金福菇母种、原种培养基筛选试验
2014-08-12李守勉李明田景花
李守勉+李明+田景花
摘要：对金福菇母种、原种培养基配方进行了筛选，试验结果表明：金福菇的最佳母种培养基为4号培养基（马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面5 g，牛粪40 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，水1 000 mL，pH值自然）；金福菇最佳原种培养基为3号（小麦籽粒98%，石膏2%）。
关键词：金福菇；母种；原种；培养基；筛选
中图分类号： S646.104文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）06-0232-02
收稿日期：2014-02-21
基金项目：河北省现代农业产业技术体系食用菌创新团队项目。
作者简介：李守勉（1978—），女，河北泊头人，硕士，博士研究生，讲师，主要从事食用菌生物技术与遗传育种研究。Tel：（0312）7528487；E-mail：yylsm@hebau.eu.cn。金福菇（Tricholoma lobayensc Heim）别称巨大口蘑、大白口蘑、洛巴伊口蘑，属伞菌目口蘑科（白蘑科）口蘑属（白蘑属）[1]。金福菇是一种珍贵天然保健食品，是目前我国正处于开发中的珍稀食用菌之一，有“菌中珍品”之美誉[2]。金福菇属高温型食用菌，在夏季缺菇时节上市，为夏季食用菌市场的一枝独秀，极具市场前景。到目前为止，金福菇的人工驯化栽培仍停留在试验性阶段，经济效益并不十分理想，主要原因是金福菇出菇率低，生物学效率不高，经济效益不理想[3]。目前栽培技术方面最主要的问题是栽培周期长，尤其是发菌时间长[4]。选择合适的培养基是提高金福菇产量及品质的关键措施之一。金福菇菌丝虽然能在常规PDA培养基、常规原种培养基上生长，但长速慢，菌丝稀疏、长势差[5]。本试验对金福菇母种、原种培养基进行了配方筛选试验，旨在获得金福菇最适母种、原种培养基，解决生产中金福菇菌丝生长缓慢的难题，缩短栽培周期，为栽培金福菇培养料的选择提供理论依据，使经济效益最大化。
1材料与方法
1.1试验供试菌株
供试菌株为“金福菇1号”，引自河北大学食药用菌研究所。
1.2培养基配方
1.2.1母种培养基配方
1.2.1.1母种培养基初选配方A（PDA培养基）：马铃薯 200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水 1 000 mL，pH值自然；B：马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面 5 g，葡萄糖20 ，琼脂20 g，水 1 000 mL，pH值自然；C：马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面5 g，牛粪20 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1 000 mL，pH值自然；D：马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面5 g，牛粪20 g，葡萄糖 20 g，琼脂20 g，磷酸二氢钾 3 g，硫酸镁1.5 g，水1 000 mL，pH值自然；E：马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面5 g，牛粪 50 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1 000 mL，pH值自然；F：马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面5 g，牛粪50 g，葡萄糖20 g，琼脂 20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，水1 000 mL，pH值自然。
1.2.1.2母种培养基复选配方1号：马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面5 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，水1 000 mL，pH值自然；2号：马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面5 g，牛粪20 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，水1 000 mL，pH值自然；3号：马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面5 g，牛粪30 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，水1 000 mL，pH值自然；4号：马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面5 g，牛粪40 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，水 1 000 mL，pH值自然；5号：马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面5 g，牛粪45 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，水1 000 mL，pH值自然；6号：马铃薯100 g，棉籽壳100 g，玉米面5 g，牛粪100 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，水1 000 mL，pH值自然。
