，琼脂8.3 g，硫酸镁2 g，磷酸二氢钾2 g，蛋白胨2 g；配方④马铃薯100 g，葡萄糖10 g，琼脂8.3 g，硫酸镁2 g，磷酸二氢钾2 g，蛋白胨4 g；配方⑤马铃薯100 g，葡萄糖10 g，琼脂8.3 g，硫酸镁2 g，磷酸二氢钾2 g，麸皮10 g。

将大容山野生香菇母种，取菌龄相同0.5 cm 大小的活化菌丝块分别接入试管斜面中，每个配方接7 支试管斜面，25℃生化培养箱内恒温培养。接种培养10 d后测量菌丝生长速度，观察菌丝形态。

1.4 pH 梯度试验试验所用的培养基为PDA加富培养基配方③。设置7 个pH 为pH4、pH5、pH6、pH7、pH8、pH9、pH10。将分离大容山野生香菇母种扩大培养，取菌龄相同0.5 cm 大小的接种块接入上述试管斜面中，每个pH 处理接6 支试管，3 个重复。置25℃恒温箱内培养，接种培养10 d 后测量菌丝生长速度，观察菌丝形态特征等。

1.5 菌丝培养温度试验扩大培养培养基为PDA加富培养基，培养温度设10℃、15℃、20℃、25℃，每个温度处理培养7支试管。接种培养后10 d测量生长速度，观察菌丝形态特征等。

2 结果与分析

2.1 大容山野生香菇菌丝不同组织分离培养结果试验结果，用菌柄与菌盖交界处组织块分离效果比较好，分离成功率达85%。原因是柄与菌盖交界处组织细胞生长活力较强，菌肉肥厚，与外界环境接触少，不容易受细菌、霉菌感染（表1）。

表1 不同组织分离培养结果

2.2 不同母种培养基培养菌丝结果从表2、图2可知，菌丝生长最好的培养基是配方④，菌丝粗壮，浓密、爬壁力强，生长速度最快；其次为配方②，菌丝生长最差是配方⑤，菌丝较稀疏纤细。菌丝长势从好到差依次为配方④、配方②、配方①、配方③、配方⑤。配方④加入4 g 蛋白胨，含氮量丰富，因此菌丝生长最好。

表2 供试母种培养基上菌丝生长情况

图2 配方④培养母种

2.3 培养基pH 试验结果试验结果表明:当培养基pH 为5 时菌丝生长最好，表现为菌丝粗壮浓密、洁白尖端整齐、爬壁力强；其次为pH4，菌丝除爬壁力比pH5 稍弱，其它各项指标与pH5 基本差不多；pH6、pH7、pH8菌丝总体长势差不多，但与pH5相比稍差，pH9、pH10 长势基本一致，但比其他各pH 培养基差。由此可见大容山野生香菇母种菌丝在偏酸性培养基上生长较好，偏碱性培养基稍差，其中最适宜的pH为5（表3）。

2.4 菌丝培养温度试验结果由表4 可见，大容山野生香菇菌丝在25℃培养长势最好，白色、浓密、粗壮、尖端整齐、爬壁力强、生长速度最快。其次为20℃培养，白色、浓密、较粗壮、爬壁力强、生长速度较快。第三为15℃培养，白色、浓密、较粗壮、整齐、爬壁力较弱、生长速度一般。培养温度10℃，生长速度最慢，菌丝灰白，较浓，较细、尖端较整齐，爬壁力弱。

表3 不同pH培养基菌丝生长情况

表4 不同培养温度对菌丝生长的影响

3 小结与讨论

通过对大容山野生香菇的分离培养试验，结果得出大容山野生香菇分离母种时从菌柄与菌盖交接处挑取组织块成功率最高，组织块萌发快；母种的培养温度为25℃时菌丝生长最快长势最好。培养基pH4～pH10 菌丝均可生长，偏酸性比偏碱性菌丝生长好，以培养基pH5 为最佳。大容山野生香菇最适母种培养基:马铃薯100 g，葡萄糖10 g，琼脂8.3 g，硫酸镁2 g，磷酸二氢钾2 g，蛋白胨4 g。

大容山为广西桂东南最高峰，山高林密，云雾缭绕，山水清辙，森林茂密，生物资源丰富，生态环境质量良好。生长其中香菇肉质特别脆嫩，味道特别鲜美，香气特别浓郁，今后应对大容山野生香菇人工栽培进一步研究。