1.2.2原种培养基配方Ⅰ号：棉籽壳83%，麸皮15%，石膏1%，蔗糖1%；Ⅱ号：木屑83%，麸皮15%，石膏1%，蔗糖1%；Ⅲ号：小麦籽粒98%，石膏2%；Ⅳ号：小麦籽粒93%，木屑5%，石膏2%；Ⅴ号：小麦籽粒93%，牛粪5%，石膏2%。
1.3试验方法
1.3.1母种培养基配方筛选试验[6]按常规母种培养基方法进行配制，将马铃薯、棉籽壳、玉米面、牛粪等按照配方要求称取一定量，加入一定比例水中小火煮沸30 min，用8层纱布过滤，将设计的6种培养基按照配方配制好，分装到直径为 9 cm 的培养皿（培养基量为30 mL）中，每个配方设置6个重复，灭菌40 min。冷凉后接种，从同步活化的母种中取直径 3 mm、厚0.4 mm的金福菇菌丝圆片接种于培养皿中央，置于 27 ℃ 恒温培养箱中培养。当任意一个培养基配方中的菌丝长满培养皿时，结束培养，记录菌丝生长时间，测量菌落半径，计算菌丝生长速度，观察菌丝形态及其长势，结果作方差分析，进行显著性测验。
菌丝生长速度（mm/d）=菌落半径（mm）/ 生长时间（d）。
1.3.2原种培养基配方试验[7]原种采用750 mL菌种瓶，每瓶装150 g干料，松紧度为上紧下松，高压灭菌2 h，冷却至室温时接种，每支母种接5瓶原种，每个配方接20瓶，接种后在27 ℃培养室黑暗下培养，定时记录菌丝生长速度，观察菌丝形态及其长势，结果作方差分析，综合分析确定最适配方。endprint
菌丝生长速度（mm/d）=培养料高度（mm）/满瓶时间（d）。
2结果与分析
2.1母种培养基配方筛选试验
2.1.1母种培养基配方初筛结果从表1可以看出，金福菇菌丝在不同配方的母种培养基上均能生长，但生长速度和长势不同。不同母种培养基上菌丝生长由快到慢的顺序为F>A>E>D>B>C，F与A培养基生长最快且两者差异不显著，而B、C菌丝长速最慢且极显著慢于F、A培养基配方。从菌丝颜色和长势来看，D、F培养基的菌丝洁白、浓密，生长势最好，A培养基的菌丝灰白、稀疏，生长势最差。
金福菇菌丝在不同母种培养基上的生长速度及生长势比较
培养基生长速度
（cm/d）菌丝生长势菌丝色泽差异显著性0.050.01FAEDBC0.2700.2600.2550.2450.2450.240++++++++++++++++++洁白灰白洁白洁白白洁白aabbcbcccAABBCBCCC注：“++++”菌丝浓密，“+++”菌丝较浓密，“++”菌丝一般，“+”菌丝稀疏。
2.1.2母种培养基配方的复筛结果通过初筛F培养基为最佳培养基，其次是D培养基，在D、F培养基基础上，进一步调整牛粪的添加量，进行配方设计，试验结果见表2。从表2可以看出，金福菇菌丝在不同比例牛粪母种培养基上，除1号培养基生长势较差外，其他几种配方在菌丝密度、色泽、生长势等方面差异均不明显；4号培养基菌丝长速最快，并显著快于其他培养基配方，其次为3号、6号培养基菌丝长速较快，4号牛粪母种培养基最适宜金福菇菌丝的生长。
金福菇不同母种复筛培养基的生长速度及生长势比较
培养基生长速度
（cm/d）菌丝生长势菌丝色泽差异显著性0.050.014号3号6号1号2号5号0.300.280.280.260.250.24+++++++++++++++++++++++洁白洁白洁白洁白洁白洁白abbbcccAABABBBB注同表1。
2.2原种培养基配方筛选结果
，金福菇菌丝体在不同原种培养基上生长有所差异。菌丝长速由快到慢依次为Ⅲ号>Ⅴ号>Ⅳ号>Ⅰ号>Ⅱ号，且Ⅲ号、Ⅴ号、Ⅳ号原种培养基菌丝生长速度均较快，三者之间无显著性差异，但均显著快于Ⅰ号、Ⅱ号培养基。从菌丝生长势和菌丝颜色来看，Ⅴ号培养基菌丝洁白浓密、生长势最好，Ⅰ号、Ⅲ号培养基菌丝较白、生长势较好，Ⅱ号、Ⅳ号培养基菌丝灰白、生长势较差。 不同培养基菌丝污染率由低到高为Ⅳ号<Ⅲ号<Ⅱ号<Ⅰ号<Ⅴ号，Ⅳ号培养基污染率最低，其次是Ⅲ号培养基，且Ⅲ号、Ⅳ号培养基污染率显著低于其他培养基。从菌丝长速、生长势、污染率和菌丝色泽综合起来比较，Ⅲ号培养基菌丝长速最快、污染率低，为金福菇最佳原种培养基。
金福菇菌丝在不同原种培养基上生长速度及生长势比较
培养基生长速度
（cm/d）菌丝生长势菌丝色泽污染率
（%）Ⅲ号Ⅴ号Ⅳ号Ⅰ号Ⅱ号0.18a0.17a0.16ab0.15b0.11c+++++++++]++++++较白洁白灰白较白灰白9d35a8d20b15bc
3结论与讨论
金福菇母种培养基比较试验结果表明，金福菇在添加牛粪的草腐菌母种培养基上长势明显好于其他培养基，菌丝长速也较快。试验又设计了添加不同比例的牛粪量进一步对金福菇母种培养基进行筛选，筛选出配方中加入40 g的牛粪和微量元素使金福菇菌丝的生长速度最快，长势也较好；但试验中牛粪添加量设计梯度为10 g，需进一步设计将牛粪添加量梯度降为5 g进行试验。
金福菇原种阶段试验结果表明，金福菇的最适原种培养基为小麦籽粒+石膏的配方。加牛粪的培养基虽然生长速度也较快，生长势也最好，但是可能由于牛粪含氮量高，添加牛粪后氮源过多，培养料抗杂菌能力差，污染率升高[8]，所以该配方不适于生产。但可进一步降低牛粪添加量，或将牛粪和秸秆腐熟后再添加，以降低污染率，此结论需进一步试验进行验证。
参考文献：
[1]王桂芹，王志. 金福菇菌株间品比试验[J]. 中国林副特产，2008（2）：32-34.
[2]项寿南，郑巧平，刘德云，等. 金福菇栽培技术要点探讨[J]. 食用菌，2008，30（3）：48-48.
[3]高珠清. 巨大口蘑优质高产栽培技术[J]. 食用菌，2004，26（5）：33.
[4]刘鸿高，李涛，王元忠.不同培养基对巨大口蘑菌丝生长的影响[J]. 中国食用菌，2006，25（6）：34-35.
[5]刘鸿高，沙本才，张红粉，等. 大白口蘑生物学特性研究[J]. 中国食用菌，2007，26（1）：46-49.
[6]姚太梅. 平菇单孢杂交及后代筛选[D]. 保定：河北农业大学，2008：13-15.
[7]王贺祥，李明. 食用菌栽培学[M]. 北京：中国农业大学出版社，2008：42.
[8]田景花，杨旭，李明，等. 黄伞菌种培养基配方筛选研究[J]. 北方园艺，2013（2）：137-140.黄文娟，张越，梁继业，等. 光-温耦合条件对3种豆科植物种子萌发特性的影响[J]. 江苏农业科学，2014，42（6）：234-237.endprint
菌丝生长速度（mm/d）=培养料高度（mm）/满瓶时间（d）。
2结果与分析
2.1母种培养基配方筛选试验
2.1.1母种培养基配方初筛结果从表1可以看出，金福菇菌丝在不同配方的母种培养基上均能生长，但生长速度和长势不同。不同母种培养基上菌丝生长由快到慢的顺序为F>A>E>D>B>C，F与A培养基生长最快且两者差异不显著，而B、C菌丝长速最慢且极显著慢于F、A培养基配方。从菌丝颜色和长势来看，D、F培养基的菌丝洁白、浓密，生长势最好，A培养基的菌丝灰白、稀疏，生长势最差。
金福菇菌丝在不同母种培养基上的生长速度及生长势比较
培养基生长速度
（cm/d）菌丝生长势菌丝色泽差异显著性0.050.01FAEDBC0.2700.2600.2550.2450.2450.240++++++++++++++++++洁白灰白洁白洁白白洁白aabbcbcccAABBCBCCC注：“++++”菌丝浓密，“+++”菌丝较浓密，“++”菌丝一般，“+”菌丝稀疏。
2.1.2母种培养基配方的复筛结果通过初筛F培养基为最佳培养基，其次是D培养基，在D、F培养基基础上，进一步调整牛粪的添加量，进行配方设计，试验结果见表2。从表2可以看出，金福菇菌丝在不同比例牛粪母种培养基上，除1号培养基生长势较差外，其他几种配方在菌丝密度、色泽、生长势等方面差异均不明显；4号培养基菌丝长速最快，并显著快于其他培养基配方，其次为3号、6号培养基菌丝长速较快，4号牛粪母种培养基最适宜金福菇菌丝的生长。
金福菇不同母种复筛培养基的生长速度及生长势比较
培养基生长速度
（cm/d）菌丝生长势菌丝色泽差异显著性0.050.014号3号6号1号2号5号0.300.280.280.260.250.24+++++++++++++++++++++++洁白洁白洁白洁白洁白洁白abbbcccAABABBBB注同表1。
2.2原种培养基配方筛选结果
，金福菇菌丝体在不同原种培养基上生长有所差异。菌丝长速由快到慢依次为Ⅲ号>Ⅴ号>Ⅳ号>Ⅰ号>Ⅱ号，且Ⅲ号、Ⅴ号、Ⅳ号原种培养基菌丝生长速度均较快，三者之间无显著性差异，但均显著快于Ⅰ号、Ⅱ号培养基。从菌丝生长势和菌丝颜色来看，Ⅴ号培养基菌丝洁白浓密、生长势最好，Ⅰ号、Ⅲ号培养基菌丝较白、生长势较好，Ⅱ号、Ⅳ号培养基菌丝灰白、生长势较差。 不同培养基菌丝污染率由低到高为Ⅳ号<Ⅲ号<Ⅱ号<Ⅰ号<Ⅴ号，Ⅳ号培养基污染率最低，其次是Ⅲ号培养基，且Ⅲ号、Ⅳ号培养基污染率显著低于其他培养基。从菌丝长速、生长势、污染率和菌丝色泽综合起来比较，Ⅲ号培养基菌丝长速最快、污染率低，为金福菇最佳原种培养基。
金福菇菌丝在不同原种培养基上生长速度及生长势比较
培养基生长速度
（cm/d）菌丝生长势菌丝色泽污染率
（%）Ⅲ号Ⅴ号Ⅳ号Ⅰ号Ⅱ号0.18a0.17a0.16ab0.15b0.11c+++++++++]++++++较白洁白灰白较白灰白9d35a8d20b15bc
3结论与讨论
金福菇母种培养基比较试验结果表明，金福菇在添加牛粪的草腐菌母种培养基上长势明显好于其他培养基，菌丝长速也较快。试验又设计了添加不同比例的牛粪量进一步对金福菇母种培养基进行筛选，筛选出配方中加入40 g的牛粪和微量元素使金福菇菌丝的生长速度最快，长势也较好；但试验中牛粪添加量设计梯度为10 g，需进一步设计将牛粪添加量梯度降为5 g进行试验。
金福菇原种阶段试验结果表明，金福菇的最适原种培养基为小麦籽粒+石膏的配方。加牛粪的培养基虽然生长速度也较快，生长势也最好，但是可能由于牛粪含氮量高，添加牛粪后氮源过多，培养料抗杂菌能力差，污染率升高[8]，所以该配方不适于生产。但可进一步降低牛粪添加量，或将牛粪和秸秆腐熟后再添加，以降低污染率，此结论需进一步试验进行验证。
参考文献：
[1]王桂芹，王志. 金福菇菌株间品比试验[J]. 中国林副特产，2008（2）：32-34.
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[5]刘鸿高，沙本才，张红粉，等. 大白口蘑生物学特性研究[J]. 中国食用菌，2007，26（1）：46-49.
[6]姚太梅. 平菇单孢杂交及后代筛选[D]. 保定：河北农业大学，2008：13-15.
[7]王贺祥，李明. 食用菌栽培学[M]. 北京：中国农业大学出版社，2008：42.
[8]田景花，杨旭，李明，等. 黄伞菌种培养基配方筛选研究[J]. 北方园艺，2013（2）：137-140.黄文娟，张越，梁继业，等. 光-温耦合条件对3种豆科植物种子萌发特性的影响[J]. 江苏农业科学，2014，42（6）：234-237.endprint
菌丝生长速度（mm/d）=培养料高度（mm）/满瓶时间（d）。
2结果与分析
2.1母种培养基配方筛选试验
2.1.1母种培养基配方初筛结果从表1可以看出，金福菇菌丝在不同配方的母种培养基上均能生长，但生长速度和长势不同。不同母种培养基上菌丝生长由快到慢的顺序为F>A>E>D>B>C，F与A培养基生长最快且两者差异不显著，而B、C菌丝长速最慢且极显著慢于F、A培养基配方。从菌丝颜色和长势来看，D、F培养基的菌丝洁白、浓密，生长势最好，A培养基的菌丝灰白、稀疏，生长势最差。
金福菇菌丝在不同母种培养基上的生长速度及生长势比较
培养基生长速度
（cm/d）菌丝生长势菌丝色泽差异显著性0.050.01FAEDBC0.2700.2600.2550.2450.2450.240++++++++++++++++++洁白灰白洁白洁白白洁白aabbcbcccAABBCBCCC注：“++++”菌丝浓密，“+++”菌丝较浓密，“++”菌丝一般，“+”菌丝稀疏。
2.1.2母种培养基配方的复筛结果通过初筛F培养基为最佳培养基，其次是D培养基，在D、F培养基基础上，进一步调整牛粪的添加量，进行配方设计，试验结果见表2。从表2可以看出，金福菇菌丝在不同比例牛粪母种培养基上，除1号培养基生长势较差外，其他几种配方在菌丝密度、色泽、生长势等方面差异均不明显；4号培养基菌丝长速最快，并显著快于其他培养基配方，其次为3号、6号培养基菌丝长速较快，4号牛粪母种培养基最适宜金福菇菌丝的生长。
金福菇不同母种复筛培养基的生长速度及生长势比较
培养基生长速度
（cm/d）菌丝生长势菌丝色泽差异显著性0.050.014号3号6号1号2号5号0.300.280.280.260.250.24+++++++++++++++++++++++洁白洁白洁白洁白洁白洁白abbbcccAABABBBB注同表1。
2.2原种培养基配方筛选结果
，金福菇菌丝体在不同原种培养基上生长有所差异。菌丝长速由快到慢依次为Ⅲ号>Ⅴ号>Ⅳ号>Ⅰ号>Ⅱ号，且Ⅲ号、Ⅴ号、Ⅳ号原种培养基菌丝生长速度均较快，三者之间无显著性差异，但均显著快于Ⅰ号、Ⅱ号培养基。从菌丝生长势和菌丝颜色来看，Ⅴ号培养基菌丝洁白浓密、生长势最好，Ⅰ号、Ⅲ号培养基菌丝较白、生长势较好，Ⅱ号、Ⅳ号培养基菌丝灰白、生长势较差。 不同培养基菌丝污染率由低到高为Ⅳ号<Ⅲ号<Ⅱ号<Ⅰ号<Ⅴ号，Ⅳ号培养基污染率最低，其次是Ⅲ号培养基，且Ⅲ号、Ⅳ号培养基污染率显著低于其他培养基。从菌丝长速、生长势、污染率和菌丝色泽综合起来比较，Ⅲ号培养基菌丝长速最快、污染率低，为金福菇最佳原种培养基。
金福菇菌丝在不同原种培养基上生长速度及生长势比较
培养基生长速度
（cm/d）菌丝生长势菌丝色泽污染率
（%）Ⅲ号Ⅴ号Ⅳ号Ⅰ号Ⅱ号0.18a0.17a0.16ab0.15b0.11c+++++++++]++++++较白洁白灰白较白灰白9d35a8d20b15bc
3结论与讨论
金福菇母种培养基比较试验结果表明，金福菇在添加牛粪的草腐菌母种培养基上长势明显好于其他培养基，菌丝长速也较快。试验又设计了添加不同比例的牛粪量进一步对金福菇母种培养基进行筛选，筛选出配方中加入40 g的牛粪和微量元素使金福菇菌丝的生长速度最快，长势也较好；但试验中牛粪添加量设计梯度为10 g，需进一步设计将牛粪添加量梯度降为5 g进行试验。
金福菇原种阶段试验结果表明，金福菇的最适原种培养基为小麦籽粒+石膏的配方。加牛粪的培养基虽然生长速度也较快，生长势也最好，但是可能由于牛粪含氮量高，添加牛粪后氮源过多，培养料抗杂菌能力差，污染率升高[8]，所以该配方不适于生产。但可进一步降低牛粪添加量，或将牛粪和秸秆腐熟后再添加，以降低污染率，此结论需进一步试验进行验证。
参考文献：
[1]王桂芹，王志. 金福菇菌株间品比试验[J]. 中国林副特产，2008（2）：32-34.
[2]项寿南，郑巧平，刘德云，等. 金福菇栽培技术要点探讨[J]. 食用菌，2008，30（3）：48-48.
[3]高珠清. 巨大口蘑优质高产栽培技术[J]. 食用菌，2004，26（5）：33.
[4]刘鸿高，李涛，王元忠.不同培养基对巨大口蘑菌丝生长的影响[J]. 中国食用菌，2006，25（6）：34-35.
[5]刘鸿高，沙本才，张红粉，等. 大白口蘑生物学特性研究[J]. 中国食用菌，2007，26（1）：46-49.
[6]姚太梅. 平菇单孢杂交及后代筛选[D]. 保定：河北农业大学，2008：13-15.
[7]王贺祥，李明. 食用菌栽培学[M]. 北京：中国农业大学出版社，2008：42.
[8]田景花，杨旭，李明，等. 黄伞菌种培养基配方筛选研究[J]. 北方园艺，2013（2）：137-140.黄文娟，张越，梁继业，等. 光-温耦合条件对3种豆科植物种子萌发特性的影响[J]. 江苏农业科学，2014，42（6）：234-237.endprint
